动物实验的常用技术课件

第三章第三章 动物实验的常用技术动物实验的常用技术.1第三章.1随着科学技术的发展随着科学技术的发展,动物实验已成为医药学动物实验已成为医药学研究的重要手段。不同学科使用实验动物的目的研究的重要手段。不同学科使用实验动物的目的可能不同可能不同,但动物实验中一些基本操作技术具有共但动物实验中一些基本操作技术具有共性。性。动物实验的操作技术已成为科研和教学中的重动物实验的操作技术已成为科研和教学中的重要手段要手段,操作正确操作正确与否与否,直接影响实验结果直接影响实验结果。因此。因此,掌握动物实验的常用技术十分必要。掌握动物实验的常用技术十分必要。.2随着科学技术的发展,动物实验已成为医药学研究的重要手本章主要介绍使用小鼠、大鼠、家兔、豚鼠、本章主要介绍使用小鼠、大鼠、家兔、豚鼠、猫、狗等进行实验的一些常用操作技术。猫、狗等进行实验的一些常用操作技术。.3本章主要介绍使用小鼠、大鼠、家兔、豚鼠、猫、狗等大鼠大鼠.4大鼠.4小鼠小鼠昆明小鼠昆明小鼠ICR小鼠小鼠.5小鼠昆明小鼠ICR小鼠.5家兔家兔.6家兔.6(日本日本)大耳白兔大耳白兔.7(日本)大耳白兔.7 豚鼠豚鼠.8豚鼠.8比格犬比格犬(BeagleBeagle犬犬).9比格犬(Beagle犬).9第一节第一节 实验动物的抓取与固定实验动物的抓取与固定.10第一节.10 抓取与固定动物的抓取与固定动物的目的目的:使动物安静状态便于使动物安静状态便于进行各项实验。抓取与固定动物原则进行各项实验。抓取与固定动物原则:保证实验保证实验人员安全人员安全,防止动物意外损伤防止动物意外损伤,禁止采取粗暴的动禁止采取粗暴的动作。作。稳、准、牢稳、准、牢,但不狠。但不狠。抓取固定的方法依动物种类而定抓取固定的方法依动物种类而定,抓取固定前抓取固定前,须对所用动物的习性有所了解须对所用动物的习性有所了解,操作时既要小心仔操作时既要小心仔细细,又要大胆敏捷。又要大胆敏捷。.11抓取与固定动物的目的:使动物安静状态便于进行各项实验。抓取一、小鼠的抓取与固定一、小鼠的抓取与固定 小小鼠鼠属属于于小小型型啮啮齿齿类类动动物物,性性情情比比较较温温顺顺,易易于于抓抓捕捕,一一般般不不主主动动咬咬人人。不不论论采采用用什什么么方方法法抓抓取取时时都都要要注注意意,如如过过分分用用力力,会会使使小小鼠鼠窒窒息息或或颈颈椎椎脱脱臼臼;但但用用力力太太小小,小小鼠鼠头头部部能能反反转转过过来咬人。来咬人。.12一、小鼠的抓取与固定.12.13.13.14.14 当当进进行行解解剖剖和和手手术术等等操操作作时时,必必须须固固定定小小鼠鼠.首首先先仰仰卧卧位位(必必要要时时先先麻麻醉醉)四四肢肢和和两两上上门门齿齿固固定定在在小小鼠鼠固固定定板板上上。如如不不麻麻醉醉,可可将将小小鼠鼠放放入入固定架里固定架里,固定好架的封口。固定好架的封口。如进行小鼠尾静脉注射或采血时如进行小鼠尾静脉注射或采血时,将小鼠装将小鼠装入小鼠固定盒内或扣在烧杯内入小鼠固定盒内或扣在烧杯内,使其尾巴外露进使其尾巴外露进行操作。行操作。.15当进行解剖和手术等操作时,必须固定小鼠.首先仰卧位(.16.16二、大鼠的抓取与固定二、大鼠的抓取与固定 大大鼠鼠牙牙齿齿尖尖利利,性性情情较较凶凶猛猛,一一旦旦被被咬咬损损伤伤较较大大,故抓取时须小心故抓取时须小心,可戴棉线手套。可戴棉线手套。抓取方法同小鼠。抓取方法同小鼠。.17二、大鼠的抓取与固定.17用左手？用左手？用右手？用右手？.18用左手？.18当当进进行行心心脏脏采采血血、解解剖剖和和手手术术等等操操作作时时,必必须须固固定大鼠。定大鼠。麻麻醉醉仰仰卧卧位位用用线线绳绳将将四四肢肢及及上上门门齿齿固固定定在在固定板上。固定板上。如如不不麻麻醉醉,可可将将大大鼠鼠置置于于固固定定架架里里,固固定定好好架架的的封封口。口。如如需需进进行行尾尾静静脉脉采采血血或或注注射射时时,可可将将大大鼠鼠置置于于固固定器内定器内,使鼠尾留在外面进行操作。使鼠尾留在外面进行操作。.19当进行心脏采血、解剖和手术等操作时,必须固定大鼠。.19三、豚鼠的抓取与固定三、豚鼠的抓取与固定 豚鼠性情温和，一般不伤人，但胆小易惊，豚鼠性情温和，一般不伤人，但胆小易惊，抓取时必须稳、准和迅速。抓取时必须稳、准和迅速。成年豚鼠用左手迅速抓住鼠背肩胛上方成年豚鼠用左手迅速抓住鼠背肩胛上方,以拇以拇指和食指形成的环握住颈部指和食指形成的环握住颈部,用另一只手托住臀用另一只手托住臀部即可。部即可。.20三、豚鼠的抓取与固定.20.21.21 豚鼠另一种抓取方法：把左手的食指和中指豚鼠另一种抓取方法：把左手的食指和中指放在颈背部的两侧放在颈背部的两侧,拇指和无名指放在肋部拇指和无名指放在肋部,分分别用手指夹住左右前肢抓起来。反转左手别用手指夹住左右前肢抓起来。反转左手,用右用右手的拇指和食指夹住左右后肢手的拇指和食指夹住左右后肢,使鼠体伸直成一使鼠体伸直成一条直线。其他方法可参考大鼠的操作。条直线。其他方法可参考大鼠的操作。.22豚鼠另一种抓取方法：把左手的食指和中指放在颈背部的两侧,四、家兔的抓取与固定四、家兔的抓取与固定家兔体小力弱家兔体小力弱,胆小怕惊胆小怕惊,易于驯服易于驯服,一般一般不会咬人不会咬人,但脚爪较锐利。但脚爪较锐利。抓取家兔抓取家兔颈背部的皮颈背部的皮左手托住臀部左手托住臀部,使重使重量集中在左手上。量集中在左手上。避免用手抓避免用手抓兔耳兔耳提起提起,因兔挣扎因兔挣扎,容易抓不稳容易抓不稳脱手而摔伤动物。脱手而摔伤动物。.23四、家兔的抓取与固定.23.24.24.25.25.26.26家兔的固定分为家兔的固定分为盒式盒式及及台式台式两种：两种：盒式固定器盒式固定器:注射、采血用注射、采血用 台式固定器台式固定器:作呼吸、血压测定和手术时用作呼吸、血压测定和手术时用 经口给药时经口给药时,可用手固定方法是：可用手固定方法是：.27家兔的固定分为盒式及台式两种：.27.28.28.29.29五、犬的抓取与固定五、犬的抓取与固定 犬犬性性情情凶凶恶恶、咬咬人人,但但通通人人性性.抓抓取取前前最最好好先先进进行驯服行驯服.驯服的犬更容易抓取。驯服的犬更容易抓取。抓取时抓取时,首先抚摸犬颈背部皮肤首先抚摸犬颈背部皮肤,然后然后.30五、犬的抓取与固定.30.31.31.32.32.33.33在进行静脉注射和采血时在进行静脉注射和采血时,可将犬放在操可将犬放在操作台上。作台上。头部头部头固定器。四肢固定法与家兔相同。头固定器。四肢固定法与家兔相同。.34在进行静脉注射和采血时,可将犬放在操作台上。.35.35.36.36六、猕猴的抓取与固定六、猕猴的抓取与固定 在小笼内者用短柄网罩捕在小笼内者用短柄网罩捕在室内或大笼内捕捉时在室内或大笼内捕捉时,用长柄网罩。用长柄网罩。最好一次罩住最好一次罩住,受惊吓后第二次捕捉更为困难。受惊吓后第二次捕捉更为困难。.37六、猕猴的抓取与固定.37.38.38第二节第二节实验动物随机分组、编号及标记实验动物随机分组、编号及标记.39第二节.39 在实验中为了观察各个动物的情况在实验中为了观察各个动物的情况,实验前必实验前必须对实验动物进行随机分组并编号、标记须对实验动物进行随机分组并编号、标记,使实使实验者能识别每一只动物。验者能识别每一只动物。一、随机分组方法一、随机分组方法 实验设计的基本原则：随机、对照、重复实验设计的基本原则：随机、对照、重复等等,主要是统计学设计问题，将在开设的主要是统计学设计问题，将在开设的“实实验药理学验药理学”课程中讲述课程中讲述,这里只简要介绍随机这里只简要介绍随机分组和对照的基本概念。分组和对照的基本概念。.40在实验中为了观察各个动物的情况,实验前必须对实验动物进行随1.1.随机分组的原则随机分组的原则 统计学要求若干实验统计学要求若干实验组的条件都应完全相同组的条件都应完全相同,但事实上不可能完全但事实上不可能完全做到。做到。减少差异的办法：实行严格减少差异的办法：实行严格随机分组随机分组原则原则,而不受主观意愿因素的影响。而不受主观意愿因素的影响。随机分组的具体方法：抽签、摸球、掷硬随机分组的具体方法：抽签、摸球、掷硬币等币等,最好使用随机数字表。最好使用随机数字表。.411.随机分组的原则统计学要求若干实验组的条件都应2.2.对照的作用对照的作用 减少和抵消非处理因素的干减少和抵消非处理因素的干扰扰,以便分析处理因素的作用。以便分析处理因素的作用。对照的形式：空白对照、实验对照、配对对对照的形式：空白对照、实验对照、配对对照、标准对照等。照、标准对照等。.422.对照的作用减少和抵消非处理因素的干扰,以便二、实验动物的编号及标记二、实验动物的编号及标记(一一)小鼠及大鼠小鼠及大鼠一一般般用用染染料料涂涂抹抹被被毛毛进进行行标标记记，常常用用的的涂涂染染药药品品有：有：红色红色:0.5%0.5%中性红或品红溶液。中性红或品红溶液。黄黄色色:3%:3%5%5%苦苦味味酸酸溶溶液液或或80%80%90%90%苦苦味味酸酸酒酒 精饱和液。精饱和液。咖啡色咖啡色：2%2%硝酸银溶液。硝酸银溶液。黑黑 色：煤焦油的酒精溶液色：煤焦油的酒精溶液;蓝黑墨水。蓝黑墨水。.43二、实验动物的编号及标记.43 最常使用最常使用苦味酸酒精饱和溶液苦味酸酒精饱和溶液 涂抹方法：涂抹方法：毛根部毛根部 对在同一笼内的鼠对在同一笼内的鼠,采用采用从前到后从前到后,先左后右先左后右的编号原则。的编号原则。一般一个鼠笼内饲养一般一个鼠笼内饲养5 5、6 6只鼠时只鼠时,即可标记即可标记为为.44最常使用苦味酸酒精饱和溶液.44左前腿左前腿1右前腿右前腿2左后腿左后腿3右后腿右后腿4头头5尾尾部部6.45左前腿1.45 鼠数量再多时鼠数量再多时,也可使用背部及左、右腰也可使用背部及左、右腰部等处。部等处。不同的组别使用不同的颜色加以区分。当不同的组别使用不同的颜色加以区分。当组别多时组别多时,再配合其他颜色，重复使用上述再配合其他颜色，重复使用上述的标记的标记,以此类推。以此类推。.46鼠数量再多时,也可使用背部及左、右腰部等处。另一种标记法:左前腿左前腿 1 1左腰部左腰部 2 2左后腿左后腿 3 3头头 部部 4 4背背 部部 5 5尾根部尾根部 6 6右前腿右前腿 7 7右腰部右腰部 8 8右后腿右后腿 9 9.47另一种标记法:左前腿1左腰部2左后腿3头部 若动物编号超过若动物编号超过1010或更大数字时或更大数字时,可使用可使用两种不同颜色的染料两种不同颜色的染料,如把红色定为十位数如把红色定为十位数,黄色定为个位数。黄色定为个位数。例如在左前腿上标记红色和黄色斑点，表例如在左前腿上标记红色和黄色斑点，表示为示为11;11;头顶红色斑点，右后腿黄色斑点，头顶红色斑点，右后腿黄色斑点，则表示则表示4949号，依次类推。号，依次类推。.48若动物编号超过10或更大数字时,可使用两种不同颜 小鼠还可用耳打孔或剪耳缘法来标记号小鼠还可用耳打孔或剪耳缘法来标记号码。码。也可以用足指切断法来标记号码。也可以用足指切断法来标记号码。.49小鼠还可用耳打孔或剪耳缘法来标记号码。.49(二二)家兔及豚鼠家兔及豚鼠 1.1.烙烙印印法法 用用号号码码烙烙印印钳钳,烙烙印印在在兔兔、豚豚鼠鼠的的耳耳朵朵上上。烙烙印印前前消消毒毒耳耳朵朵,烙烙印印后后涂涂抹抹溶溶于于酒精的黑墨或煤烟。酒精的黑墨或煤烟。2.2.染色法染色法 染色剂同小鼠、大鼠的染色法。染色剂同小鼠、大鼠的染色法。另一方法是用另一方法是用2%2%硝酸银溶液，在动物右侧背部硝酸银溶液，在动物右侧背部涂写上号码。涂写后在日光下暴露涂写上号码。涂写后在日光下暴露1010minmin左右左右,可见清晰的咖啡色号码。可见清晰的咖啡色号码。.50(二)家兔及豚鼠2.染色法染色剂同小鼠、3.3.耳耳孔孔法法 专专用用打打孔孔机机,兔兔耳耳打打一一小小孔孔.用用滑滑石粉抹在打孔局部防止孔口愈合。石粉抹在打孔局部防止孔口愈合。(三三)犬犬 将号码打在金属牌上将号码打在金属牌上,固定在犬颈的链条上。固定在犬颈的链条上。也可在犬右前背部的皮毛上剪出号码。此法编号也可在犬右前背部的皮毛上剪出号码。此法编号清楚、可靠清楚、可靠,便于观察。便于观察。.513.耳孔法专用打孔机,兔耳打一小孔.用滑石粉抹在第三节第三节实验动物被毛的去除方法实验动物被毛的去除方法.52第三节.52 有些操作需要去除动物局部的被毛有些操作需要去除动物局部的被毛.去除的方去除的方法有法有机械法机械法、化学法化学法和和拔毛法拔毛法。机械法又分剪毛。机械法又分剪毛法和剃毛法法和剃毛法,前者需用弯头手术剪前者需用弯头手术剪,后者需剃毛刀后者需剃毛刀或电动剃刀。化学法需预先准备好脱毛剂。或电动剃刀。化学法需预先准备好脱毛剂。.53有些操作需要去除动物局部的被毛.去除的方法有机械法、化学法(一一)剪毛法剪毛法 为最常用的方法。为最常用的方法。固定动物固定动物用水湿润剪毛部位用水湿润剪毛部位用手指用手指绷紧绷紧局部皮肤局部皮肤用弯头手术剪紧贴动物皮肤用弯头手术剪紧贴动物皮肤,按序按序将被毛剪去。将被毛剪去。注意注意不能用手提着皮剪毛不能用手提着皮剪毛,否则易剪破皮肤。否则易剪破皮肤。.54(一)剪毛法为最常用的方法。固定动物用水湿(二二)剃毛法剃毛法 在大动物常采用在大动物常采用 温肥皂水浸润局部被毛温肥皂水浸润局部被毛用剃刀顺被毛方用剃刀顺被毛方向向剃毛。剃毛。用电动剃刀用电动剃刀,则逆被毛方向剃毛。则逆被毛方向剃毛。(三三)拔毛法拔毛法兔耳缘静脉注射或采血时常用。兔耳缘静脉注射或采血时常用。固定动物固定动物用手指拔去局部被毛。用手指拔去局部被毛。.55(二)剃毛法.55（四）脱毛法（四）脱毛法此种方法常用于局部皮肤刺激实验、观察局部此种方法常用于局部皮肤刺激实验、观察局部血循环或其他各种病理变化时。血循环或其他各种病理变化时。常用脱毛剂有：常用脱毛剂有：碱类：硫化钠、硫化钙、硫化锶、硫化钡、三硫化二碱类：硫化钠、硫化钙、硫化锶、硫化钡、三硫化二砷。目前市场上一些脱毛化妆品砷。目前市场上一些脱毛化妆品,对动物也有较好的脱对动物也有较好的脱毛效果毛效果,如四肢净肤露、脱毛霜、特效脱毛露等。如四肢净肤露、脱毛霜、特效脱毛露等。.56（四）脱毛法常用脱毛剂有：.56第四节第四节实验动物的麻醉方法实验动物的麻醉方法.57第四节.57 为了使动物保持安静，便于顺利完成操作，为了使动物保持安静，便于顺利完成操作，同时也由于伦理学的原因，在进行动物实验时同时也由于伦理学的原因，在进行动物实验时,常对动物进行必要的麻醉。常对动物进行必要的麻醉。.58为了使动物保持安静，便于顺利完成操作，同时也由于伦理学的原麻醉麻醉局部麻醉局部麻醉 全身麻醉全身麻醉 气体吸入气体吸入 注射麻醉注射麻醉麻醉方式、麻醉剂及麻醉剂量的选用麻醉方式、麻醉剂及麻醉剂量的选用,依依实验目的、动物种类、年龄和动物健康状实验目的、动物种类、年龄和动物健康状况不同而异况不同而异(表表3-1)3-1)。.59麻醉局部麻醉全身麻醉一、全身麻醉一、全身麻醉(一一)气体吸入法气体吸入法 多多选选用用乙乙醚醚，其其优优点点是是安安全全范范围围大大，肌肌肉肉能能完完全全松松驰驰，对对肝肝和和肾肾毒毒性性小小，麻麻醉醉的的诱诱导导期期和和苏苏醒醒期期较较长长，但但副副作作用用是是对对呼呼吸吸道道黏黏膜膜刺刺激激性性强强，胃肠道反应发生率较高。胃肠道反应发生率较高。.60一、全身麻醉.60.61.61在麻醉大小鼠、家兔和猫时，可将动物放入在麻醉大小鼠、家兔和猫时，可将动物放入一透明密闭的玻璃容器内，底部置浸过乙醚的脱一透明密闭的玻璃容器内，底部置浸过乙醚的脱脂棉。经过脂棉。经过1 12 2 minmin左右左右,从从后肢开始后肢开始麻痹麻痹,逐渐逐渐进入麻醉状态。约进入麻醉状态。约4 46 6 minmin后后,动物倒下即进入动物倒下即进入深麻醉期。此时立即取出动物深麻醉期。此时立即取出动物,动物肌肉松弛，动物肌肉松弛，角膜反射迟钝，皮肤痛觉消失角膜反射迟钝，皮肤痛觉消失,可以进行实验操可以进行实验操作。作。.62在麻醉大小鼠、家兔和猫时，可将动物放入一透明密闭的玻璃乙醚补充麻醉乙醚补充麻醉.63乙醚补充麻醉.63兔和猫乙醚麻醉箱兔和猫乙醚麻醉箱.64兔和猫乙醚麻醉箱.64(二二)腹腔或静脉给药麻醉腹腔或静脉给药麻醉 多选用多选用戊巴比妥钠戊巴比妥钠,操作简单操作简单,常用。常用。腹腹腔腔给给药药麻麻醉醉多多用用于于小小鼠鼠、大大鼠鼠、豚豚鼠鼠、沙沙鼠。大鼠用戊巴比妥钠鼠。大鼠用戊巴比妥钠,45,45mg/kgmg/kg，ipip 静脉给药静脉给药麻醉多用于家兔、狗较大的动物。麻醉多用于家兔、狗较大的动物。表表3-13-1列出吸入非麻醉药的剂量和用法列出吸入非麻醉药的剂量和用法.65(二)腹腔或静脉给药麻醉表3-1列出吸入非麻醉药的剂量和用二、局部麻醉二、局部麻醉 方方法法很很多多，有有表表面面麻麻醉醉、浸浸润润麻麻醉醉和和阻阻断断麻麻醉醉等等，使使用用最最多多的的是是浸浸润润麻麻醉醉。即即将将麻麻醉醉药药注注射射于于皮皮内内、皮皮下下组组织织或或手手术术野野深深部部组组织织,以以阻阻断断局局部部的的神神经经传传导导，使使痛痛觉觉消消失失。常常用用的的局局部部麻醉剂有以下几种：麻醉剂有以下几种：.66二、局部麻醉.66 1.1.盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因 盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因(procaine),procaine),安全安全,显效快显效快,但失效也快。注射后但失效也快。注射后1 13 3min min 内产内产生麻醉生麻醉,可维持可维持303045 45 minmin。其副作用是在大量药。其副作用是在大量药物被吸收后物被吸收后,表现出中枢神经系统先兴奋后抑制。表现出中枢神经系统先兴奋后抑制。此种副作用可用巴比妥类药物预防。此种副作用可用巴比妥类药物预防。.671.盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因(procaine),2.2.丁丁卡卡因因 丁丁卡卡因因（dicaindicain）局局部部麻麻醉醉效效力力比比普普鲁鲁卡卡因因强强1010倍倍,吸吸收收的的毒毒性性作作用用也也相相应应增增强强,能能穿穿透透粘粘膜膜,作作用用迅迅速速,1 13 3 minmin发发生生作作用用,持持续续606090 90 minmin。3.3.利多卡因利多卡因 利多卡因（利多卡因（lidocainlidocain）起效快起效快,作用强而持久作用强而持久,穿透力也较强穿透力也较强.常用于表面、浸润、常用于表面、浸润、传导麻醉和硬脊膜外腔麻醉传导麻醉和硬脊膜外腔麻醉,通常用通常用0.5%0.5%1%1%的浓的浓度。度。.682.丁卡因丁卡因（dicain）局部麻醉效第五节第五节实验动物的给药途径与方法实验动物的给药途径与方法.69第五节.69最常用的给药方法：最常用的给药方法：经口法给药经口法给药 注射法给药注射法给药 其他给药方法其他给药方法.70最常用的给药方法：经口法给药注射法给药一、经口给药法一、经口给药法经口给药分自动口服给药和灌胃给药两种方式：经口给药分自动口服给药和灌胃给药两种方式：1.1.自动口服给药自动口服给药（per osper os，popo）混入饲料或饮混入饲料或饮水水,自动摄取。自动摄取。2.2.灌胃给药灌胃给药（by gavageby gavage）用灌胃器。准确、给用灌胃器。准确、给药时间药量药时间药量,但有机械性损伤和心理影响但有机械性损伤和心理影响,要求熟练要求熟练掌握灌胃技术。掌握灌胃技术。.71一、经口给药法.71.72.72操作前操作前,先大致测从口腔至胃的长度先大致测从口腔至胃的长度,估计灌估计灌胃针头插入的深度。成年动物灌胃针插入食道的胃针头插入的深度。成年动物灌胃针插入食道的深度一般是：深度一般是：小鼠小鼠33cmcm 大鼠或豚鼠大鼠或豚鼠55cmcm 家兔家兔1515cmcm 犬犬2020cmcm.73操作前,先大致测从口腔至胃的长度,估计灌胃针头插入的深 操作时用手固定头部操作时用手固定头部动物保持垂直体位动物保持垂直体位强强迫张口迫张口灌胃针的前端放进口腔灌胃针的前端放进口腔压舌根压舌根顺上顺上腭插入咽部腭插入咽部沿咽后壁沿咽后壁插入食道。插入食道。操作时应注意动物的反应操作时应注意动物的反应,插灌胃针勿太猛。插灌胃针勿太猛。.74操作时用手固定头部动物保持垂直体位强迫张口灌.75.75.76.76.77.77二、注射给药法二、注射给药法动物注射给药方法有：动物注射给药方法有：皮内注射、皮下注射、肌内注射、静脉注射、皮内注射、皮下注射、肌内注射、静脉注射、腹腔注射等。腹腔注射等。.78二、注射给药法(一一)皮内注射皮内注射 皮内注射（皮内注射（intradermal injectionintradermal injection，idid）是是将药液注入将药液注入表皮与真皮之间表皮与真皮之间。操作时。操作时,先剪净局先剪净局部被毛部被毛,消毒消毒,用左手的拇指和示指用左手的拇指和示指把皮肤捏成把皮肤捏成皱襞。皱襞。.79(一)皮内注射.79 针头与皮肤呈针头与皮肤呈3030角角,沿皮肤表浅层刺入皮肤沿皮肤表浅层刺入皮肤内。注意使针头的内。注意使针头的横断面朝上横断面朝上;进针要浅进针要浅,避免避免进入皮下。进入皮下。注射成功则在注射处出现白色小皮丘注射成功则在注射处出现白色小皮丘,同时同时因注射部位局部缺血因注射部位局部缺血,皮肤上的毛孔极为明显。皮肤上的毛孔极为明显。注射完毕不要马上拔针注射完毕不要马上拔针,以免药液从针孔漏出。以免药液从针孔漏出。.80针头与皮肤呈30角,沿皮肤表浅层刺入皮肤内。(二二)皮下注射皮下注射皮下注射皮下注射(subcutaneous injection,sc)(subcutaneous injection,sc)是将药物注入真皮之下。是将药物注入真皮之下。.81(二)皮下注射.81操作较为简易操作较为简易,一般用背部、腋下、侧腹或一般用背部、腋下、侧腹或后腿的皮下后腿的皮下.操作时先消毒注射部位操作时先消毒注射部位,提起皮提起皮肤肤,注射针头与皮肤呈钝角角度刺入皮下。注射针头与皮肤呈钝角角度刺入皮下。.82操作较为简易,一般用背部、腋下、侧腹或后腿的皮.83.83(三三)肌内注射肌内注射肌内注射肌内注射(intramuscular injection,im)intramuscular injection,im)肌肉注射肌肉注射,应选择肌肉发达、血管丰富的部位应选择肌肉发达、血管丰富的部位,固固定动物定动物剪去局部位被毛剪去局部位被毛皮肤消毒皮肤消毒注射器与注射器与肌肉成肌肉成6060角角一次刺入肌肉内。一次刺入肌肉内。回抽针栓回抽针栓,如如无无回血回血则可注药则可注药.注射完毕要用手指轻轻按摩注射注射完毕要用手指轻轻按摩注射部位部位,帮助药液吸收。帮助药液吸收。.84(三)肌内注射.84.85.85(四四)腹腔注射腹腔注射（ip）是是小小鼠鼠、大大鼠鼠常常用用的的注注射射方方法法，腹腹膜膜面面积积大大，药液进入腹腔后容易扩散、被吸收。药液进入腹腔后容易扩散、被吸收。小小鼠鼠腹腹腔腔注注射射手手固固定定动动物物腹腹部部朝朝上上,右右手手持持针针,在在下下腹腹部部腹腹白白线线稍稍向向左左的的位位置置,从从下下腹腹部部朝朝头头的的方方向向平平行行刺刺入入皮皮肤肤。针针尖尖穿穿过过腹腹肌肌进进入入腹腹腔腔后后抵抵抗抗感感消消失失。回回抽抽针针栓栓,如如无无血血液液或或异异常常液液体体,可缓慢注入药液。可缓慢注入药液。.86(四)腹腔注射（ip）.86 其他动物可参照此法进行其他动物可参照此法进行 家兔的腹腔注射部位在下腹部近腹白线两家兔的腹腔注射部位在下腹部近腹白线两侧约侧约1 1cmcm处；处；豚鼠、猫的腹腔注射部位与鼠类相同；豚鼠、猫的腹腔注射部位与鼠类相同；狗在腹白线侧边狗在腹白线侧边1 12 2cmcm。.87其他动物可参照此法进行.87.88.88(五五)静脉注射静脉注射静静脉脉注注射射（intravenous intravenous injection,injection,iviv）选选择注射的血管部位。只限于液体。择注射的血管部位。只限于液体。1.1.尾静脉注射尾静脉注射 主要用于大鼠和小鼠。鼠尾主要用于大鼠和小鼠。鼠尾有有3 3条静脉条静脉(上、左、右上、左、右),),其中左、右两侧的静脉其中左、右两侧的静脉较易固定，常被选用。较易固定，常被选用。.89(五)静脉注射.89 夹住尾上下夹住尾上下,使静脉充盈使静脉充盈,托起尾巴托起尾巴,夹住尾夹住尾梢。用梢。用75%75%酒精棉球反复擦拭酒精棉球反复擦拭,消毒、扩张血管及消毒、扩张血管及软化表皮角质。软化表皮角质。右手持连右手持连4 45 5号针头注射器号针头注射器,对准对准血管中央以血管中央以3030角度进针与尾部血管平行的角度刺角度进针与尾部血管平行的角度刺入。入。回抽针栓回抽针栓,如有回血如有回血,慢慢注入药液。注射完慢慢注入药液。注射完毕立即拔出注射针毕立即拔出注射针,用脱脂棉用力压住注射部位。用脱脂棉用力压住注射部位。.90夹住尾上下,使静脉充盈,托起尾巴,夹住尾梢.91.912.2.舌下静脉和阴茎静脉注射舌下静脉和阴茎静脉注射 主要用于大鼠。主要用于大鼠。大鼠大鼠舌下静脉舌下静脉粗大，可用于给药。麻醉粗大，可用于给药。麻醉,拉出舌拉出舌头头,找到舌下静脉找到舌下静脉,直接注入药液。直接注入药液。阴茎静脉阴茎静脉注射注射:将雄性大鼠麻醉将雄性大鼠麻醉,仰卧仰卧,翻开包翻开包皮皮,拉出阴茎拉出阴茎,可沿皮下直接刺入粗大背侧静脉。可沿皮下直接刺入粗大背侧静脉。.922.舌下静脉和阴茎静脉注射主要用于大鼠。大鼠舌下静.93.933.3.耳耳缘缘静静脉脉注注射射 主主要要用用于于家家兔兔、豚豚鼠鼠等等,多多用用外外缘静脉。缘静脉。固固定定动动物物,拔拔去去局局部部位位毛毛，用用酒酒精精棉棉球球反反复复涂涂擦擦耳耳部部边边缘缘静静脉脉区区，并并用用手手指指弹弹动兔耳，使其静脉充盈。动兔耳，使其静脉充盈。前前后后.943.耳缘静脉注射主要用于家兔、豚鼠等,多用外缘静脉用左手指固定耳边缘部分用左手指固定耳边缘部分,右手持注射器尽量右手持注射器尽量从静脉末端刺入从静脉末端刺入,顺血管平行方向刺入顺血管平行方向刺入1 1cmcm。回回抽针栓抽针栓,确定已刺入血管，慢慢注入药液。拔去确定已刺入血管，慢慢注入药液。拔去针头针头,用棉球压迫数分钟。用棉球压迫数分钟。豚鼠也可进行耳缘静脉注射。豚鼠也可进行耳缘静脉注射。.95用左手指固定耳边缘部分,右手持注射器尽量从静脉末端刺入.96.964.4.前肢内侧皮下头静脉或后肢外侧小隐静脉前肢内侧皮下头静脉或后肢外侧小隐静脉注射注射 主要用于狗、猫、豚鼠等。剪去被毛，主要用于狗、猫、豚鼠等。剪去被毛，消毒，用橡皮带绑紧向心端，使血管充盈，从消毒，用橡皮带绑紧向心端，使血管充盈，从静脉的远端刺入针头静脉的远端刺入针头,待有回血待有回血,松开绑带松开绑带,缓缓缓缓注入药液。注入药液。.974.前肢内侧皮下头静脉或后肢外侧小隐静脉注射主要用.98.98.99.995.5.浅背侧趾静脉注射浅背侧趾静脉注射 主要用于大鼠、豚鼠、主要用于大鼠、豚鼠、沙鼠等。沙鼠等。助手将动物呈仰卧位助手将动物呈仰卧位,挟住左后肢的大腿部挟住左后肢的大腿部.消毒后对准扩张的血管中央刺针。消毒后对准扩张的血管中央刺针。.1005.浅背侧趾静脉注射主要用于大鼠、豚鼠、沙鼠等。6.6.股静脉或颈外静脉注射股静脉或颈外静脉注射 用于大鼠、狗的静用于大鼠、狗的静脉注射。脉注射。在麻醉状态下在麻醉状态下,切开皮肤切开皮肤,直接对准静脉直接对准静脉注射。注射。.1016.股静脉或颈外静脉注射用于大鼠、狗的静脉注射。三、涂布给药法三、涂布给药法 为了确定药物经皮肤的吸收作用、局部作用为了确定药物经皮肤的吸收作用、局部作用或致敏作用或致敏作用,需采用涂布皮肤给药方法。需采用涂布皮肤给药方法。大大、小小鼠鼠可可用用浸浸尾尾方方式式,主主要要目目的的是是定定性性判判断药物经皮肤的吸收作用和程度。断药物经皮肤的吸收作用和程度。.102三、涂布给药法.102 先将动物放入固定器内先将动物放入固定器内,露出尾巴露出尾巴,再将尾再将尾巴通过小试管上软木塞小孔巴通过小试管上软木塞小孔,插入装有药液或插入装有药液或受检液体的试管内受检液体的试管内,浸泡浸泡2 26 6 h,h,并观察其中毒并观察其中毒症状。症状。.103先将动物放入固定器内,露出尾巴,再将尾巴通过小 家家兔兔及及豚豚鼠鼠经经皮皮肤肤给给药药的的部部位位常常选选用用脊脊柱柱两两侧侧的的背背部部皮皮肤肤。用用脱脱毛毛剂剂脱脱去去被被毛毛,洗洗净净脱脱毛剂毛剂,放回笼内放回笼内,至少至少24 24 h h后才能进行实验。后才能进行实验。.104家兔及豚鼠经皮肤给药的部位常选用脊柱两侧的背部皮肤 次日次日,将动物固定将动物固定,在脱毛区覆盖一面积相在脱毛区覆盖一面积相仿的钟形玻璃罩仿的钟形玻璃罩,罩底用凡士林和胶布固定封严。罩底用凡士林和胶布固定封严。用移液管沿罩柄加入一定剂量的药液用移液管沿罩柄加入一定剂量的药液,塞紧罩柄塞紧罩柄上口。待受检药液与皮肤充分接触并完全吸收后上口。待受检药液与皮肤充分接触并完全吸收后去除玻璃罩去除玻璃罩(一般一般2 26 6h),h),然后将皮肤表面洗净。然后将皮肤表面洗净。.105次日,将动物固定,在脱毛区覆盖一面积相仿的钟 观察时间视实验需要而定。如果是一般性观察时间视实验需要而定。如果是一般性药物药物,如软膏和各种化妆品如软膏和各种化妆品,可直接涂抹在可直接涂抹在皮肤上皮肤上,药物与皮肤接触的时间根据药物性质药物与皮肤接触的时间根据药物性质和实验要求确定。和实验要求确定。其他给药方法还有气管内、滴鼻、滴眼、其他给药方法还有气管内、滴鼻、滴眼、滴耳、直肠、阴道等途径。滴耳、直肠、阴道等途径。.106观察时间视实验需要而定。如果是一般性药物,如软四、给药容量四、给药容量 实验动物给药前，应考虑该动物在某种给实验动物给药前，应考虑该动物在某种给药途径下能耐受的最大容量药途径下能耐受的最大容量(ml)(ml)，只有确定，只有确定给药容量之后，才能决定药物配成多大浓度。给药容量之后，才能决定药物配成多大浓度。不同种类实验动物一次给药能耐受的最大容不同种类实验动物一次给药能耐受的最大容量不同，灌胃容量过大可能导致胃扩张，静脉量不同，灌胃容量过大可能导致胃扩张，静脉给药容量过大时易引起心力衰竭和肺水肿。给药容量过大时易引起心力衰竭和肺水肿。.107四、给药容量不同种类实验动物一次给药能耐受的最大容量 通常动物血容量约占体重的通常动物血容量约占体重的1/131/13，静脉注射容，静脉注射容量最好在体重的量最好在体重的1/1001/100以下，皮下、肌内及腹腔注以下，皮下、肌内及腹腔注射容量最好在体重的射容量最好在体重的1/401/40以下。如一只体重以下。如一只体重20g20g的的小鼠，尾静脉注射不宜超过小鼠，尾静脉注射不宜超过0.2ml0.2ml，肌内、皮下及，肌内、皮下及腹腔注射不宜超过腹腔注射不宜超过0.5ml0.5ml。常用实验动物不同给药途径的常用实验动物不同给药途径的常用容量常用容量参考表参考表3-23-2，一次给药的，一次给药的最大耐受容量最大耐受容量参考表参考表3-33-3。.108通常动物血容量约占体重的1/13，静脉注射容量最好在体表表3-2常用实验动物不同给药途径的常用实验动物不同给药途径的常用容量常用容量给药途径给药途径小鼠小鼠大鼠大鼠家兔家兔豚鼠豚鼠犬犬(ml/10g体重体重)(ml/100g体重体重)(ml/kg体重体重)(ml/只只)(ml/只只)灌灌胃胃0.20.31.02.01045200皮下注射皮下注射0.10.20.30.50.51.00.52310腹腔注射腹腔注射0.20.20.51.02325515肌内注射肌内注射0.050.10.10.20.10.30.20.525静脉注射静脉注射0.10.20.30.52315515.109表3-2常用实验动物不同给药途径的常用容量.10表表3-3常用实验动物一次给药的常用实验动物一次给药的最大耐受容量最大耐受容量（ml）给药途径给药途径小鼠小鼠大鼠大鼠兔兔猫猫犬犬猴猴灌灌胃胃0.91.068150200120150500300皮下注射皮下注射1.55.0101010050腹腔注射腹腔注射1.02.05.05.03010肌内注射肌内注射0.20.52.02.04.03.0静脉注射静脉注射0.84.0101010020.110表3-3常用实验动物一次给药的最大耐受五、受试药物的配制五、受试药物的配制 在在药药效效学学和和药药物物毒毒性性试试验验中中，要要求求原原则则上上给给药药途途径径应应与与临临床床拟拟用用药药的的途途径径相相同同，这这就就需需要要在在给给药药前前使使用用溶溶剂剂、助助溶溶剂剂或或赋赋形形剂剂将将受受试试药药物物配配制成某种剂型。制成某种剂型。.111五、受试药物的配制.111 要求：要求：所用的溶剂、助溶剂和赋形剂应无毒、所用的溶剂、助溶剂和赋形剂应无毒、不与受试药物发生化学反应、不改变受试药物不与受试药物发生化学反应、不改变受试药物的理化性质和生物活性的理化性质和生物活性,药物被溶解或稀释后药物被溶解或稀释后性状稳定。性状稳定。.112要求：所用的溶剂、助溶剂和赋形剂应无毒、不与受试药物发受试药物常用配制方法如下：受试药物常用配制方法如下：1.1.水溶液水溶液 凡能溶于水的药物尽可能用水溶凡能溶于水的药物尽可能用水溶液液,最好用蒸馏水或生理盐水溶解。遇有少量最好用蒸馏水或生理盐水溶解。遇有少量沉淀可适当加热促溶。沉淀可适当加热促溶。如仍有少量不溶解可加入如仍有少量不溶解可加入0.1%0.1%0.2%0.2%高效增高效增溶剂泊洛沙姆溶剂泊洛沙姆(Poloxamer)Poloxamer)振荡使溶解。振荡使溶解。.113受试药物常用配制方法如下：.113 2.2.混混悬悬液液 不不能能溶溶于于水水或或油油的的药药物物，先先研研细细(80(80目目以以上上）,逐逐步步加加入入少少量量助助悬悬剂剂反反复复研研磨磨,并并配配成成一一定定浓浓度度,搅搅拌拌均均匀匀后后使使用用(仅仅供供口口服服或或腹腹腔注射腔注射,不能供静脉注射不能供静脉注射)。常常用用的的助助悬悬剂剂有有：1%2%羧羧甲甲基基纤纤维维素素钠钠、1%2%西西黄黄芪芪胶胶浆浆剂剂、35%阿阿拉拉伯伯胶胶浆浆剂剂和和5%可溶性淀粉等。可溶性淀粉等。.1142.混悬液不能溶于水或油的药物，先研细(80目3.3.油溶液油溶液 溶于油而不溶于水的药物，如挥溶于油而不溶于水的药物，如挥发油、甾体化合物等，可按所需浓度溶解于植物发油、甾体化合物等，可按所需浓度溶解于植物油油(如精制花生油、橄榄油、玉米油、麻油等如精制花生油、橄榄油、玉米油、麻油等)内。内。油溶液可口服，亦可肌内和皮下注射。油溶液可口服，亦可肌内和皮下注射。.1153.油溶液溶于油而不溶于水的药物，如挥发油、甾4.4.乳剂乳剂 又称乳浊液。溶于油而不溶于水的药又称乳浊液。溶于油而不溶于水的药物，除可制成油溶液外，还可制成乳剂。制备物，除可制成油溶液外，还可制成乳剂。制备方法是将药物置于研钵内加入少量乳化剂单方方法是将药物置于研钵内加入少量乳化剂单方向研匀，然后缓慢加入水搅拌。向研匀，然后缓慢加入水搅拌。常用的乳化剂有吐温常用的乳化剂有吐温8080、吐温、吐温6060、聚乙二醇、聚乙二醇等。乳剂可注射给药。等。乳剂可注射给药。.1164.乳剂又称乳浊液。溶于油而不溶于水的药物，除可5.5.有有机机溶溶剂剂 不不溶溶于于水水和和油油而而能能溶溶于于某某些些有有机机溶溶剂剂的的药药物物，可可先先溶溶于于95%95%乙乙醇醇或或丙丙酮酮，再再用用生生理理盐盐水水稀稀释释。乙乙醇醇的的最最高高终终浓浓度度不不超超过过2%2%，丙丙酮酮的的最最高高终终浓浓度度不不超超过过5%5%。如如稀稀释释后后仍仍有有少少量量不不溶溶，可可适适量量加加入入增增溶溶剂剂，如如吐吐温温8080、聚聚乙乙二二醇醇、司司本本(Span)(Span)等。等。.1175.有机溶剂不溶于水和油而能溶于某些有机溶剂的6.6.稀酸或稀碱溶液稀酸或稀碱溶液 先用少量先用少量0.1mol/L盐酸盐酸或碱（碳酸氢钠、碳酸钠或氢氧化钠）溶解后，或碱（碳酸氢钠、碳酸钠或氢氧化钠）溶解后，尽可能将尽可能将pHpH调至调至4.59（要求不析出）。（要求不析出）。7.7.中药粗制剂中药粗制剂 含有大量杂质，若直接加入含有大量杂质，若直接加入体外反应系统，会严重干扰实验，产生假阳性体外反应系统，会严重干扰实验，产生假阳性或假阴性结果，近年主张用或假阴性结果，近年主张用“中药血清药理实中药血清药理实验方法验方法”解决这一问题，具体方法将在解决这一问题，具体方法将在“实验实验药理学药理学”课程中讲述。课程中讲述。.1186.稀酸或稀碱溶液先用少量0.1mol/L盐酸或碱