第8讲目的基因的表达与调控ppt课件

我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物目的基因的表达与调控目的基因的表达与调控目的基因的表达与调控1我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物基因重组的主要目的是要使目的基因在某一细胞中能得到高效表达，即产生人们所需要的高产的目的基因产物，如蛋白质、多肽类生物药物。基因工程技术的核心是基因表达技术。基因表达是指结构基因在调控序列的作用下转录成mRNA，经加工后在核糖体的协助下又转译出相应的基因产物蛋白质，再在受体细胞环境中经修饰而显示出相应的功能。从基因到有功能的产物这整个转录、转译及所有的加工过程就是基因表达的过程，它是在一系列酶和调控序列的共同作用下完成的。基因重组的主要目的是要使目的基因在某一细胞中能得到高效表达，基因重组的主要目的是要使目的基因在某一细胞中能得到高效表达，2我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物基因表达在原核生物与真核生物中的差别真核生物基因表达系统中，转录在核内进行，生成hnRNA，核内加工：剪接内含子和外显子，修饰5和3末端后形成成熟mRNA。而后在细胞浆中的核糖体上转译成多肽或蛋白质，再经过加工、糖化、形成高级结构。目前已构建出多种基因表达系统，包括原核生物表达系统和真核生物表达系统，不同的表达系统具有各自的特点。原核生物基因表达以操纵子的形式进行;操纵子的调节基因与RNA聚合酶作用，结构基因开始转录成mRNA，同时，mRNA立即与核糖体结合转译出相应的多肽或蛋白质，转录与转译近乎同时完成，mRNA随之被水解掉。基因表达在原核生物与真核生物中的差别真核生物基因表达系统中，基因表达在原核生物与真核生物中的差别真核生物基因表达系统中，3我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物本章主要内容8.1 基因表达的机制基因表达的机制8.2 基因表达的调控元件基因表达的调控元件8.3 外源基因表达系统外源基因表达系统 8.3.1 大肠杆菌基因表达系统大肠杆菌基因表达系统（重点重点）8.3.2 芽孢杆菌表达系统（了解）8.3.3 链霉菌表达系统（了解）8.3.4 蓝藻表达系统（了解）8.3.5 酵母表达系统（酵母表达系统（自学自学）8.3.6 哺乳动物细胞基因表达系统（哺乳动物细胞基因表达系统（自学自学）8.3.7 植物细胞基因表达系统（植物细胞基因表达系统（自学自学）8.4 基因表达产物的检测与分离纯化基因表达产物的检测与分离纯化8.5 基因工程的争论和安全措施基因工程的争论和安全措施本章主要内容本章主要内容8.1 基因表达的机制基因表达的机制4我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物8.1 基因表达的机制8.1.1 外源基因的起始转录外源基因转录起始的速率转录起始的速率是基因表达的关键（限速）环节。选择恰当的启动子（例如，可调控的启动子）和相关的调控序列，是构建一个高效表达系统的首要问题。原核生物启动子原核生物启动子诱导型启动子诱导型启动子：组成型启动子组成型启动子：如如lac、trp、PR、PL、tac等的启动子等的启动子如如T7噬菌体的启动子噬菌体的启动子真核生物启动子较复杂，可分为：真核生物启动子较复杂，可分为：诱导型诱导型、组成型组成型和和特异特异性启动子性启动子等类型等类型8.1 基因表达的机制基因表达的机制8.1.1 外源基因的起始转录外源基因外源基因的起始转录外源基因5我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物8.1.2 mRNA的延伸与稳定外源基因起始转录后，保持保持mRNA的有效延伸的有效延伸、终止终止及稳定存在稳定存在是外源基因有效表达的关键。涉及两个问题：1、要防止要防止因转录物内的衰减和非特异性终止而诱发的 mRNA转录的提前终止转录的提前终止；2、要存在正常的转录终止序列以防止产生不必要的防止产生不必要的转录产物转录产物，使mRNA的长度限制在一定的范围内，从而增加外源基因表达的稳定性。8.1.2 mRNA的延伸与稳定外源基因起始转录后，保持的延伸与稳定外源基因起始转录后，保持m6我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物8.1.3 外源基因mRNA的有效翻译外源基因mRNA有效翻译必须考虑的基本原则：AUG(ATG)是首选的起始密码子起始密码子。SD序列序列为与核糖体16S rRNA互补结合的位点，该序列至少含有AGGAGG序列中的4个碱基。SD序列与翻译起始密码子之间的距离之间的距离为39个碱基。在翻译起始区周围序列翻译起始区周围序列不易形成明显的二级结构。8.1.3 外源基因外源基因mRNA的有效翻译外源基因的有效翻译外源基因mRNA有效有效7我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物不同基因组使用密码子具有选择性。主密码子（major codon）罕用密码子（rare codon）如果外源基因外源基因mRNA的主密码子的主密码子与受体细胞基因组受体细胞基因组的主密码子的主密码子相同或接近相同或接近，则基因表达效率就高；否则，其表达效率就低。不同基因组使用密码子具有选择性。主密码子（不同基因组使用密码子具有选择性。主密码子（major cod8我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物8.1.4 表达蛋白在细胞中的稳定性避免外源基因表达蛋白降解的对策：构建融合蛋白融合蛋白表达系统构建分泌蛋白分泌蛋白表达系统构建包涵体包涵体表达系统选择蛋白水解酶基因缺陷型的受体系统选择蛋白水解酶基因缺陷型的受体系统8.1.4 表达蛋白在细胞中的稳定性避免外源基因表达蛋白降表达蛋白在细胞中的稳定性避免外源基因表达蛋白降9我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物8.1.5 目的基因沉默基因沉默的作用机制基因沉默的作用机制基因在基因组中的位置对其表达的影响DNA水平上的基因调控RNA水平上的基因调控位置效应位置效应的基因沉默：转录水平转录水平的基因沉默：转录后水平转录后水平的基因沉默：8.1.5 目的基因沉默基因沉默的作用机制基因在基因组中的目的基因沉默基因沉默的作用机制基因在基因组中的10我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物8.2 基因表达的调控元件8.2.1 启动子启动子启动子（promoter）：是一段提供提供RNA聚合酶识别和结聚合酶识别和结合合的DNA序列序列，它位于基因的上游位于基因的上游。RNA聚合酶通过与它的结合而启动基因的转录。原核基因启动子具有10 和35 序列等结构元件，而真核基因启动子则具有TATA盒及上游元件等特征结构。序列特异性方向性位置特性种属特异性启动子的特征8.2 基因表达的调控元件基因表达的调控元件8.2.1 启动子启动子（启动子启动子（pr11我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物8.2.1.1 原核生物的启动子转录起始位点转录起始位点：多数细菌启动子转录起始区的序列为CAT，转录从第二个碱基起始，该碱基为嘌呤碱基（A/G）。Pribnow框框：10bp处的TATA区（10序列区）序列区）Sextama框框：35bp处的TTGACA区（35区）区）间隔区间隔区：内部无明显的保守性，其序列长度序列长度比碱基组成对启动子的功能更重要对启动子的功能更重要。8.2.1.1 原核生物的启动子转录起始位点：多数细菌启动原核生物的启动子转录起始位点：多数细菌启动12我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物原核生物启动子序列特征 示意图（The prokaryotic promoter）RNA聚合酶结合和起始转录的序列聚合酶结合和起始转录的序列（The sequence of DNA needed for RNA polymerase to bind to the template and accomplish the initiation reaction）TTGACATATAATTranscriptional start site53-35-1016-19 bp5-9 bpT80A95T45A60A50T96T82T84G78A65C54A45CAT原核生物启动子序列特征原核生物启动子序列特征 示意图示意图（The prokaryot13我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物8.2.1.1 真核生物的启动子型：rRNA 基因启动子型：mRNA 基因启动子型：tRNA 基因启动子8.2.1.1 真核生物的启动子真核生物的启动子型：型：rRNA 基因启动子基因启动子14我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物型启动子所属基因编码的产物为rRNA前体，经剪切加工后成为各种成熟的rRNA分子。人体细胞型启动子核心启动子核心启动子：紧邻转录起始位点，可以启动基因的转录。上游控制元件上游控制元件（UCE）：位于起始位点上游180190bp处，它可以大幅度增强转录效率型启动子所属基因编码的产物为型启动子所属基因编码的产物为rRNA前体，经剪切加工后成为前体，经剪切加工后成为15我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物型启动子转录起始位点转录起始位点TATA框框（Hogness框）：富含AT的保守序列区，它与DNA双链的解链有关，并决定转录起始点的选择。其中心点位于转录起始点上游2030bp的位置CAAT框框：位于转录起始位点上游75bp处，与RNA聚合酶的结合有关。GC框框：位于转录起始位点上游100300bp处，与转录因子的结合有关。启动子启动子基本区基本区辅助区辅助区型启动子转录起始位点型启动子转录起始位点TATA 框（框（Hogness框）：富含框）：富含A16我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物型启动子内启动子内启动子：位于转录起始位点的下游，如 tRNA 和 5SRNA 的启动子。外启动子外启动子：位于转录起始位点的上游，缺乏相应的内部序列。例如：脊椎动物U6核小RNA和7SKRNA启动子，结构类似于真核生物型启动子。型启动子内启动子：位于转录起始位点的下游，如型启动子内启动子：位于转录起始位点的下游，如 tRNA 和和17我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物8.2.1.3 启动子与转录启动大肠杆菌RNA聚合酶的亚基成分 RNA聚合酶：聚合酶：核心酶核心酶(2)亚基全酶亚基全酶(2)8.2.1.3 启动子与转录启动大肠杆菌启动子与转录启动大肠杆菌RNA聚合酶的亚基聚合酶的亚基18我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物第第8讲目的基因的表达与调控讲目的基因的表达与调控ppt课件课件19我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物 factor:factor:20我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物8.2.1.4 启动子的分离随机克隆法随机克隆法PCR 扩增法扩增法待分离启动子的DNA分子酶切后，连接到含有缺启动子的报告基因的载缺启动子的报告基因的载体上体上，挑选阳性克隆子后进一步分析获得的含有启动子的片段。聚合酶保护法聚合酶保护法过滤膜结合法过滤膜结合法根据根据RNA聚合酶与启动子特异性结聚合酶与启动子特异性结合的原理合的原理，取基因组文库中的重组质粒与RNA聚合酶在体外温浴一段时间，让RNA聚合酶与特异启动子序列结合。而后选择合适的限制性内切酶或外切酶消化重组质粒，以未加RNA聚合酶的DNA作对照。琼脂糖电泳分析酶切消化产物，被钝化的酶切位点或片段位于RNA酶保护区域内，即RNA聚合酶的结合位点，该位点可能含有启动子序列。进一步将该片段克隆到启动子探针质粒上，分析和检测启动子的转录活性。8.2.1.4 启动子的分离随机克隆法启动子的分离随机克隆法PCR 扩增法待分离扩增法待分离21我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物8.2.2 增强子增强子（enhancer）：是能够增强启动子转录活性的DNA顺式作用序列，又称强化子。增强子的特性：增强子的特性：双向性。重复序列。增强子行使功能与所处的位置无关。特异性。增强子不仅与同源基因相连时有调控功能，与异源基因相连时也有功能。8.2.2 增强子增强子（增强子增强子（enhancer）：是能够增强启）：是能够增强启22我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物8.2.3 终止子本征终止子：本征终止子：不需要其他蛋白辅助因子便可在特殊的RNA结构区内实现终止作用。依赖终止信号的终止子：依赖终止信号的终止子：要依赖专一的蛋白质辅助因子。8.2.3 终止子本征终止子：不需要其他蛋白辅助因子便可在终止子本征终止子：不需要其他蛋白辅助因子便可在23我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物本征终止子发夹结构(茎环结构)：延缓RNA聚合酶的运动，不终止RNA的合成，但为转录终止创造条件。寡聚U组成的尾部：转录的终止信号。两大特征特征特征本征终止子发夹结构本征终止子发夹结构(茎环结构茎环结构)：延缓：延缓RNA聚合酶的运动，不聚合酶的运动，不24我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物依赖型终止子终止位点上游5090bp区域，是因子的识别位点。因子依赖型终止子也能形成茎环结构，但茎环的GC含量较低，因此RNA聚合酶在此移动的速度减慢，但停留时间较短，并且茎环结构的下游没有寡聚U结构，RNA聚合酶只能在因子的协助下才能有效终止转录。因子是一个相对分子量为2.0105的六聚体蛋白质分子，它能水解各种核苷三磷酸，实际上是一种NTP酶。由于它催化NTP的水解，因子能促使新生的RNA链从三元转录复合物中解离出来，从而终止转录。依赖型终止子终止位点上游依赖型终止子终止位点上游5090bp区域，是区域，是因子的识别因子的识别25我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物在RNA合成起始以后，因子即附着在新生的RNA链上，靠ATP水解产生的能量，沿着5-3方向朝RNA聚合酶移动，到达RNA的3OH端后取代了暂停在终止位点上的RNA聚合酶，并从模板和酶上释放RNA，完成转录过程。终止过程需要消耗能量，所以，因子有终止转录和核苷三磷酸酶两种功能。在在RNA合成起始以后，合成起始以后，因子即附着在新生的因子即附着在新生的RNA链上，靠链上，靠AT26我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物8.2.4 衰减子衰减子（attenuator）：是位于mRNA分子前导序列中的一段控制蛋白质合成起始速率的调节区，亦即发生弱化作用的转录终止信号序列发生弱化作用的转录终止信号序列，又称弱化子。衰减子最先发现于大肠杆菌色氨酸（trp）操纵子中。8.2.4 衰减子衰减子（衰减子衰减子（attenuator）：是位于）：是位于m27我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物trp前导区的4个片段（1、2、3、4）能以两种不同的方式进行碱基配对，有时以1-2和3-4配对，有时只以2-3配对。在前导肽基因中有两个相邻的色氨酸密码子，所以前导肽的翻译对tRNATrp的浓度很敏感。当培养基中trp浓度很低时，负载有trp的tRNATrp也就少，这样翻译通过两个相邻trp密码子的速度就很慢，当4区被转录完成时，核糖体才进行到1区（或停留在两个相邻的trp 密码子处），这时前导区结构是2-3配对，不形成3-4配对的终止结构，所以转录可继续进行，直到trp操纵子中的结构基因全部转录。而当trp浓度高时，核糖体可顺利通过两个相邻的trp密码子，在4区被转录之前，核糖体就到达2区，这样使2-3不能配对，3-4区可自由配对形成茎环状终止子结构，终止转录。所以，弱化子对RNA聚合酶的影响依赖于前导肽翻译中核糖体所处的位置。大肠杆菌色氨酸（trp）操纵子中衰减子的作用trp前导区的前导区的4个片段（个片段（1、2、3、4）能以两种不同的方式进）能以两种不同的方式进28我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物第第8讲目的基因的表达与调控讲目的基因的表达与调控ppt课件课件29我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物第第8讲目的基因的表达与调控讲目的基因的表达与调控ppt课件课件30我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物8.2.5 绝缘子绝缘子（insulator）：既是基因表达的调控元件，也是一种边界元件；它能阻止邻近的调控元件对其所界定基因的启动它能阻止邻近的调控元件对其所界定基因的启动子起增强或抑制作用；子起增强或抑制作用；绝缘子抑制增强子的功能是有极性的。它只能抑制处于绝缘子所在边界另一侧的增强子的作用，而对处于同一结构域的增强子没有抑制作用；绝缘子对基因表达的调控是一个非常复杂的过程，它是通过细胞内特定的蛋白质因子相互作用而产生调控效应的。8.2.5 绝缘子绝缘子（绝缘子绝缘子（insulator）：）：31我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物8.2.6 反义子反义RNA（antisence RNA）：同某种天然mRNA反向互补的RNA分子称为反义RNA，它是由双链DNA中的无意义链转录产生的，可以用来阻止被其转化的细胞中存在的与之互补mRNA的转译活性。（antisence techology）。反义子：编码反义RNA的DNA称为反义子。反义子在DNA的复制、转录和翻译的复制、转录和翻译三个水平对基因的表达起调节作用，其中以对蛋白质合成的抑以对蛋白质合成的抑制最为普遍制最为普遍。8.2.6 反义子反义反义子反义RNA（antisence RNA）32我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物 复制水平的调节直接抑制反义RNA与引物RNA前体互补，使得引物RNA无法与DNA模板结合，进而抑制DNA复制的频率。间接抑制反义RNA通过阻断复制激活蛋白因子的合成而间接抑制DNA的复制。转录水平的调节反义RNA通过与mRNA的5 端互补结合而阻止转录的延伸；作用于mRNA的poly(A)区域，抑制mRNA的成熟及其运输；与真核生物mRNA结合而影响其剪切加工。复制水平的调节直接抑制复制水平的调节直接抑制反义反义RNA与引物与引物RNA前体互补，前体互补，33我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物 翻译水平的调节通过与mRNA的5 端SD序列结合，改变其空间构象，从而影响核糖体在mRNA上的定位；通过与mRNA的5端编码区（如起始密码）结合，直接抑制翻译的起始。SD序列（SD sequence）：Shine-Dalgarno序列的简称，此为纪念最早发现该序列的研究者而命名的。它是原核生物中核糖体的结合位点，亦即存在于mRNA分子AUG起始密码子之前的多聚嘌呤序列AGGAGGG的部分或全部，可与16S rRNA的3-末端序列互补。SD序列在核糖体同mRNA的结合过程中起重要作用。翻译水平的调节通过与翻译水平的调节通过与mRNA的的5 端端SD序列结合，改变其序列结合，改变其34我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物8.3 外源基因表达系统外源基因表达系统：泛指目的基因与表达载体重组后，导入合适的受体细胞，并能在其中有效表达，产生目的基因产物（目的蛋白）。外源基因表达系统外源基因表达系统基因表达载体基因表达载体受体细胞受体细胞基因表达系统基因表达系统原核生物基因表达系统：原核生物基因表达系统：如大肠杆菌表如大肠杆菌表达系统、芽孢杆菌表达系统、链霉菌表达系统、芽孢杆菌表达系统、链霉菌表达系统、蓝藻表达系统等。达系统、蓝藻表达系统等。真核生物基因表达系统：真核生物基因表达系统：如酵母表达系统、如酵母表达系统、植物细胞表达系统、昆虫细胞表达系统、植物细胞表达系统、昆虫细胞表达系统、哺乳动物细胞表达系统等。哺乳动物细胞表达系统等。8.3 外源基因表达系统外源基因表达系统：泛指目的基因与表外源基因表达系统外源基因表达系统：泛指目的基因与表35我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物原核生物作为基因表达系统的受体细胞的特点原核生物大多数为单细胞异养，生长快，代谢易于控制，可通过发酵迅速获得大量基因表达产物。基因组结构简单，便于基因操作和分析。多数原核生物细胞内含有质粒或噬菌体，便于构建相应的表达载体。生理代谢途径及基因表达调控机制比较清楚。不具备真核生物的蛋白质加工系统，表达产物无特定的空间构相。内源蛋白酶会降解表达的外源蛋白，造成表达产物的不稳定原核生物作为基因表达系统的受体细胞的特点原核生物大多数为单细原核生物作为基因表达系统的受体细胞的特点原核生物大多数为单细36我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物8.3.1 大肠杆菌基因表达系统大肠杆菌是一种革兰氏阴性细菌，其遗传背景清楚，目标基因表达的水平高，培养周期短。目前大多数外源基因都是以大肠杆菌为受体系统进行表达的，是目前应用最广泛的基因表达系统。8.3.1 大肠杆菌基因表达系统大肠杆菌是一种革兰氏阴性细大肠杆菌基因表达系统大肠杆菌是一种革兰氏阴性细37我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物与其它表达系统相比，大肠杆菌表达系统所具有的优越性：经过长期研究，人们已经掌握了十分丰富的有关大肠杆菌基础生物学、遗传学以及分子生物学等方面的背景知识背景知识，特别是对其基因表达调控的分子机理有了深刻的了解；大肠杆菌已被发展成为一种安全安全的基因工程实验体系，拥有各类适用的寄主菌株和不同类型的载体系列；实验证明：许多真核基因许多真核基因，例如抑制生长素基因和胰岛素基因等都能在大肠杆菌细胞中都能在大肠杆菌细胞中实现有效的、高水平的表达表达；培养方便培养方便、操作简单、成本低廉，易于工业化批量生产与其它表达系统相比，大肠杆菌表达系统所具有的优越性：与其它表达系统相比，大肠杆菌表达系统所具有的优越性：经过长经过长38我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物8.3.1.1 大肠杆菌基因表达载体8.3.1.1 大肠杆菌基因表达载体大肠杆菌基因表达载体39我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物大肠杆菌基因表达载体可分为3个系统：DNA复制及重组载体的选择系统外源目的基因的转录系统蛋白质的翻译系统大肠杆菌基因表达载体大肠杆菌基因表达载体可分为可分为3个系统：个系统：DNA复制及重组载体的复制及重组载体的40我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物（1）DNA复制及重组载体的选择系统复制子：是一段包含复制起始位点（ori）和反式因子作用区在内的DNA片段。大肠杆菌基因表达载体一般是质粒表达载体，含有能在大肠杆菌中有效复制的复制子。注意：注意：同一大肠杆菌细胞内，含同一类型复制子的不同质粒载同一大肠杆菌细胞内，含同一类型复制子的不同质粒载体不能共存，但含不同类型复制子的不同质粒载体则可以共存体不能共存，但含不同类型复制子的不同质粒载体则可以共存常见的复制子常见的复制子pMB1、p15A、ColE1：松弛复制型，：松弛复制型，每细胞质粒拷贝数每细胞质粒拷贝数1020个。个。pSC101:严谨复制型，严谨复制型，每细胞质粒拷贝数少于每细胞质粒拷贝数少于5个。个。（1）DNA复制及重组载体的选择系统复制子：是一段包含复制起复制及重组载体的选择系统复制子：是一段包含复制起41我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物选择标记目的：使转化体产生新的表型，将转化了的细胞从大量的菌群中分离出来。在基因克隆中采用的质粒载体的选择标记记号，包括有新有新陈代谢特性、对大肠杆菌素陈代谢特性、对大肠杆菌素E1的免疫性的免疫性，以及抗菌素抗性抗菌素抗性等多种。而绝大多数的质粒载体都是使用抗菌素抗性记号，并且主要集中在氨苄青霉素抗性氨苄青霉素抗性、四环素抗性四环素抗性、链霉素抗性链霉素抗性、氯氯霉素抗性霉素抗性以及卡那霉素抗性卡那霉素抗性等少数几种抗菌素抗性记号上。原因：1）由于许多质粒本身就是带有抗菌素抗性基因的抗药性R因子；2）抗菌素抗性记号具有便于操作、易于选择等优点。选择标记目的：使转化体产生新的表型，将转化了的细胞从大量的菌选择标记目的：使转化体产生新的表型，将转化了的细胞从大量的菌42我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物第第8讲目的基因的表达与调控讲目的基因的表达与调控ppt课件课件43我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物（2）外源目的基因的转录系统这一系统包括启动子、抑制物基因和转录终止子。启动子和终止子因宿主的不同而有差别，往往在不同的宿主中表达的效率也不一样，特别是原核生物和真核生物宿主间完全不同，相互间不能通用。启动子启动子启动子启动子（promotor）：是一段能被宿主RNA聚合酶特异性识别和结合并指导目的基因转录的DNA序列，是基因表达调控的重要元件。外源目的基因转录的起始是基因表达的关键步骤。（2）外源目的基因的转录系统这一系统包括启动子、抑制物基因和）外源目的基因的转录系统这一系统包括启动子、抑制物基因和44我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物启动子的特征启动子位于基因的上游，其序列的长度因生物的种类而异。当RNA聚合酶定位并结合到启动子序列上时，便可启动基因的转录。启动子具有序列特异性、启动的方向性、作用位点的特异性和种属特异性等特征。在大肠杆菌细胞中大多数基因的启动子与转录起始位点间的距离为69bp，但对于要表达的外源基因来说，启动子与转录起始位点的最佳距离还有待实验来确定。启动子的特征启动子位于基因的上游，其序列的长度因生物的种类而启动子的特征启动子位于基因的上游，其序列的长度因生物的种类而45我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物抑制物基因抑制物基因的产物是一种控制启动子功能的蛋白质，对启动子的起始转录功能产生抑制作用。在适当的诱导条件下可使抑制物失活，启动子功能重新恢复。理想的可调控的启动子在细胞生长的初期往往不表达或低水平表达，而当细胞增殖到一定的密度后，在某种特定的诱导因子（如光、温度或化学药物等）的诱导下，RNA聚合酶才开始启动转录，合成mRNA。抑制物基因抑制物基因的产物是一种控制启动子功能的蛋白质，对启抑制物基因抑制物基因的产物是一种控制启动子功能的蛋白质，对启46我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物转录终止子转录终止子（terminator）：是一段终止RNA聚合酶转录的DNA序列。转录终止子可分为本征终止子和依赖终止信号的终止子两类。转录终止子的作用：1、它使转录在目的基因之后立即停止，避免多余的转录以节省宿主内RNA的合成底物，提高目的基因的转录量；2、正常转录终止子的存在能够防止产生不必要的转录产物，有效地控制目的基因mRNA的长度，提高mRNA的稳定性，避免质粒上其它基因的异常表达。转录终止子转录终止子（转录终止子转录终止子（terminator）：是一段终止）：是一段终止RN47我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物（3）蛋白质的翻译系统在原核生物中影响翻译起始的因素有：起始密码子、核糖体结合位点（SD序列）、起始密码子于SD序列之间的距离和碱基组成、mRNA的二级结构、mRNA上游的5端非翻译序列和蛋白编码区的5端序列等。蛋白质的翻译系统蛋白质的翻译系统核糖体结合位点（核糖体结合位点（SD序列）序列）翻译起始密码子翻译起始密码子翻译终止密码子翻译终止密码子（3）蛋白质的翻译系统在原核生物中影响翻译起始的因素有：起始）蛋白质的翻译系统在原核生物中影响翻译起始的因素有：起始48我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物8.3.1.2 宿主菌重组异源蛋白在大肠杆菌中不稳定的原因：大肠杆菌缺乏复杂的翻译后加工和蛋白质折叠系统；大肠杆菌不具备类似真核细胞的亚细胞结构和表达产物稳定因子；大量的异源重组蛋白在大肠杆菌细胞中形成高浓度的微环境，导致蛋白质分子之间的作用增强。常见的大肠杆菌基因表达受体菌株常见的大肠杆菌基因表达受体菌株8.3.1.2 宿主菌重组异源蛋白在大肠杆菌中不稳定的原因宿主菌重组异源蛋白在大肠杆菌中不稳定的原因49我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物8.3.1.3 常见的大肠杆菌表达系统Lac和Tac表达系统：是以lac操纵子调控机制为基础设计和构建的表达系统。PL和PR表达系统：是以噬菌体早期转录启动子PL和PR构建的。T7表达系统：是利用大肠杆菌T7噬菌体转录系统元件构建的表达系统，它具有很高的表达能力。8.3.1.3 常见的大肠杆菌表达系统常见的大肠杆菌表达系统Lac和和Tac表达系表达系50我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物8.3.1.4 外源基因在大肠杆菌表达的形式表达形式：不溶性蛋白和可溶性蛋白两种。包涵体蛋白包涵体：包涵体：在一定条件下，外源基因的表达产物在大肠杆菌中积累并致密地集中在一起形成无膜的裸露结构，这种结构称为包涵体。包涵体存在部位：细胞质、细胞周质8.3.1.4 外源基因在大肠杆菌表达的形式表达形式：不溶外源基因在大肠杆菌表达的形式表达形式：不溶51我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物包涵体包涵体的组成的组成蛋白质蛋白质非蛋白质非蛋白质外源基因的表达产物外源基因的表达产物：占大部分，具有正占大部分，具有正确的氨基酸序列，但空间构象错误，因而包涵确的氨基酸序列，但空间构象错误，因而包涵体蛋白一般体蛋白一般没有生物学活性没有生物学活性。受体细胞本身的表达产物受体细胞本身的表达产物：如如RNA聚合酶、聚合酶、核糖核蛋白、外膜蛋白以及表达载体编码的蛋核糖核蛋白、外膜蛋白以及表达载体编码的蛋白等。白等。：包括包括DNA、RNA和脂多糖等和脂多糖等。包涵体形成的本质包涵体形成的本质是细胞内蛋白质的不断聚集，主要包括是细胞内蛋白质的不断聚集，主要包括三个方面：三个方面：折叠状态的蛋白质的聚集作用；折叠状态的蛋白质的聚集作用；非折叠状态的蛋白质的聚集作用；非折叠状态的蛋白质的聚集作用；蛋白质折叠中间体的作用。蛋白质折叠中间体的作用。包涵体的组成蛋白质非蛋白质外源基因的表达产物：占大部分，具有包涵体的组成蛋白质非蛋白质外源基因的表达产物：占大部分，具有52我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物融合蛋白稳定性好；表达效率高；较易于分离纯化。融合蛋白将外源蛋白基因与受体菌自身蛋白基因重组在一起，但不改变两个基因的阅读框，以这种方式表达的蛋白称为融合蛋白。融合蛋白的优点：（与单独表达的外源蛋白相比）融合蛋白融合蛋白稳定性好；融合蛋白稳定性好；融合蛋白将外源蛋白基因与受体菌自身蛋将外源蛋白基因与受体菌自身蛋53我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物寡聚型外源蛋白在构建外源蛋白表达载体时，将多个外源目的蛋白基因串多个外源目的蛋白基因串连在一起连在一起，克隆在质粒载体上，以这种方式表达的外源蛋白称为寡聚型外源蛋白。外源基因多分子线性重组的方式通常有三种：1、多表达单元的重组：、多表达单元的重组：3、多编码序列重组：、多编码序列重组：2、多顺反子重组：、多顺反子重组：寡聚型外源蛋白在构建外源蛋白表达载体时，将多个外源目的蛋白基寡聚型外源蛋白在构建外源蛋白表达载体时，将多个外源目的蛋白基54我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物整合型外源蛋白将要表达的外源基因整合到染色体的非必需编码区上，使之成为染色体结构的一部分而稳定地遗传，以此种方式表达的外源蛋白即为整合型外源蛋白。整合型外源蛋白将要表达的外源基因整合到染色体的非必需编码区上整合型外源蛋白将要表达的外源基因整合到染色体的非必需编码区上55我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物分泌型外源蛋白外源基因的表达产物，通过运输或分泌的方式穿过细胞的外膜进入培养基中，即为分泌型外源蛋白。分泌型外源蛋白外源基因的表达产物，通过运输或分泌的方式穿过细分泌型外源蛋白外源基因的表达产物，通过运输或分泌的方式穿过细56我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物优点：优点：（分泌型蛋白的形式表达外源基因）分泌型可能使蛋白质按适当的方式折叠，有利于形成正确的空间构相，获得有较好生物学活性或免疫原性的蛋白质。甚至有些在细胞内表达时无活性的蛋白质分泌后则有活性。分泌到细胞外周质的蛋白质产物较稳定，不易被细胞内蛋白酶所降解。简化了发酵后处理的纯化工艺。缺点：缺点：外源蛋白分泌型表达通常产量不高，有时信号肽不被切割或在不适当的位置发生切割。优点：（分泌型蛋白的形式表达外源基因）优点：（分泌型蛋白的形式表达外源基因）分泌型可能使蛋白质按分泌型可能使蛋白质按57我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物8.3.1.5 在大肠杆菌中高效表达目的基因的策略高效表达外源基因须考虑的基本原则：高效表达外源基因须考虑的基本原则：1）优化表达载体的设计。2）提高稀有密码子tRNA的表达作用。3）提高外源基因mRNA的稳定性。4）提高外源基因表达产物的稳定性。5）优化发酵过程。8.3.1.5 在大肠杆菌中高效表达目的基因的策略高效表达