药临床前毒理安全性评价规范化管理讲座

新 药 临 床 前 毒 理 安 全 性 评 价规 范 化 管 理 讲 座 一 、 临 床 前 毒 理 学 安 全 性 评 价 的 目 的 意 义 和 内 容目 的 ： 新 药 临 床 前 安 全 性 评 价 的 目 的 非 常 清 楚 ， 就 是 提 供 新 药 对 人 类 健 康 危 害 程 度 的 科 学 依 据 ， 预 测 上 市 新 药 对 人 体 健 康 的 有 害 程 度 ， 淘 汰 危 害 大 的 ， 权 衡 有 危 害 的 ， 通 过 危 害 ， 理 想 的 是 没 有 危 害 的 新 药 ， 使 新 药 成 为 人 类 同 疾 病 作 斗 争 的 有 力 武 器 。 意 义 ： 历 史 教 训 不 可 忘 记（ 1） 1935年 至 1937年 ， 美 国 用 二 硝 基 酚 减 肥 引 起 白 内 障 、 骨 髓 抑 制 死 亡 177人 。（ 2） 1937年 美 国 的 二 甘 醇 磺 胺 酏 剂 事 件 造 成 107 人 死 亡 ， 是 因 没 有 进 行 任 何 动 物 毒 性 试 验 就 上 临 床 造 成 的 。（ 3） 1954年 至 1956年 ， 法 国 的 有 机 锡 胶 囊 事 件 引 起 207人 视 力 障 碍 ， 其 中 102人 死 亡 。 主 要 原 因 是 当 时 急 性 毒 性 试 验 仅 观 察 24h， 不 仅 LD50不 准 确 ， 以 为 毒 性 不 大 ， 更 主 要 的 是 24h内 不 能 出 现 神 经 毒 性 症 状 。 如 果 当 时 急 性 毒 性 观 察 3d或 7d， 则 这 一 悲 惨 事 件 完 全 可 以 避 免 。 （ 4） 1959年 到 1962年 的 沙 利 度 胺 （ 反 应 停 ） 惨 案 ， 则 是 因 当 时 主 客 观 条 件 所 限 ， 未 能 进 行 完 善 的 多 种 动 物 的 致 畸 试 验 ， 引 起 万 名 婴 儿 畸 形 。（ 5） 1966年 至 1972年 ， 日 本 的 氯 磺 喹 啉 事 件 则 是 由 于 长 期 毒 性 评 价 不 完 善 而 造 成 千 人 失 明 或 下 肢 瘫 痪 。（ 6） 1937年 至 1959年 ， 美 国 妇 女 用 黄 体 酮 保 胎 ， 治 疗 先 兆 流 产 ， 结 果 使 600多 名 女 婴 发 生 生 殖 器 男 性 化 。 早 在 1939年 就 已 知 化 学 合 成 的 孕 激 素 分 子 结 构 似 男 性 激 素 ， 可 使 后 代 雌 性 动 物 雄 性 化 。 其 实 在 动 物 上 早 已 发 现 毒 性 ， 仅 仅 因 未 引 起 人 们 足 够 的 重 视 而 造 成 这 一 悲 剧 。 内 容 ： 新 药 临 床 前 安 全 性 评 价 涉 及 内 容 广 泛 ， 分 一 般毒 性 评 价 和 特 殊 毒 性 评 价 两 大 部 分 ， 其 主 要 有 急 性毒 性 试 验 、 长 期 毒 性 试 验 （ 反 复 给 药 毒 性 试 验 ） 、特 殊 毒 性 试 验 、 皮 肤 用 药 及 腔 道 用 药 毒 性 人 、 药 物依 赖 性 试 验 及 抗 生 育 药 及 细 胞 毒 性 抗 肿 瘤 药 的 毒 性评 价 等 。 涉 及 学 科 有 一 般 毒 理 学 、 生 化 副 经 理 理 学 、细 胞 毒 理 学 、 分 子 毒 理 学 、 靶 器 官 毒 理 学 、 免 疫 毒理 学 、 生 殖 毒 理 学 、 遗 传 毒 理 学 、 临 床 毒 理 学 、 病理 学 、 药 理 学 、 生 理 学 、 生 物 化 学 和 组 织 化 学 等 等 ，因 此 它 是 一 门 综 合 性 的 毒 理 学 评 价 ， 是 新 药 评 价 核心 内 容 之 一 ， 不 仅 涉 及 本 单 位 本 学 科 ， 也 涉 及 到 兄弟 单 位 及 邻 近 学 科 ， 也 是 一 个 纵 横 交 错 的 系 统 评 价过 程 。 参 照 新 药 审 主 的 基 本 要 求 ， 新 药 临 床 前 安 全 性评 价 有 以 下 基 本 内 容 ， 当 然 根 据 各 类 药 及 制 剂 的 特点 不 同 有 所 变 动 。（ 1） 全 身 性 用 药 小 鼠 或 （ 和 ） 大 鼠 及 狗 的 急 性 毒 性 试 验 ；（ 2） 全 身 性 用 药 小 鼠 或 （ 和 ） 狗 及 猴 的 长 期 毒 性 试 验 ；（ 3） 皮 肤 用 药 的 急 性 毒 性 试 验 ；（ 4） 皮 肤 用 药 的 长 期 毒 性 试 验 ；（ 5） 皮 肤 用 药 的 刺 激 性 试 验 ；（ 6） 皮 肤 用 药 的 过 敏 试 验 ；（ 7） 眼 用 药 的 刺 激 性 试 验 ；（ 8） 滴 鼻 剂 和 吸 入 剂 的 急 性 毒 性 试 验 ；（ 9） 滴 鼻 剂 和 吸 入 剂 的 刺 激 性 试 验 ； （ 10） 直 肠 、 阴 道 用 药 的 急 性 毒 性 试 验 ；（ 11） 直 肠 、 阴 道 用 药 的 刺 激 性 试 验 ；（ 12） 直 肠 、 阴 道 用 药 的 长 期 毒 性 试 验 ；（ 13） 遗 传 毒 性 试 验 ；（ 14） 生 殖 毒 性 试 验 ；（ 15） 致 癌 试 验 ；（ 16） 药 物 依 赖 性 试 验 ；（ 17） 抗 生 育 药 的 毒 性 试 验 ；（ 18） 细 胞 毒 性 类 抗 肿 瘤 药 毒 理 试 验 ；（ 19） 光 毒 试 验 ；（ 20） 制 剂 的 安 全 性 试 验 （ 异 常 毒 性 试 验 、 过 敏 试 验 、 热 原 试 验 、 卫 生 学 检 查 、 溶 血 试 验 和 降 压 物 质 检 查 等 ） 。 二 、 现 状1.国 外 ：Pre-clinic 40% Evaluation 10% Toxicology 6%Clinical Trial 39% Screen 16% Stability 8%Clinical Phase 33% 6%Process/Qc 9% 新 药 开 发 时 间 是 最 主 要 的 ， 外 国 公 司 不 跟 先 谈价 钱 ， 先 谈 时 间 ， 每 天 5万 美 元 。 毒 理 部 分 ： Carcinogenity 35% Reproduction 25% Acute/Subco 20% Mutagenicity 10% 药 理 10% 药 效 只 占 10% 主 要 是 毒 理 2.国 内 ： 成 就 差 距3.国 家 1035工 程 及 江 苏 省 新 药 创 新 体 系（ 1） 战 略 目 标 和 战 略 重 点 新 药 研 制 具 有 专 利 保 护 的 10个 创 新 药 物 ， 产 业 化 占 有 一 定 份 额 。 1 2个 药 物 进 入 国 际 市 场 。 （ 2） 完 善 新 药 创 制 过 程 中 各 环 节 ， 也 就 是 体 系 建 立新 药 筛 选 中 心 1、 国 家 新 药 筛 选 中 心 上 海 浦 东 张 江 以 中 科 院 上 海 药 物 所 为 依 托 单 位 ， 承 担 抗 感 染 、 抗 肿 瘤 、 抗 病 毒 、 神 经 系 统 、 免 疫 系 统 、 生 殖 系 统 、 心 血 管 系 统 。 药 物 的 计 算 机 辅 助 设 计 2、 其 他 国 家 新 药 筛 选 中 心 北 京 医 科 大 学 、 医 科 院 药 物 所 、 医 科 院 医 药 生 物 技 术 所 、 福 建 微 生 物 所 、 中 国 药 科 大 学 与 新 华 制 药 厂 为 依 托 单 位 的 5个 新 药 筛 选 中 心 。 毒 理 学 安 评 中 心 （ G LP）1、 国 家 新 药 安 全 性 评 价 中 心 中 检 所 、 SDA2、 国 家 上 海 新 药 安 全 性 评 价 与 研 究 中 心 上 海 医 药 工 业 研 究 院3、 国 家 沈 阳 新 药 安 全 性 评 价 与 研 究 中 心 沈 阳 化 工 院4、 军 事 医 学 科 学 院 国 家 新 药 安 全 性 评 价 与 研 究 中 心5、 浙 江 医 学 科 学 院 国 家 新 药 安 全 评 价 研 究 重 点 实 验 室6、 广 州 医 药 工 业 研 究 所 国 家 新 药 安 全 评 价 研 究 重 点 实 验 室 7、 广 州 中 医 药 大 学 国 家 中 药 安 全 评 价 研 究 重 点 实 验 室8、 中 国 中 医 研 究 院 国 家 中 药 安 全 评 价 研 究 重 点 实 验 室9、 四 川 联 合 大 学 （ 华 西 医 ） 国 家 中 药 安 全 评 价 中 心 江 苏 省 医 药 、 农 药 、 兽 药 安 全 性 评 价 中 心 江 苏 省 新 药 安 全 性 评 价 中 心 南 中 医 国 家 中 药 药 理 规 范 化 实 验 室 新 药 临 床 试 验 研 究 中 心 2家 肿 病 、 3家 心 血 管 、 2家 中 医 、 2家 综 合 性 以 北 京 医 科 大 学 临 床 药 理 研 究 所 、 上 海 医 科 大 学 华山 医 院 、 中 山 医 院 、 医 科 院 北 京 协 和 医 院 、 阜 处 医 院 、肿 瘤 医 院 、 广 东 中 山 医 科 大 学 肿 瘤 医 院 、 广 东 省 中 医 院 、中 国 中 医 研 究 院 西 苑 医 院 、 哈 尔 滨 医 科 大 学 十 家 医 院 分别 筹 建 国 家 性 多 学 科 临 床 试 验 研 究 中 心 。 三 、 SDA和 CFDSDA的 运 行 新 机 制 和 法 制 化 管 理 1999年 全 国 第 一 次 药 品 审 评 会 议 在 金 泰 大 厦1.意 义 、 目 的 、 必 要 性 为 什 么 要 进 行 严 格 管 理 ？(1)政 治 角 度 、 社 会 稳 定 国 内 ： 社 会 舆 论 ： 涉 及 面 广 ： 经 济 利 益 ： 沈 阳 飞 龙 、 恶 性 案 件 国 外 ： 平 等 竞 争 知 识 产 权 谈 判 主 要 内 容 ， 经 历 多 轮 谈 判 。 （ 2） 从 战 略 高 度 医 药 的 发 展 、 WTO（ 3） 控 制 低 水 平 重 复 ， 从 源 头 控 制 ， 要 将 精 力 用 到 研 究 中 ， 而 不 是 旁 门 左 道 。 2.新 的 新 药 审 评 和 管 理 机 制 与 机 构（ 1） 国 家 新 药 管 理 体 制 的 改 革 卫 生 部 药 政 局 ： 新 药 审 评 中 心 （ 分 中 、 西 等 ） 药 典 委 员 会 进 口 药 保 护 品 种 委 员 会 国 家 基 本 药 物 委 员 会 中 药 保 护 品 种 委 员 会 中 检 所 、 各 省 所 及 分 支 假 药 、 劣 药 管 理 国 家 医 药 管 理 局 国 家 中 医 药 管 理 局 （ 2） 新 的 管 理 体 制 SDA（ Stoote Drug Adeministration） 国 家 药 品 监 督 管 理 局 机 构 设 置 ： 药 品 注 册 司 （ 化 学 药 品 处 、 中 药 处 、 生 物 制 品 处 ） 安 全 监 管 司 GFDSDA（ Gontre for Drug Eoaluation） SDA认 证 中 心 ： GAP GMP GLP GCP 药 典 委 员 会中 药 品 种 保 护 委 员 会SDA安 评 中 心中 国 药 品 检 验 所保 密 项 目 中 药 快 速 通 道保 密 法 已 确 定 密 级 ： 片 、 磺 、 白 药（ 3） 新 药 审 评 新 旧 方 法 对 照 体 制 要 求 四 、 新 药 审 批 办 法 1.历 史 沿 革 （ 1） 1985年 首 次 颁 布 ， 随 后 有 一 系 列 法 规 出 台 （ 2） 1999年 5月 1日 新 的 法 规 出 台 第 一 批 公 布 5个 令 ： 共 有 48个 规 章 将 陆 续 出 台 ： （ 3） 新 药 审 批 办 法 五 、 原 始 资 料 的 规 范 化 管 理 1.原 始 资 料 的 管 理 沿 革 与 99年 打 假 活 动 （ 1） 卫 生 部 管 理 药 审 一 直 进 行 这 方 面 的 宣 传 、 检 查 几 个 例 子 ： 国 外 、 国 内 （ 2） SDA管 理 “ 打 假 ” 1999年 春 节 2.8国 药 药 电 1999J3号 省 会 所 在 地 一 天 （ 2.9） 密 封 、 非 省 会 二 天 （ 2.10、 2.11） 密 封 。 1999年 夏 季 各 省 原 始 资 料 审 查 。 （ 3） 原 始 资 料 的 规 范 化 里 程 中 的 几 个 例 子 2.改 进 措 施 ， 如 何 管 理（ 1） 推 进 G LP 国 外 ： 国 内 ：（ 2） 省 级 对 原 始 资 料 审 核 、 场 地 考 察（ 3） 各 种 扶 正 的 措 施 评 审 时 考 核 、 随 时 抽 查 随 身 带 外 地 24小 时 ， 北 京 12小 时 。 3.原 始 资 料 记 录 中 的 常 见 问 题4.原 始 资 料 如 何 规 范 化 及 有 关 条 规 六 、 新 药 毒 理 研 究 的 技 术 要 求（ 一 ） 全 身 性 用 药 的 毒 理 试 验 1.急 性 毒 性 试 验 观 察 一 次 给 药 后 动 物 产 生 的 毒性 反 应 并 测 定 其 半 数 致 死 量 （ LD50） 。 要 用 两 种 以上 给 药 途 径 （ 包 括 推 荐 临 床 研 究 的 给 药 途 径 ， 溶 于水 的 药 应 当 测 定 静 脉 注 射 的 LD50 ） 。 给 药 后 至 少 观察 7天 ， 观 察 到 动 物 有 毒 性 反 应 时 应 进 行 肉 眼 尸 检 ，记 录 所 有 病 变 。 存 活 24小 时 或 更 长 时 间 的 处 理 动 物 ，当 尸 检 发 现 有 病 变 组 织 时 ， 应 对 该 组 织 进 行 镜 检 。 2.长 期 毒 性 试 验 观 察 动 物 因 边 疆 用 药 而 产 生 的 毒性 反 应 、 中 毒 时 首 先 出 现 的 症 状 及 停 药 后 组 织 和 功能 损 害 的 发 展 和 恢 复 情 况 。（ 1） 动 物 ： 至 少 两 种 动 物 （ 包 括 啮 齿 类 和 非 啮 齿类 ） ， 啮 齿 类 常 用 大 白 鼠 ， 年 龄 为 6周 ， 包 头 观 察 一周 后 使 用 ， 动 物 数 按 毒 性 试 验 时 间 的 长 短 决 定 ， 如毒 性 试 验 时 间 90天 ， 每 剂 量 组 为 雌 雄 各 10只 。 如毒 性 试 验 时 间 90天 ， 每 剂 量 组 为 雌 雄 各 20只 。 非啮 齿 类 常 用 狗 ， 年 龄 为 4 6月 ， 每 剂 量 组 为 雌 雄 各 2只 。 对 照 组 和 试 验 组 的 动 物 数 要 相 等 。 （ 2） 剂 量 ： 常 用 三 个 剂 量 ， 大 动 物 也 可 用 两 个 剂量 。 在 试 验 过 程 中 ， 高 剂 量 组 应 有 部 分 动 物 出 现 毒性 反 应 或 死 亡 （ 不 大 于 20%） ， 低 剂 量 组 应 当 略 高于 药 物 对 动 物 的 有 效 量 或 临 床 试 验 用 的 剂 量 而 不 出现 任 何 观 察 指 标 的 异 常 。（ 3） 给 药 途 径 ： 注 射 用 药 的 给 药 途 径 应 与 推 荐 临床 试 验 的 给 药 途 径 相 同 ， 口 服 给 药 最 好 采 用 灌 胃 法 。（ 4） 试 验 周 期 ： 一 般 参 考 推 荐 临 床 试 验 的 用 药 持续 时 间 考 虑 ， 即 动 物 试 验 连 续 给 药 期 必 须 为 临 床 试验 给 药 期 的 3 4倍 。 例 如 ， 临 床 试 验 期 为 1 3天 者 ，毒 性 试 验 给 药 期 为 2周 。 7天 者 ， 为 4周 。 30天 者 ，为 3月 。 30天 者 ， 毒 性 试 验 给 药 期 至 少 半 年 试 验 周 期 在 半 年 以 上 的 新 药 ， 可 在 长 期 毒 性 试验 进 行 3个 月 后 、 未 发 现 明 显 毒 性 反 应 的 情 况 下 ，申 请 进 行 第 期 临 床 试 验 。（ 5） 观 察 指 标 ： 一 般 体 征 、 体 重 、 外 观 、 行 为 、尿 常 规 、 血 常 规 、 肝 肾 功 能 及 重 要 器 官 的 肉 眼 观 察和 病 理 检 查 ， 必 要 时 作 骨 髓 检 查 ， 血 液 生 化 ， 大 动物 应 检 查 心 率 和 心 电 图 变 化 。 凡 有 可 能 引 起 眼 、 耳毒 性 的 药 物 ， 应 增 加 眼 、 耳 毒 性 检 查 指 标 。 有 些 药物 尚 无 需 研 究 对 酸 碱 平 衡 、 水 盐 代 谢 的 影 响 。 产 生 毒 性 反 应 的 新 药 至 少 应 对 高 剂 量 组 和 对照 组 的 动 物 在 给 药 期 结 束 后 继 续 进 行 观 察 ， 对 引起 不 可 逆 性 损 害 和 组 织 病 变 的 药 物 ， 要 慎 重 考 虑临 床 试 验 问 题 。 对 毒 性 较 高 、 安 全 范 围 较 小 的 特 殊 品 种 新 药 ，如 拟 进 行 临 床 试 验 ， 最 好 通 过 研 究 找 出 一 种 解 救药 ， 以 备 过 量 中 毒 时 使 用 。 有 的 新 药 还 应 根 据 其 药 理 性 质 和 用 途 ， 观 察对 注 射 部 位 （ 皮 下 、 肌 肉 、 血 管 ） 的 刺 激 性 ， 注射 用 生 化 制 品 应 进 行 热 原 、 异 性 蛋 白 及 过 敏 试 验 。 （ 二 ） 局 部 用 药 毒 性 试 验 局 部 用 药 （ 如 呼 吸 道 吸 入 药 以 及 粘 膜 、 皮 肤 用药 等 ） ， 大 都 可 以 被 吸 收 。 因 此 ， 局 部 用 药 应 先 进行 局 部 吸 收 试 验 。 根 据 用 药 方 法 ， 对 用 药 部 位 要 进行 局 部 刺 激 性 试 验 ， 用 肉 眼 观 察 及 组 织 切 片 的 镜 检 ，测 试 刺 激 性 （ 即 炎 症 ） 的 发 展 和 恢 复 情 况 。1.皮 肤 用 药 进 行 完 整 和 破 损 皮 肤 的 毒 性 试 验 以 及皮 肤 致 敏 试 验 ， 除 婴 儿 皮 肤 用 药 应 使 用 刚 成 年 动 物外 ， 其 余 均 用 成 年 动 物 。 可 选 用 家 兔 、 豚 鼠 或 大 鼠 。至 少 应 设 三 个 剂 量 组 ， 每 组 动 物 数 不 少 于 3只 ， 以 观察 与 剂 量 相 关 的 毒 性 反 应 。 观 察 期 一 般 在 停 止 敷 用后 不 超 过 14天 。 2.滴 鼻 剂 和 吸 入 剂 进 行 呼 吸 道 （ 包 括 肺 部 ） 的 局部 刺 激 性 和 毒 性 试 验 。 大 鼠 或 豚 鼠 ， 每 一 个 浓 度 组至 少 10只 动 物 （ 雌 雄 各 半 ） ， 至 少 设 3个 浓 度 组 。接 触 吸 入 剂 量 的 时 间 不 少 于 4小 时 。 观 察 期 一 般 为14天 。3.滴 眼 剂 观 察 对 眼 结 合 膜 和 眼 求 的 刺 激 作 用 。 家兔 为 道 选 ， 至 少 用 3只 家 兔 。 液 体 制 剂 的 剂 量 一 般每 次 用 0.1ml， 软 膏 等 制 剂 每 次 不 超 过 100mg。 观 察期 一 般 在 停 止 给 药 后 21天 内 ， 以 观 察 出 现 反 应 的 可逆 性 和 不 可 逆 性 。4.局 部 作 用 于 直 肠 、 阴 道 的 制 剂 ， 进 行 对 作 用 部 位的 刺 激 及 局 部 毒 性 试 验 。 （ 三 ） 特 殊 毒 理 研 究 1.致 突 变 试 验 根 据 受 试 物 的 化 学 结 构 、 理 化 性质 及 对 遗 传 物 质 作 用 终 点 （ 基 因 突 变 和 染 色 畸 变 ）的 不 同 。 要 求 新 药 必 须 做 以 下 三 项 试 验 ：（ 1） 微 生 物 回 突 变 试 验 菌 株 ： 组 氨 酸 缺 陷 型 鼠 伤 寒 沙 门 菌 四 株 （ TA97、TA98、 TA100、 TA102） ， 亦 可 采 用 大 肠 杆 菌（ E.Coli） WP2若 干 株 （ 大 肠 杆 菌 试 验 ） 。 剂 量 选 择 ： 决 定 受 试 物 最 高 剂 量 的 标 准 是 细 菌毒 性 和 溶 解 度 。 一 般 最 大 剂 量 可 达 5mg/皿 。 受 试 物至 少 应 有 5种 不 同 的 剂 量 ， 否 则 应 说 明 选 定 剂 量 的理 由 。 代 谢 活 化 ： 应 用 诱 导 剂 处 理 后 的 哺 乳 动 物 肝脏 微 粒 体 （ S9） 进 行 体 外 代 谢 活 化 试 验 ， 即 在 加S9混 合 物 和 不 加 S9混 合 物 平 行 的 条 件 下 测 试 。 对 照 组 ： 用 溶 媒 作 阴 性 对 照 ， 用 已 知 突 变 原作 阳 性 对 照 。 结 果 判 定 ： 受 试 物 的 回 复 突 变 菌 荣 誉 称 号 数的 增 加 与 剂 量 相 关 并 有 统 计 学 意 义 ， 或 至 少 某 一测 试 点 呈 现 可 重 复 的 并 有 统 计 意 义 的 阳 性 反 应 时记 为 阳 性 。（ 2） 哺 乳 动 物 培 养 细 胞 染 色 体 畸 变 试 验 细 胞 ： 哺 乳 动 物 原 代 或 传 代 培 养 细 胞 。 剂 量 ： 至 少 应 用 三 种 不 同 剂 量 ， 高 剂 量 以 50%细 胞 生 长 抑 制 浓 度 为 基 准 ， 否 则 应 说 明 选 定 剂 量 的理 由 。 标 本 制 作 时 间 ： 药 物 与 细 胞 接 触 后 应 有 适 当 时间 ， 最 好 包 括 整 个 细 胞 周 期 ， 通 常 在 药 物 处 理 后 24和 48小 时 制 作 染 色 体 标 本 。 代 谢 活 化 ： 应 用 适 当 的 代 谢 活 化 法 。 对 照 组 ： 用 深 媒 作 阴 性 对 照 ， 已 知 突 变 原 作 阳性 对 照 。镜 检 ： 每 种 浓 度 至 少 观 察 100个 中 期 分 裂 相 细 胞 的染 色 体 结 构 的 异 常 及 多 倍 体 的 出 现 率 。 结 果 判 定 ： 受 试 诱 发 的 染 色 体 畸 变 出 现 率 较 阴性 对 照 有 统 计 学 意 义 的 增 加 ， 并 有 剂 量 反 应 关 系 时记 为 阳 性 ， 同 时 标 明 异 常 细 胞 出 现 的 频 率 和 种 类 。（ 3） 体 内 试 验 ： 一 般 选 用 微 核 试 验 ， 但 作 用 于 生 殖系 统 的 药 物 进 行 显 性 致 死 试 验 等 。 1） 啮 齿 类 动 物 微 核 试 验 动 物 ： 一 般 用 小 鼠 ， 每 组 10只 性 成 熟 动 物 （ 雌 雄各 半 ） 或 6至 少 只 性 成 熟 雄 性 动 物 。 给 药 剂 量 及 途 径 ： 至 少 采 用 三 种 剂 量 ， 最 高 剂 量以 1/2LD 50为 基 准 ， 腹 腔 和 /或 口 服 一 次 给 药 ， 必 要时 可 连 续 给 药 。 否 则 应 说 明 选 定 剂 量 的 理 由 。 对 照 组 ： 用 溶 媒 作 阴 性 对 照 ， 已 知 能 诱 发 微核 阳 性 的 物 质 作 阳 性 对 照 。 标 本 制 作 ： 给 药 后 18 30小 时 或 12 72小 时处 死 动 物 ， 取 骨 髓 ， 离 心 ， 涂 片 ， Giemsa染 色 或吖 啶 橙 染 色 。 镜 检 ： 每 只 动 物 至 少 观 察 计 数 1000个 多 染 红细 胞 ， 观 察 其 微 核 出 现 的 频 度 及 多 染 红 细 胞 和 正染 红 细 胞 的 比 率 。 结 果 判 定 ： 微 核 细 胞 出 现 的 频 度 与 对 照 组 相比 有 统 计 学 意 义 的 增 加 ， 并 有 剂 量 反 应 关 系 时 ，或 同 一 剂 量 有 重 复 性 并 有 统 计 学 意 义 时 记 为 阳 性 。 2） 啮 齿 类 动 物 显 性 致 死 试 验 动 物 ： 性 成 熟 的 啮 齿 类 动 物 ， 一 般 采 用 小 鼠 。每 组 至 少 15只 雄 鼠 。 给 药 剂 量 及 途 径 ： 至 少 采 用 三 种 剂 量 ， 但 在 初期 评 价 中 单 剂 量 或 二 种 剂 量 即 可 。 高 剂 量 以 30连续 给 药 使 100%动 物 生 存 的 最 大 耐 受 量 为 斟 准 。 口服 或 腹 腔 注 射 可 采 用 一 次 给 药 ， 每 天 给 药 一 次 ，连 续 给 药 五 天 或 连 续 给 药 六 周 的 方 法 之 一 。 交 配 方 法 ： 给 药 的 雄 性 动 物 以 适 当 的 时 间 间 隔集 资 与 未 给 药 的 雌 性 动 物 交 配 ， 交 配 时 间 取 决 于给 药 方 式 ， 一 般 一 次 或 连 续 给 药 5天 的 动 物 ， 以 最后 约 药 后 6周 内 为 交 配 时 间 ； 连 续 给 药 6周 的 动 物以 最 后 给 药 后 1周 内 为 交 配 时 间 。 对 照 组 ： 用 溶 媒 作 阴 性 对 照 ， 已 知 能 诱 发 显 性 致死 阳 性 物 质 作 阳 性 对 照 。 但 在 同 一 实 验 室 ， 对 同 一 品系 的 动 物 ， 可 不 设 阳 性 对 照 。 观 察 指 标 ： 交 配 的 雌 性 动 物 在 妊 娠 后 期 剖 腹 ， 观察 子 宫 内 胚 胎 着 床 数 ， 生 存 胎 仔 数 ， 死 亡 胎 仔 数 及 未着 床 数 。 显 性 致 死 率 以 DL表 示 ： 试 验 组 妊 娠 鼠 的 平 均 生 存 胎 仔 DL（ %） （ 1 ） 100 阴 性 对 照 组 妊 娠 鼠 的 平 均 生 存 胎 仔 结 果 判 定 ： 死 亡 胎 仔 数 的 增 加 ， 胚 胎 着 床 总 数 的减 少 ， 或 未 着 床 胚 胎 数 的 增 加 ， 生 存 胎 仔 减 少 ， 这 些结 果 有 统 计 学 意 义 并 有 剂 量 反 应 关 系 时 记 为 阳 性 显 性致 死 效 应 。 2.生 殖 毒 性 试 验（ 1） 一 般 生 殖 毒 性 试 验（ 2） 致 畸 胎 试 验（ 3） 围 产 期 毒 性 试 验3.致 癌 试 验（ 1） 致 癌 试 验 的 预 备 试 验（ 2） 致 癌 试 验（ 3） 评 价