氢氧化钾蛋白质溶解度的测定

氢氧化钾蛋白质溶解度的测定The manuscript was revised on the evening of 2021氢氧化钾蛋白质溶解度的测定1、原理氢氧化钾蛋白质溶解度可以反映蛋白质变性的情况。不同的蛋白 质品种，氢氧化钾蛋白质溶解度不同。蛋白质变性越大，氢氧化钾 蛋白质溶解度越小。用一定浓度的氢氧化钾溶液提取试样中的可溶性蛋白质，在催化 剂作用下用浓硫酸将提取液中可溶性蛋白质的氮转化为硫酸铵。加 入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用盐酸滴定测出试样 中可溶性蛋白质含量；同时，测定原始试样中粗蛋白质含量，计算 出试样的蛋白溶解度。2、试剂a）氢氧化钾（分析纯），无水硫酸钾、五水硫酸铜、氢氧化钠、硼 酸、甲基红、漠甲酚绿、硫酸铵；b）浓硫酸、盐酸（分析纯）、95%乙醇、蒸馏水。3、仪器和设备a）感量为g分析天平；b）磁力搅拌器；6离心机（带离心管），转速为2700r/min以上；d）样品粉碎机；e）60目分析筛；f）电炉；g）100 mL或250 mL凯氏烧瓶；h）凯氏蒸馏装置；i）250 mL锥形瓶；j）1000 mL容量瓶；k）微量滴定管。4、试剂的制备a）%氢氧化钾溶液称取g氢氧化钾，加水溶解后，转移至1000 mL容量瓶中，用水定 容至刻度。b）混合催化剂称取6 g硫酸钾和g硫酸铜，磨碎混匀。c）氢氧化钠溶液称取400 g氢氧化钠，加水溶解后，转移至1000 mL容量瓶中，用 水定容至刻度。d）硼酸溶液称取20 g硼酸，加水溶解后，转移至1000 mL容量瓶中，用水定容 至刻度。e）盐酸标准溶液量取mL浓盐酸，注入1000 mL水中混匀，按GB 601-88要求进行标定即可。f）混合指示剂称取1 g甲基红和5 g漠甲酚绿，加入乙醇溶解后，转移至1000 mL 容量瓶中，用乙醇定容至刻度。5、样品的制备取具有代表性的蛋白质样品，用四分法缩减分取200g左右，粉碎 过60目筛，充分混匀，装入磨口瓶中备用。6、测定步骤称取蛋白样品，精确到，置于250ml高型烧杯中，加入氢氧化钾 溶液，在磁力搅拌器上搅拌20min，将溶液转移至离心管中，以 2700r/min离心10min，小心移取上清液，放入消化管中，按照 GB/T 6432-1994凯氏定氮法测定试样中可溶性蛋白质的含量。同 时，按照GB/T 6432-1994凯氏定氮法测定同一试样中总的粗蛋白质 含量。7、结果计算氢氧化钾蛋白质溶解度X按下式计算：X= W/W2*100%式中：W一试样溶于氢氧化钾溶液中的粗蛋白质含量，%;W2一试样总的粗蛋白质含量（以两次平行测定结果的算术平均值 为测定结果），。计算结果表示到小数点后一位。8、精密度a）重复性在同一实验室，由同一操作人员完成的两个平行测定结果，相对偏差不大于2% ；以两次平行测定结果的算术平均值为测定结果。b）再现性在不同实验室，由不同操作人员用不同的仪器设备完成的两个 测定结果，相对偏差不大于4%。