金银花阴性对照液连翘的鉴别硅胶薄层色谱法课件

中药制剂分析实验中药制剂分析实验基本要求基本要求:熟练掌握各种分析方法和操作技术，培养独立开展中熟练掌握各种分析方法和操作技术，培养独立开展中成药分析工作的能力。成药分析工作的能力。注意事项：注意事项：1.实验前做好预习，明确目的要求，熟悉原理和操作要点。实验前做好预习，明确目的要求，熟悉原理和操作要点。2.严格按实验规程操作，细心观察实验现象。严格按实验规程操作，细心观察实验现象。3.及时做好完整而确切的原始记录。及时做好完整而确切的原始记录。4.取用试剂、药品应仔细观察标签，杜绝错盖瓶盖的现象。取用试剂、药品应仔细观察标签，杜绝错盖瓶盖的现象。5.爱护仪器，小心使用。精密仪器须经教师同意，用毕签名。爱护仪器，小心使用。精密仪器须经教师同意，用毕签名。6.注意防火、防爆。发现事故苗头及时报告，不要擅自处理。注意防火、防爆。发现事故苗头及时报告，不要擅自处理。7.爱护公物，节约水、电、药品和试剂。爱护公物，节约水、电、药品和试剂。8.实验完毕应认真清理实验台，经老师同意后，方可离开。实验完毕应认真清理实验台，经老师同意后，方可离开。值日生整理试剂台、打扫卫生、检查水、电、门窗。值日生整理试剂台、打扫卫生、检查水、电、门窗。9.认真总结实验结果，填写实验报告，并按规定时间上交。认真总结实验结果，填写实验报告，并按规定时间上交。中药制剂分析实验基本要求及注意事项中药制剂分析实验基本要求及注意事项实验一、二妙丸的鉴别实验一、二妙丸的鉴别与挥发油的测定与挥发油的测定 一、目的要求一、目的要求 1.1.掌握薄层色谱法在中成药鉴别中的应用。掌握薄层色谱法在中成药鉴别中的应用。2.2.熟悉挥发油测定方法。熟悉挥发油测定方法。二、原理二、原理 1.1.处方处方：苍术（炒）：苍术（炒）500g500g，黄柏（炒），黄柏（炒）500g500g。2.2.制法制法：粉碎，过筛，混匀，水泛丸，干燥，即得。：粉碎，过筛，混匀，水泛丸，干燥，即得。3.3.功能与主治功能与主治：燥湿清热。用于湿热、足膝红肿热：燥湿清热。用于湿热、足膝红肿热痛、下肢丹毒、白带、阴囊湿痒。痛、下肢丹毒、白带、阴囊湿痒。苍术苍术:菊科植物茅苍术菊科植物茅苍术Atractylodes lancea Thunb.DC.或北苍术或北苍术Atractylodes chinensis DC.Koidz.的干燥的干燥根茎。根茎。成分：挥发油中主要含有成分：挥发油中主要含有苍术酮、苍术素、苍术酮、苍术素、-桉油醇、桉油醇、茅术醇等。茅术醇等。4.药材来源及化学成分药材来源及化学成分黄柏黄柏:芸香科植物黄皮树芸香科植物黄皮树Phellodendron Chinens Schneid.的干燥树皮。的干燥树皮。成分：小檗碱、药根碱、巴马亭碱、成分：小檗碱、药根碱、巴马亭碱、黄连碱等黄连碱等NOOOCH3H3CO小檗碱小檗碱OOOHOH苍术酮苍术酮-桉油醇桉油醇茅术醇茅术醇苍术素苍术素5.黄柏的鉴别：黄柏的鉴别：TLC法，以小檗碱和黄柏对照法，以小檗碱和黄柏对照药材作对照。药材作对照。6.挥发油的提取：水蒸气蒸馏法。挥发油的提取：水蒸气蒸馏法。7.挥发油组成测定：挥发油组成测定：TLC法，经法，经香草醛浓硫酸显色后，苍术酮显香草醛浓硫酸显色后，苍术酮显橙红色，苍术素显污绿色，橙红色，苍术素显污绿色，-桉桉油醇和茅术醇显紫红色。油醇和茅术醇显紫红色。三、实验内容三、实验内容 1.黄柏的鉴别黄柏的鉴别供试品溶液：供试品溶液：取本品取本品0.1g，置具塞试，置具塞试管中，加甲醇管中，加甲醇5ml，超声提取，超声提取10分钟，分钟，取滤液。取滤液。色谱条件：色谱条件：薄层板：薄层板：硅胶硅胶G展开剂：展开剂：三氯甲烷三氯甲烷-甲醇甲醇-浓氨试液浓氨试液 （50 10 0.5），展开缸预先用氨），展开缸预先用氨 蒸气预饱和蒸气预饱和检视：检视：紫外光灯（紫外光灯（365nm）下。）下。点样量点样量：5l结果：结果：供试品色谱中，在与对照品色供试品色谱中，在与对照品色 谱及对照药材色谱相应的位置上，谱及对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点。显相同的黄色荧光斑点。盐酸小檗碱对照品溶液盐酸小檗碱对照品溶液2.黄柏对照药材溶液黄柏对照药材溶液3.供试品溶液供试品溶液 1 2 32.挥发油的测定挥发油的测定 取烧瓶，加水取烧瓶，加水300ml与玻璃珠数粒，称与玻璃珠数粒，称取供试品约取供试品约60g，置烧瓶中，振摇混合后，置烧瓶中，振摇混合后，连接挥发油测定器与冷凝管。从冷凝管上连接挥发油测定器与冷凝管。从冷凝管上端加水约端加水约200ml，使充满挥发油测定器的，使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶为止。刻度部分，并溢流入烧瓶为止。用直火缓缓加热至沸，并保持微沸用直火缓缓加热至沸，并保持微沸1小时，小时，停止加热，放置片刻，开启测定器下端的停止加热，放置片刻，开启测定器下端的活塞，将水缓缓放出，至油层下降至其上活塞，将水缓缓放出，至油层下降至其上端恰与刻度端恰与刻度0线平齐，读取挥发油量，并计线平齐，读取挥发油量，并计算供试品中挥发油的含量（算供试品中挥发油的含量（%）。）。挥发油含量挥发油含量=V/W100%其中其中V=挥发油的体积挥发油的体积(ml)；W=供试品供试品的重量的重量(g)3.苍术挥发油组成苍术挥发油组成 吸取挥发油少量，置干燥小瓶中，加乙醚吸取挥发油少量，置干燥小瓶中，加乙醚1ml，加少量无水硫酸钠，上清液作为供试品溶液。吸加少量无水硫酸钠，上清液作为供试品溶液。吸取供试品溶液取供试品溶液5l，点于硅胶，点于硅胶G薄层板上，以石油薄层板上，以石油醚（醚（6090）-乙酸乙酯（乙酸乙酯（8515）为展开剂，）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，香草醛硫酸溶液，供试品的色谱中，出现橙红色、污绿色二个主斑供试品的色谱中，出现橙红色、污绿色二个主斑点。点。四、实验记录四、实验记录 1.绘制黄柏鉴别的薄层色谱图。绘制黄柏鉴别的薄层色谱图。2.绘制挥发油测定仪器装置图，记录实验中的重要绘制挥发油测定仪器装置图，记录实验中的重要步骤及出现的问题，计算本品挥发油的含量。步骤及出现的问题，计算本品挥发油的含量。3.绘制苍术挥发油薄层色谱图。绘制苍术挥发油薄层色谱图。五、思考题五、思考题 1.本法测定挥发油的原理是什么？若挥发油相对密本法测定挥发油的原理是什么？若挥发油相对密度为度为1.0以上如何设计实验？以上如何设计实验？2.挥发油测定的意义。挥发油测定的意义。3.什么是对照品和对照药材？什么是对照品和对照药材？实验二、实验二、注射用双黄连（冻干）注射用双黄连（冻干）的鉴别与检查的鉴别与检查 一、目的要求一、目的要求 1.1.掌握薄层色谱法在中成药鉴别中的应用掌握薄层色谱法在中成药鉴别中的应用 2.2.熟悉熟悉注射剂杂质检查的目的、原理及操作方法注射剂杂质检查的目的、原理及操作方法 二、原理二、原理 1.1.处方处方：黄芩，金银花，连翘：黄芩，金银花，连翘 2.2.制法制法：略：略 3.3.功能与主治功能与主治：清热解毒，疏风解表。用于外感风清热解毒，疏风解表。用于外感风热所致的发热、咳嗽、咽痛；上呼吸道感染、轻型热所致的发热、咳嗽、咽痛；上呼吸道感染、轻型肺炎、扁桃体炎见上述证侯者肺炎、扁桃体炎见上述证侯者金银花金银花:忍冬科植物忍冬忍冬科植物忍冬Lonicera japonica、红腺忍冬红腺忍冬 L.hypoglauca、山银花山银花 L.confusa 或毛花柱忍冬或毛花柱忍冬 L.dasystyla 的干燥的干燥花蕾或带初开的花。花蕾或带初开的花。成分：成分：主要含有绿原酸主要含有绿原酸（Chlorogenic acid）、）、异绿原酸异绿原酸（Isochlorogenic acid）木犀草素木犀草素（Luteolin）以及挥发油。以及挥发油。4.药材来源及化学成分药材来源及化学成分黄芩黄芩:为唇形科植物黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根。的干燥根。成分：成分：黄芩苷黄芩苷 、汉黄芩苷、汉黄芩苷 、千层纸素、千层纸素A A葡萄糖醛酸苷等葡萄糖醛酸苷等黄芩苷黄芩苷 绿原酸绿原酸OOHOOHOOHOHOHCOOHCOOOHHOCOOHOHHOOH连翘连翘：木犀科植物连翘：木犀科植物连翘Forsythia suspenseForsythia suspense 的干燥果实的干燥果实 成分：成分：主要含有主要含有连翘酯苷（连翘酯苷（ForsythosideForsythoside）A A、B B、C C和和D D、连、连翘酚（翘酚（ForsytholForsythol）、连翘苷（）、连翘苷（PhillyrinPhillyrin）、齐墩果酸）、齐墩果酸（Oleanolic acidOleanolic acid）和熊果酸（）和熊果酸（Ursolic acidUrsolic acid）等）等 Forsythoside AForsythoside A R1=R2=H R3=Rha5.5.黄芩与金银花的鉴别黄芩与金银花的鉴别 ：聚酰胺薄层色谱法，聚酰胺薄层色谱法，以黄芩苷和绿原酸对照品溶以黄芩苷和绿原酸对照品溶液、黄芩和金银花阴性对照液作液、黄芩和金银花阴性对照液作对照对照1 2 3 4 5黄芩与金银花的薄层鉴别黄芩与金银花的薄层鉴别1 1、黄芩苷、黄芩苷 2 2、绿原酸、绿原酸 3 3、供试品供试品 4 4、黄芩阴性对照液、黄芩阴性对照液5 5、金银花阴性对照液、金银花阴性对照液6.6.连翘的鉴别连翘的鉴别 ：硅胶薄层色谱法，硅胶薄层色谱法，以连翘对照药材溶液作对照以连翘对照药材溶液作对照7.7.注射剂杂质检查项目：注射剂杂质检查项目：蛋白质蛋白质加磺基水杨酸或鞣酸检查加磺基水杨酸或鞣酸检查 鞣质鞣质加鸡蛋清或明胶氯化钠试液检查加鸡蛋清或明胶氯化钠试液检查 重金属重金属不得超过百万分之十不得超过百万分之十 砷盐砷盐不得超过百万分之二不得超过百万分之二 草酸盐草酸盐加氯化钙检查加氯化钙检查 钾离子检查钾离子检查加四苯硼酸钠检查加四苯硼酸钠检查 树脂检查树脂检查加盐酸或冰醋酸检查加盐酸或冰醋酸检查三、实验内容三、实验内容 1.黄芩与金银花的鉴别黄芩与金银花的鉴别 2.2.连翘的鉴别连翘的鉴别 3.3.检查检查 (1)(1)蛋白质蛋白质 (2)(2)鞣质鞣质 (3)(3)树脂树脂 (4)(4)草酸盐草酸盐 供试品溶液供试品溶液2.连翘对照药材溶液连翘对照药材溶液1 2四、实验记录四、实验记录 1.绘制绘制黄芩与金银花黄芩与金银花鉴别的薄层色谱图鉴别的薄层色谱图 2.绘制连翘薄层色谱图绘制连翘薄层色谱图 3.记录注射用双黄连（冻干）的检查实验结记录注射用双黄连（冻干）的检查实验结果果。五、思考题五、思考题 1.鉴别黄芩时为什么可用聚酰胺薄膜色谱鉴别黄芩时为什么可用聚酰胺薄膜色谱？2.注射剂中杂质检查项目主要有哪些？注射剂中杂质检查项目主要有哪些？实验三实验三 大山楂丸的鉴别大山楂丸的鉴别一、目的要求一、目的要求 掌握常用分析方法在中成药鉴别中的应用。掌握常用分析方法在中成药鉴别中的应用。二、原理二、原理 1.1.处方处方：山楂山楂1000g，神曲（焦），神曲（焦）150g，麦芽（炒），麦芽（炒）150g。2.2.制法制法：粉碎，过筛，混匀。取蔗糖粉碎，过筛，混匀。取蔗糖600g，加水，加水270ml与炼蜜与炼蜜600g，混合，滤过，与上述粉末混匀，混合，滤过，与上述粉末混匀，制成大蜜丸，即得。制成大蜜丸，即得。3.3.功能与主治功能与主治：开胃消食。用于食积内停所致的食开胃消食。用于食积内停所致的食欲不振，消化不良，脘腹胀闷。欲不振，消化不良，脘腹胀闷。4.药材来源及化学成分药材来源及化学成分山楂山楂:蔷薇科植物山里红蔷薇科植物山里红Crataegus pinnatifida Bge.var.major N.E.Br.或山楂或山楂Crataegus pinnatifida Bge.的干燥成熟果实的干燥成熟果实。成分：成分：黄酮类黄酮类-金丝桃苷、牡荆素等金丝桃苷、牡荆素等 有机酸有机酸 熊果酸、齐墩果酸、山楂酸等熊果酸、齐墩果酸、山楂酸等 熊果酸熊果酸（乌苏酸）（乌苏酸）牡荆素牡荆素OOOHOHO-D-galHOOHOOOHHOOHglcHOCOOH金丝桃苷金丝桃苷5.鉴别方法鉴别方法显微鉴别：药材原粉入药，保留各单味显微鉴别：药材原粉入药，保留各单味药的显微特征，可作为鉴别依据。药的显微特征，可作为鉴别依据。B.颜色反应：盐酸镁粉反应。颜色反应：盐酸镁粉反应。C.TLC法法:以熊果酸为对照，经硫酸乙醇显以熊果酸为对照，经硫酸乙醇显色后，熊果酸显紫红色。色后，熊果酸显紫红色。三、实验内容三、实验内容1.1.显微鉴别：显微鉴别：取本品取本品1 1丸，切碎，丸，切碎，120120干燥干燥2 2小时，放小时，放冷至室温，粉碎至细粉，取少许细粉用冷至室温，粉碎至细粉，取少许细粉用水合氯醛水合氯醛试试液透化后滴加适量稀甘油，置显微镜下观察。液透化后滴加适量稀甘油，置显微镜下观察。神曲中小麦的粉末特征：神曲中小麦的粉末特征：淀粉粒单粒类圆形，略扁，直径约至淀粉粒单粒类圆形，略扁，直径约至43m43m，脐点呈，脐点呈长裂缝状；复粒较小，由长裂缝状；复粒较小，由2 26 6分粒组成。分粒组成。横细胞横细胞表表面观呈长条形，直径面观呈长条形，直径7 722m22m，长，长4040243m243m，垂，垂周壁连珠状增厚。周壁连珠状增厚。麦芽的粉末特征：麦芽的粉末特征：稃片外表皮淡黄色，表面观由稃片外表皮淡黄色，表面观由长细胞与两个短细胞长细胞与两个短细胞相间排列。长细胞长条形，壁厚，深波状弯曲。相间排列。长细胞长条形，壁厚，深波状弯曲。六神曲中小麦：六神曲中小麦：a.a.淀粉粒淀粉粒 b.b.果皮横细胞及果皮横细胞及管细胞管细胞2.2.麦芽（稃片外表麦芽（稃片外表皮表面观）皮表面观）3.3.山楂：山楂：a.a.石细胞石细胞 b.b.纤维纤维 c.c.果皮表皮细胞果皮表皮细胞 d.d.方晶方晶2.2.颜色反应颜色反应 取本品取本品4.5g4.5g，剪碎，加乙醇，剪碎，加乙醇20ml20ml，加热，加热1010分钟，滤过。取滤液分钟，滤过。取滤液1ml1ml，加少量镁粉与浓盐酸，加少量镁粉与浓盐酸2 23 3滴，加热滴，加热4 45 5分钟后，即显橙红色。分钟后，即显橙红色。3.TLC3.TLC法法供试品溶液的制备：供试品溶液的制备：取取2 2项下溶液蒸干，残渣加水项下溶液蒸干，残渣加水5ml5ml，加热溶解，加乙酸乙酯加热溶解，加乙酸乙酯5ml5ml振摇提取振摇提取2 2次，合并乙酸乙次，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml2ml使溶解。使溶解。色谱条件：色谱条件：薄层板：薄层板：硅胶硅胶G G展开剂：展开剂：三氯甲烷三氯甲烷-丙酮（丙酮（9 91 1）显色：显色：喷以喷以10%10%硫酸乙醇溶液，加热显色。硫酸乙醇溶液，加热显色。点样量点样量：2 2l l结果：结果：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点。显相同的紫红色斑点。四、实验记录四、实验记录 1.绘制显微鉴别图。绘制显微鉴别图。2.绘制薄层色谱图。绘制薄层色谱图。实验四实验四 大山楂丸中总黄酮大山楂丸中总黄酮的含量测定的含量测定 一、目的要求一、目的要求 掌握总黄酮成分含量测定的原理和方法。掌握总黄酮成分含量测定的原理和方法。牡荆素牡荆素OOOHOHO-D-galHOOHOOOHHOOHglc金丝桃苷金丝桃苷二、原理二、原理 山楂黄酮类山楂黄酮类:C3-OH、C5-OH或或3，4邻二酚羟基邻二酚羟基,与与Al3+产生颜色反应产生颜色反应,吸收一定波长的可见光。吸收一定波长的可见光。本实验以与山楂中总黄酮结构类似的槲皮素为对照本实验以与山楂中总黄酮结构类似的槲皮素为对照品品,从槲皮素标准曲线读出总黄酮的量从槲皮素标准曲线读出总黄酮的量,换算出成药中换算出成药中总黄酮的含量。总黄酮的含量。三、实验内容三、实验内容1.1.标准曲线的绘制标准曲线的绘制 精密量取精密量取0.2mg/ml的槲皮素对照品溶液的槲皮素对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置，分别置10ml量瓶量瓶中中,各加各加50%乙醇溶液乙醇溶液至至5ml,精密加精密加5%亚硝酸亚硝酸钠钠溶液溶液0.3ml,摇匀摇匀,放置放置6分钟分钟,加入加入10%硝酸硝酸铝铝溶液溶液0.3ml,再放置再放置6分钟分钟,加入加入1mol/L氢氧化氢氧化钠钠溶液溶液4ml，再加，再加50%乙醇溶液至刻度乙醇溶液至刻度,摇匀摇匀,放置放置15分钟分钟,以相应试剂为空白，置比色杯中以相应试剂为空白，置比色杯中,于于500nm波长处测定吸收度波长处测定吸收度,以吸收度为纵坐以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。B.B.供试品溶液的制备：供试品溶液的制备：取取120干燥干燥2小时的大山楂丸粗粉小时的大山楂丸粗粉1.0g,置置50ml锥形瓶中，加锥形瓶中，加95%乙醇乙醇20ml，超声提取，超声提取15分钟分钟,滤过；滤渣再加滤过；滤渣再加50%乙醇乙醇10ml，超声，超声提取提取5分钟分钟,滤过滤过,合并滤液，移入合并滤液，移入50ml量瓶中，量瓶中，放凉至室温，补加蒸馏水至刻度，摇匀，即得。放凉至室温，补加蒸馏水至刻度，摇匀，即得。C.C.测定法：测定法：精密吸取供试品溶液精密吸取供试品溶液1ml,置置10ml量瓶中量瓶中,以下同标准曲线项下操作以下同标准曲线项下操作,测定其吸收度测定其吸收度,由标由标准曲线中读出供试品中槲皮素的含量，即得，准曲线中读出供试品中槲皮素的含量，即得，计算大山楂丸中总黄酮的含量。计算大山楂丸中总黄酮的含量。四、实验记录四、实验记录 1.绘制标准曲线。绘制标准曲线。2.计算总黄酮的含量。计算总黄酮的含量。五、思考题五、思考题 1.采用本方法所测定的总黄酮含量是相对采用本方法所测定的总黄酮含量是相对含量还是绝对含量含量还是绝对含量?说明结果的意义。说明结果的意义。2.影响本实验含量测定准确性的因素有哪影响本实验含量测定准确性的因素有哪些些?实验五实验五 牛黄解毒片的理化鉴别牛黄解毒片的理化鉴别Physical-chemical Identification of Niuhuan Jiedu Tablets 一、目的要求一、目的要求 掌握中成药理化鉴别的常用方法。掌握中成药理化鉴别的常用方法。二、原理二、原理 1.1.处方处方：牛黄牛黄 5g，大黄，大黄 200g，黄芩，黄芩 150g，石膏，石膏 200g，雄黄，雄黄50g，冰片，冰片 28g，桔梗，桔梗 100g，甘草，甘草 50g。2.2.制法制法：雄黄水飞成细粉；大黄粉碎成细粉；人工雄黄水飞成细粉；大黄粉碎成细粉；人工牛黄、冰片研细牛黄、冰片研细；其余黄芩等四味加水煎煮二次，；其余黄芩等四味加水煎煮二次，每次每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成稠膏，加小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成稠膏，加入大黄、雄黄粉末，制成颗粒，干燥，再加入人工入大黄、雄黄粉末，制成颗粒，干燥，再加入人工牛黄、冰片粉末，混匀，压制成片，包糖衣或薄膜牛黄、冰片粉末，混匀，压制成片，包糖衣或薄膜衣，即得。衣，即得。3.3.功能与主治功能与主治：清热解毒清热解毒。4.药材来源及化学成分药材来源及化学成分人工牛黄人工牛黄:胆酸胆酸（cholic acid）和去氧胆酸和去氧胆酸（deoxycholic acid）均是主要有效成分均是主要有效成分。胆酸胆酸 去氧胆酸去氧胆酸 COOHOHHOCOOHOHHOOH大黄大黄:含蒽醌类衍生物，少部分以游离态蒽醌衍生物蒽醌类衍生物，少部分以游离态蒽醌衍生物存在，如大黄酸、大黄素、芦荟大黄素等，大部分存在，如大黄酸、大黄素、芦荟大黄素等，大部分以结合蒽醌衍生物的形式存在。结合蒽醌衍生物为以结合蒽醌衍生物的形式存在。结合蒽醌衍生物为游离蒽醌的糖苷、或双蒽酮苷游离蒽醌的糖苷、或双蒽酮苷。番泻苷番泻苷 A A（sennoside Asennoside A）大黄素大黄素（emodinemodin）OOOHOHH3COHOHOglcCOOHOOglcOHOCOOHHHBorntrager Borntrager 反应反应OOO-OOOHOOO-OH-H+OOO-OOO-OOH-H+OHO 冰片冰片:含含龙脑和异龙脑龙脑和异龙脑。异龙脑异龙脑（d d-borneol-borneol）龙脑龙脑（l l-borneol-borneol）OHOH5.鉴别方法鉴别方法:理化方法及薄层色谱法理化方法及薄层色谱法 颜色反应：颜色反应：羟基蒽醌的Borntragger反应。微量升华微量升华 microsublimation A.TLC法法三、实验内容三、实验内容1.1.大黄的鉴别大黄的鉴别：颜色反应颜色反应：取本品取本品10片，刮去糖衣，研细，取样品粉末片，刮去糖衣，研细，取样品粉末1.0g，置锥形瓶中，加乙醇，置锥形瓶中，加乙醇15ml，温热，温热20分钟，滤过。取滤液分钟，滤过。取滤液2ml，加，加5%氢氧化钠试氢氧化钠试液，即显橙红色，再加液，即显橙红色，再加30过氧化氢溶液，过氧化氢溶液，加热红色不褪，加酸成酸性时，则红色消褪，加热红色不褪，加酸成酸性时，则红色消褪，变为黄色。变为黄色。TLCTLC法法供试品溶液的制备供试品溶液的制备：取本品取本品1片，研细，加甲醇片，研细，加甲醇20ml，超声处理超声处理10分钟，滤过，取滤液分钟，滤过，取滤液10ml，蒸干，残渣加，蒸干，残渣加水水10ml使溶解，加盐酸使溶解，加盐酸1ml，加热水解，加热水解20分钟，放冷，分钟，放冷，用乙醚用乙醚10ml振摇提取振摇提取,取乙醚液蒸干，残渣加三氯甲取乙醚液蒸干，残渣加三氯甲烷烷1ml使溶解使溶解。对照药材溶液对照药材溶液：取大黄对照药材取大黄对照药材0.1g，同法制作。，同法制作。对照品溶液对照品溶液：大黄素对照品甲醇溶液（大黄素对照品甲醇溶液（1mg/ml）色谱条件色谱条件：薄层板薄层板：硅胶硅胶G G展开剂展开剂：石油醚（石油醚（3060）-甲酸乙酯甲酸乙酯-甲酸甲酸 （15 5 1）的上层溶液。）的上层溶液。检视检视：紫外光灯（紫外光灯（365nm）下观察）下观察。点样量点样量：4 4l l2.2.人工牛黄的鉴别人工牛黄的鉴别TLCTLC法法供试品溶液的制备供试品溶液的制备：取本品取本品3片，研细，加三氯甲烷片，研细，加三氯甲烷10ml研磨，滤过。滤液蒸干，残渣加乙醇研磨，滤过。滤液蒸干，残渣加乙醇0.5ml使使溶解溶解。对照品溶液对照品溶液：胆酸对照品乙醇溶液（胆酸对照品乙醇溶液（1mg/ml）色谱条件色谱条件：薄层板薄层板：硅胶硅胶G展开剂展开剂：正己烷正己烷-乙酸乙酯乙酸乙酯-甲醇甲醇-醋酸醋酸 （20 25 3 2）的上层溶液）的上层溶液 检视检视：喷以喷以10%硫酸乙醇溶液，在硫酸乙醇溶液，在105加热约加热约10分钟，置紫外光灯（分钟，置紫外光灯（365nm）下观察）下观察。点样量：点样量：5 5l l3.3.冰片的鉴别冰片的鉴别 微量升华微量升华 取本品取本品1片，研细，进行微量升华，所片，研细，进行微量升华，所得的白色升华物，加新配制的得的白色升华物，加新配制的1%香草醛硫香草醛硫酸溶液酸溶液12滴，液滴边缘渐显玫瑰红色。滴，液滴边缘渐显玫瑰红色。四、实验记录四、实验记录1.记录牛黄解毒片的鉴别实验结果。记录牛黄解毒片的鉴别实验结果。2.绘制薄层色谱图。绘制薄层色谱图。实验六实验六 牛黄解毒片中羟基牛黄解毒片中羟基蒽醌的含量测定蒽醌的含量测定 一、目的要求一、目的要求 掌握羟基蒽醌含量测定的原理和方法。掌握羟基蒽醌含量测定的原理和方法。二、原理二、原理 1.1.处方处方：牛黄牛黄 5g，大黄，大黄 200g，黄芩，黄芩 150g，石膏，石膏 200g，雄黄，雄黄50g，冰片，冰片 28g，桔梗，桔梗 100g，甘草，甘草 50g。u本品主药为牛黄、大黄、黄芩、石膏本品主药为牛黄、大黄、黄芩、石膏u大黄泻火通便，清中上焦热毒大黄泻火通便，清中上焦热毒u且品种较复杂，全国应用除药典规定三种正品大黄且品种较复杂，全国应用除药典规定三种正品大黄 外，某些地区尚使用代用品土大黄外，某些地区尚使用代用品土大黄u故决定对其进行含量测定故决定对其进行含量测定大黄中的蒽醌类衍生物大黄中的蒽醌类衍生物OHOHCOOHOOOHOHCH3OOHOu大黄酸（大黄酸（rheinrhein）u大黄素（大黄素（emodinemodin）游离态蒽醌游离态蒽醌结合蒽醌衍生物结合蒽醌衍生物OHOgluCOOHOOgluOHOCOOHHHOHOgluCOOHOOgluOHOCOOHHHu番泻苷番泻苷 A（sennoside A）u番泻苷番泻苷 B B（sennoside Bsennoside B）评价大黄的质量须从这两类成分来考虑评价大黄的质量须从这两类成分来考虑 少部分以游离态蒽醌衍生物存在，如大少部分以游离态蒽醌衍生物存在，如大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素 大部分以结合蒽醌衍生物的形式存在大部分以结合蒽醌衍生物的形式存在 游离蒽醌衍生物不具有泻下作用游离蒽醌衍生物不具有泻下作用 结合蒽醌是大黄的主要泻下成分，其中结合蒽醌是大黄的主要泻下成分，其中以双蒽酮苷的泻下作用最强以双蒽酮苷的泻下作用最强蒽醌类衍生物的理化性质蒽醌类衍生物的理化性质 游离蒽醌衍生物具有升华性游离蒽醌衍生物具有升华性 蒽醌衍生物具有弱酸性反应蒽醌衍生物具有弱酸性反应 BorntragerBorntrager反应反应 羟基蒽醌衍生物遇碱性试剂（如氢氧化钠羟基蒽醌衍生物遇碱性试剂（如氢氧化钠碳酸钠、氢氧化铵）碳酸钠、氢氧化铵）显红色或红紫色显红色或红紫色 加酸成酸性后，红色褪去加酸成酸性后，红色褪去Borntrager Borntrager 反应反应OOO-OOOHOOO-OH-H+OOO-OOO-OOH-H+OHO二、原理二、原理 利用羟基蒽醌衍生物在碱性溶液中生成红色或紫红利用羟基蒽醌衍生物在碱性溶液中生成红色或紫红色物质在色物质在510530nm有最大吸收，采用分光光度法，有最大吸收，采用分光光度法，以大黄素为对照品，测定羟基蒽醌的含量。以大黄素为对照品，测定羟基蒽醌的含量。OOOHOH5%NaOH 2%NH4OHNHOOHOH三、实验内容三、实验内容A.A.供试品溶液的制备：供试品溶液的制备：精密称取样品粉末精密称取样品粉末0.5g0.5g，置，置50ml50ml锥形瓶中，加入三锥形瓶中，加入三氯甲烷氯甲烷25ml25ml，超声提取超声提取1010分钟分钟,滤过滤过,滤渣再加三氯滤渣再加三氯甲烷甲烷5 5mlml，超声提取，超声提取5 5分钟，滤过，分钟，滤过，合并两次提取液，于分液漏斗中，分别用合并两次提取液，于分液漏斗中，分别用5 5NaOH-2NaOH-2NHNH4 4OHOH混合碱液混合碱液15ml15ml、5ml5ml振摇提取两次，直至混合振摇提取两次，直至混合碱液无色，合并混合碱液，弃去三氯甲烷液，碱液无色，合并混合碱液，弃去三氯甲烷液，将混合碱液在水浴上加热将混合碱液在水浴上加热5 5分钟至分钟至三氯甲烷挥散尽三氯甲烷挥散尽，放置放置1010分钟，移入分钟，移入25ml25ml量瓶中，加量瓶中，加5%5%氢氧化钠氢氧化钠-2%-2%氢氧氢氧化铵混合碱液至刻度，摇匀，作为供试品溶液。化铵混合碱液至刻度，摇匀，作为供试品溶液。B.B.对照品溶液的制备：对照品溶液的制备：精密称取大黄素对照品甲醇溶液精密称取大黄素对照品甲醇溶液(0.1mg/ml)3ml(0.1mg/ml)3ml于于25ml25ml量瓶中量瓶中,加混合碱液至加混合碱液至刻度，摇匀刻度，摇匀,在水浴上加热在水浴上加热5 5分钟，放置至室分钟，放置至室温，作为对照品溶液。温，作为对照品溶液。B.B.测定法：测定法：以以5 5NaOH-2NaOH-2NHNH4 4OHOH混合碱液为空白，将供试品混合碱液为空白，将供试品溶液与大黄素对照品溶液在溶液与大黄素对照品溶液在530nm530nm处同时测定吸收度。处同时测定吸收度。按按外标一点法外标一点法，计算如下：，计算如下：样品中相当于大黄素的游离羟基蒽醌量样品中相当于大黄素的游离羟基蒽醌量=对照品溶液每ml含有大黄素的量 供试品溶液吸收度 25ml对照品溶液吸收度 样品称取量 100%外标一点法外标一点法 若已知标准曲线是通过原点的直线若已知标准曲线是通过原点的直线 只需测定一个量的对照品溶液，用外标只需测定一个量的对照品溶液，用外标一点法进行含量测定一点法进行含量测定 外标一点法是将对照品与待测样品，在外标一点法是将对照品与待测样品，在同一条件下进行测定同一条件下进行测定 用对照品比较供试品进行定量的方法用对照品比较供试品进行定量的方法 一般是外标（对照品）采用一个浓度一般是外标（对照品）采用一个浓度 同时测定同时测定3 34 4次次 分别测得各自吸收度，并求出平均值分别测得各自吸收度，并求出平均值 再用下式计算样品含量再用下式计算样品含量 m m样样，m m标标分别为供试品及对照品量分别为供试品及对照品量 A A样样，A A标标为供试品及对照品的吸收度为供试品及对照品的吸收度四、实验记录四、实验记录 记录含量测定实验数据，计算羟基蒽醌的含量。记录含量测定实验数据，计算羟基蒽醌的含量。五、思考题五、思考题1.1.简述采用分光光度法测定羟基蒽醌的原理。简述采用分光光度法测定羟基蒽醌的原理。2.2.能否采用分光光度法测定牛黄解毒片中结合型羟能否采用分光光度法测定牛黄解毒片中结合型羟基蒽醌含量？基蒽醌含量？小小 结结 注射用双黄连（冻干）注射用双黄连（冻干）二妙丸二妙丸 大山楂丸大山楂丸 牛黄解毒片牛黄解毒片中成药的鉴别中成药的鉴别 目的是检定制剂的真目的是检定制剂的真实性实性 有三大类有三大类 制剂的性状检查制剂的性状检查 显微鉴别法显微鉴别法 理化鉴别法理化鉴别法 理化鉴别法可分为：理化鉴别法可分为：一般化学反应法一般化学反应法 升华法升华法 光谱法光谱法 色谱法色谱法中成药的检查中成药的检查 目的是确保用药安目的是确保用药安全及有效，全及有效，包括三包括三方面方面 有效性有效性 纯度要求纯度要求 安全性安全性 检查可分为：检查可分为：制剂通则检查制剂通则检查 一般杂质检查一般杂质检查 特殊杂质检查特殊杂质检查 微生物限度检查微生物限度检查 残留农药检查残留农药检查 注射剂杂质检查项目：注射剂杂质检查项目：蛋白质蛋白质加磺基水杨酸或鞣酸检查加磺基水杨酸或鞣酸检查 鞣质鞣质加鸡蛋清或明胶氯化钠试液检查加鸡蛋清或明胶氯化钠试液检查 重金属重金属不得超过百万分之十不得超过百万分之十 砷盐砷盐不得超过百万分之二不得超过百万分之二 草酸盐草酸盐加氯化钙检查加氯化钙检查 钾离子检查钾离子检查加四苯硼酸钠检查加四苯硼酸钠检查 树脂检查树脂检查加盐酸或冰醋酸检查加盐酸或冰醋酸检查中成药的含量测定中成药的含量测定 中成药的含量测定是中成药的含量测定是 利用各种分析方法对中成药中有代表性利用各种分析方法对中成药中有代表性的成分的成分 有效成分或毒性成分有效成分或毒性成分 进行含量测定进行含量测定常用定量分析方法常用定量分析方法 化学分析法化学分析法 可见紫外分光光度法可见紫外分光光度法 薄层扫描法薄层扫描法 气相色谱法气相色谱法 高效液相色谱法高效液相色谱法 荧光分析法荧光分析法 原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法 实验七实验七 综合设计实验综合设计实验设计设计:n 止喘灵注射液的质量分析方法：止喘灵注射液的质量分析方法：1 1 1010号号n 安神补脑液的质量分析方法：安神补脑液的质量分析方法：1111 2020号号n 复方丹参片的质量分析方法：复方丹参片的质量分析方法：2121 3030号号设计要求设计要求n每每2人一组，制作人一组，制作ppt，选择一人讲解，讲解时，选择一人讲解，讲解时间控制在间控制在5分钟以内（分钟以内（ppt保存在此电脑中，做保存在此电脑中，做为实验报告）。为实验报告）。n仔细查阅文献，详细分析处方组成，制法。仔细查阅文献，详细分析处方组成，制法。n根据文献根据文献及处方组成、制法设计鉴别、含量测及处方组成、制法设计鉴别、含量测定方案。方法尽量不要雷同。定方案。方法尽量不要雷同。复方丹参片复方丹参片的质量分析的质量分析n姓名:n班级:n学号:n处方：处方：丹参丹参450g450g、三七、三七141g141g、冰片、冰片8g8gn制法：制法：n功能与主治：功能与主治：n药材来源及化学成分药材来源及化学成分n丹参：丹参：n三七：三七：n冰片；冰片；鉴别方法鉴别方法n显微鉴别：显微鉴别：检三七检三七n颜色反应：颜色反应：nTLC法法:检丹参酮检丹参酮A和冰片和冰片 检三七皂苷检三七皂苷 含量测定含量测定:n复方丹参片中丹参酮复方丹参片中丹参酮AA含量测定含量测定（HPLC)n复方丹参片中三七总皂苷的含量测定复方丹参片中三七总皂苷的含量测定 (固相萃取分光光度法固相萃取分光光度法)实验内容实验内容n1.鉴别n2.含量测定参考文献n1.n2.n可参考药典及中文期刊，可上网查维普等数据库。