DNA 残留量检测试剂盒中文说明书

DNA-DIG 标记：1、每个标记反应中加入10ng-3ug DNA,另加ddH2O补充至15ul体积。（未标记的对照DNA加5ul, 10ul ddH2O）2、将装有反应物的离心管放入沸水中变性10mi n,然后迅速冷却；3、然后依次加入以下溶液：Hexa nucleotide Mix, 10x 2uldNTP Labeling Mix 2ulKlenow enzyme labeling grade 1ul轻微离心，37C过夜。4、加入 2ul EDTA（0.2M Ph8.0）终止反应。（或 65C, 10min）标记效率检测：标记好的探针和对照稀释到1n g/ul。然后依次稀释为10pg/ul、3pg/ul、1pg/ul、0.3pg/ul、0.1pg/ul、0.03pg/ul、0.01pg/ul,检测各浓度的显色情况。1、分别取1ul各种浓度的探针点到一小块尼龙膜上；2、紫外交联固定（或 120C 30min 烘烤固定）3、 将膜放在一个装有20ml Maleic acid buffer的塑料容器中，15C-25C摇2min；4、10ml Blocking solution 温浴 30min；5、10ml Antibody solution 温浴 30min；6、10ml Washing buffer洗 15min,换 buffer 后再洗 15min；7、在 10ml Detection buffer 中平衡 2-5min；8、黑暗条件下,将膜于 2ml 新鲜的 colorsubstrate solution 中显色（显色时不能摇动）9、待显色完全后TE-buffer或ddH2O中洗5min终止反应。杂交：1、将适量体积（20ml/100cm2）的DIG Easy Hyb中预热到杂交温度，轻微摇动预杂交30min；2、DIG-labeled探针（约25ng/ml）于沸水中煮5min变性，迅速冰浴；3、 变性的DIG-labeled探针加入适量（3.5ml/100cm2）预热的DIG Easy Hyb中，混合，避免气泡产生;4、倒掉预杂交液，加入探针和预热的DIG Easy Hyb的混合液于膜上，杂交过夜。严谨洗涤：1、杂交膜用2xSSC, 0.1%SDS于15C-25C洗涤2次，每次5min；2、 再用0.5xSSC, 0.1%SDS （预热到洗涤温度）65-68C洗涤2次，每次15min。免疫检测：1、杂交和严谨洗涤后的膜用Washing buffer中冲洗1-5min；2、100ml Blocking solution 温浴 30min；3、20ml Antibody solution 温浴 30min；4、100ml Washing buffer 洗涤 2 次，每次 15min； 20ml Detection buffer 中平衡 2-5min；5、黑暗条件下，将膜于 10ml 新鲜的 colorsubstrate solution 中显色（显色时不能摇动）；6、待显色完全后50ml TE-buffer或ddH2O中洗5min终止反应。