资源描述
肝素钠效价检测方法试剂:羊血浆(冰冻保存)、0.9%生理盐水、0.25%CaCl2 (用生理盐水配置)、8%柠檬酸钠 溶液、8IU/mg肝素钠标准溶液。4.2.2.2 待检样品溶液的配置:精确称取肝素钠固体待检样品M mg,溶解并用0.9%生 理盐水定容至100ml,再取V ml定容至25ml即得待检样品溶液,冷藏保存。估计M及V的计算公式为:样品估计效价XMV/ 100=25X8估算时V只尽量小于10且取整数,从而计算出M值。4.2.2.3 检测方法:将恒温水域调制37C恒温,取出冰冻羊血浆,融化,并过滤,待 用。取2组10只试管,分别加入标样110ul、120ul200ul,然后每管加 入8%柠檬酸钠溶液20ul、0.25%CaCl2 0.8ml及过滤后的羊血浆1ml,另一组 加入待检样品溶液110ul、120ul200ul,同样每管加入8%柠檬酸钠溶液 20ul、0.25%CaCl2 0.8ml及过滤后的羊血浆1ml。并将每只试管盖好管盖, 倒转34次混匀,使内壁湿润,垂直放入37C水域1h1h后取出各管,检 查各管的凝固程度,并记录确定标样及待检样的1/2凝固点及体积。凝固程度标准: 完全凝固:溶液完全凝固,倒转试管并猛敲一下时,凝块不从管壁脱落。 3/4凝固:溶液完全凝固,但当猛敲一下时,凝块能从管壁脱落。 1/2凝固:大约一半体积的溶液凝固。 1/4凝固:少量溶液凝固。 0凝固:溶液悟凝固现象。若相邻两管跳过1/2凝固点则1/2凝固点的计算公式为 V=V2-(V2-V1)X(0.5-S1)/(S2-S1)(S1:小凝固度;S2:大凝固度;V1:相邻两管大凝固度加入的微升数;V2:相邻两管小凝 固度加入的微升数。)待检样品效价计算公式:4.2.2.4 F=待检样品估计效价X标品1 / 2凝固点微升数三样品1 / 2凝固点微升数4.2.2.5注意事项:4.2.2.6.1实验室操作环境必须控制在30C以下。4.2.2.6.2在使用新开启羊血浆前,需检测羊血浆是否能够正常使用。取试管一只,加入 0.8ml 0.25%CaCl2及过滤后的羊血浆1ml,盖好管盖,倒转34次混匀,使内壁湿润, 垂直放入37C水域5min, 5min后检查血浆是否凝固,如血浆凝固则可使用,未凝固则不 能使用。4.2.2.6.3如在检测过程中,标样的1 / 2凝固点高于200ul,则需重新调整羊血浆的1 /2凝固点。方法如下:取3组各10只试管组一:12345678910标样110120130140150160170180190200ul8%柠檬酸钠20202020202020202020ul0.25%CaCl20.80.80.80.80.80.80.80.80.80.8ml羊血浆1111111111ml组二:12345678910标样110120130140150160170180190200ul8%柠檬酸钠 30303030303030303030ul0.25%CaCl20.80.80.80.80.80.80.80.80.80.8 ml羊血浆1111111111ml组三:12345678910标样110120130140150160170180190200ul8%柠檬酸钠 40404040404040404040ul0.25%CaCl20.80.80.80.80.8 0.80.80.80.80.8 ml羊血浆1111111111ml将每只试管盖好管盖,倒转34次混匀,使内壁湿润,垂直放入37C水域lhlh后取出 各管,检查各管的凝固程度,并记录确定标样的1 / 2凝固点及体积。如1 / 2凝固点在llOul 200ul的,即可使用。选值最好在130ul170ul范围内。8%柠檬酸钠需用生理盐水配置。4.2.2效价(羊血浆法) 4.2.2.1、 试剂:羊血浆(冰冻保存)、0.9%生理盐水、0.25%CaCl2 (用生理盐水配置)、 8%柠檬酸钠溶液、8IU / mg肝素钠标准溶液。4.2.2.2 待检样品溶液的配置:精确称取肝素钠固体待检样品M mg,溶解并用0.9%生理盐水定容至100ml,再取V ml定容至25ml即得待检样品溶液,冷藏保存。估计M及V的计算公式为:样品估计效价XMV/ 100=25X8 估算时V只尽量小于10且取整数,从而计算出M值。4.2.2.3 检测方法:将恒温水域调制37C恒温,取出冰冻羊血浆,融化,并过滤,待 用。取2组10只试管,分别加入标样110ul、120ul200ul,然后每管加入8%柠檬酸钠 溶液20ul、0.25%CaCl2 0.8ml及过滤后的羊血浆1ml,另一组加入待检样品溶液110ul、 120ul200ul,同样每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul、0.25%CaCl2 0.8ml及过滤后的羊 血浆1ml。并将每只试管盖好管盖,倒转34次混匀,使内壁湿润,垂直放入37C水域 1h1h后取出各管,检查各管的凝固程度,并记录确定标样及待检样的1/2凝固点及体 积。4.2.2.4 凝固程度标准: 完全凝固:溶液完全凝固,倒转试管并猛敲一下时,凝块不从管壁脱落。 3/4凝固:溶液完全凝固,但当猛敲一下时,凝块能从管壁脱落。 1/2凝固:大约一半体积的溶液凝固。 1/4凝固:少量溶液凝固。 0凝固:溶液悟凝固现象。 若相邻两管跳过1/2凝固点则1/2凝固点的计算公式为V=V2-(V2-V1)X(0.5-S1)/(S2-S1)(S1:小凝固度;S2:大凝固度;VI:相邻两管大凝固度加入的微升数;V2:相邻两管小凝 固度加入的微升数。) 4.2.2.5待检样品效价计算公式:F=待检样品估计效价X标品1 / 2凝固点微升数三样品1 / 2凝固点微升数 4.2.2.6注意事项:4.2.2.6.1实验室操作环境必须控制在30C以下。4. 2. 2. 6. 2在使用新开启羊血浆前,需检测羊血浆是否能够正常使用。取试管一只,加入0.8ml 0.25%CaCl2及过滤后的羊血浆1ml,盖好管盖,倒转34次混匀,使内壁湿润, 垂直放入37C水域5min, 5min后检查血浆是否凝固,如血浆凝固则可使用,未凝固则不 能使用。4.2.2.6.3如在检测过程中,标样的1 / 2凝固点高于200ul,则需重新调整羊血浆的1/ 2凝固点。方法如下:取3组各10只试管组一:12345678910标样110120130140150160170180190200ul8%柠檬酸钠20202020202020202020ul0.25%CaCl20.80.80.80.80.80.80.80.80.80.8ml羊血浆1111111111ml组二:12345678910标样110120130140150160170180190200ul8%柠檬酸钠 30303030303030303030ul0.25%CaCl20.80.80.80.80.80.80.80.80.80.8 ml羊血浆1111111111ml组三:12345678910标样110120130140150160170180190200ul8%柠檬酸钠 40404040404040404040ul0.25%CaCl20.80.80.80.80.8 0.80.80.80.80.8 ml羊血浆1111111111ml将每只试管盖好管盖,倒转34次混匀,使内壁湿润,垂直放入37C水域1h1h后取出 各管,检查各管的凝固程度,并记录确定标样的1 / 2凝固点及体积。如1 / 2凝固点在110ul 200ul的,即可使用。选值最好在130ul170ul范围内。8%柠檬酸钠需用生理盐水配置。
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