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第一章 蛋 白 质一、知识要点（一）氨基酸的结构蛋白质是重要的生物大分子，其组成单位是氨基酸。组成蛋白质的氨基酸有20种，均为-氨基酸。每个氨基酸的-碳上连接一个羧基，一个氨基，一个氢原子和一个侧链R基团。20种氨基酸结构的差别就在于它们的R基团结构的不同。根据20种氨基酸侧链R基团的极性，可将其分为四大类：非极性R基氨基酸（8种）；不带电荷的极性R基氨基酸（7种）；带负电荷的R基氨基酸（2种）；带正电荷的R基氨基酸（3种）。（二）氨基酸的性质氨基酸是两性电解质。由于氨基酸含有酸性的羧基和碱性的氨基，所以既是酸又是碱，是两性电解质。有些氨基酸的侧链还含有可解离的基团，其带电状况取决于它们的pK值。由于不同氨基酸所带的可解离基团不同，所以等电点不同。除甘氨酸外，其它都有不对称碳原子，所以具有D-型和L-型2种构型，具有旋光性，天然蛋白质中存在的氨基酸都是L-型的。酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸具有紫外吸收特性，在280nm处有最大吸收值，大多数蛋白质都具有这些氨基酸，所以蛋白质在280nm处也有特征吸收，这是紫外吸收法定量测定蛋白质的基础。氨基酸的-羧基和-氨基具有化学反应性，另外，许多氨基酸的侧链还含有羟基、氨基、羧基等可解离基团，也具有化学反应性。较重要的化学反应有：（1）茚三酮反应，除脯氨酸外，所有的-氨基酸都能与茚三酮发生颜色反应，生成蓝紫色化合物，脯氨酸与茚三酮生成黄色化合物。（2）Sanger反应，-NH2与2,4-二硝基氟苯作用产生相应的DNB-氨基酸。（3）Edman反应，-NH2与苯异硫氰酸酯作用产生相应的氨基酸的苯氨基硫甲酰衍生物（PIT-氨基酸）。Sanger反应和Edmen反应均可用于蛋白质多肽链N端氨基酸的测定。氨基酸通过肽键相互连接而成的化合物称为肽，由2个氨基酸组成的肽称为二肽，由3个氨基酸组成的肽称为三肽，少于10个氨基酸肽称为寡肽，由10个以上氨基酸组成的肽称为多肽。（三）蛋白质的结构蛋白质是具有特定构象的大分子，为研究方便，将蛋白质结构分为四个结构水平，包括一级结构、二级结构、三级结构和四级结构。一般将二级结构、三级结构和四级结构称为三维构象或高级结构。一级结构指蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序。肽键是蛋白质中氨基酸之间的主要连接方式，即由一个氨基酸的-氨基和另一个氨基酸的-之间脱去一分子水相互连接。肽键具有部分双键的性质，所以整个肽单位是一个刚性的平面结构。在多肽链的含有游离氨基的一端称为肽链的氨基端或N端，而另一端含有一个游离羧基的一端称为肽链的羧基端或C端。蛋白质的二级结构是指多肽链骨架盘绕折叠所形成的有规律性的结构。最基本的二级结构类型有-螺旋结构和-折叠结构，此外还有-转角和自由回转。右手-螺旋结构是在纤维蛋白和球蛋白中发现的最常见的二级结构,每圈螺旋含有3.6个氨基酸残基，螺距为0.54nm,螺旋中的每个肽键均参与氢键的形成以维持螺旋的稳定。-折叠结构也是一种常见的二级结构，在此结构中，多肽链以较伸展的曲折形式存在，肽链（或肽段）的排列可以有平行和反平行两种方式。氨基酸之间的轴心距为0.35nm,相邻肽链之间借助氢键彼此连成片层结构。蛋白质的三级结构是整个多肽链的三维构象，它是在二级结构的基础上，多肽链进一步折叠卷曲形成复杂的球状分子结构。具有三级结构的蛋白质一般都是球蛋白，这类蛋白质的多肽链在三维空间中沿多个方向进行盘绕折叠，形成十分紧密的近似球形的结构，分子内部的空间只能容纳少数水分子，几乎所有的极性R基都分布在分子外表面，形成亲水的分子外壳，而非极性的基团则被埋在分子内部，不与水接触。蛋白质分子中侧链R基团的相互作用对稳定球状蛋白质的三级结构起着重要作用。蛋白质的四级结构指数条具有独立的三级结构的多肽链通过非共价键相互连接而成的聚合体结构。在具有四级结构的蛋白质中，每一条具有三级结构的皑链称为亚基或亚单位，缺少一个亚基或亚基单独存在都不具有活性。四级结构涉及亚基在整个分子中的空间排布以及亚基之间的相互关系。维持蛋白质空间结构的作用力主要是氢键、离子键、疏水作用力和范德华力等非共价键，又称次级键。此外，在某些蛋白质中还有二硫键，二硫键在维持蛋白质构象方面也起着重要作用。蛋白质的空间结构取决于它的一级结构，多肽离岸主链上的氨基酸排列顺序包含了形成复杂的三维结构（即正确的空间结构）所需要的全部信息。（四）蛋白质结构与功能的关系不同的蛋白质，由于结构不同而具有不同的生物学功能。蛋白质的生物学功能是蛋白质分子的天然构象所具有的性质，功能与结构密切相关。1一级结构与功能的关系 蛋白质的一级结构与蛋白质功能有相适应性和统一性，可从以下几个方面说明：（1）一级结构的变异与分子病 蛋白质中的氨基酸序列与生物功能密切相关，一级结构的变化往往导致蛋白质生物功能的变化。如镰刀型细胞贫血症，其病因是血红蛋白基因中的一个核苷酸的突变导致该蛋白分子中-链第6位谷氨酸被缬氨酸取代。这个一级结构上的细微差别使患者的血红蛋白分子容易发生凝聚，导致红细胞变成镰刀状，容易破裂引起贫血，即血红蛋白的功能发生了变化。（2）一级结构与生物进化 研究发现，同源蛋白质中有许多位置的氨基酸是相同的，而其它氨基酸差异较大。如比较不同生物的细胞色素C的一级结构，发现与人类亲缘关系接近，其氨基酸组成的差异越小，亲缘关系越远差异越大。（3）蛋白质的激活作用 在生物体内，有些蛋白质常以前体的形式合成，只有按一 定方式裂解除去部分肽链之后才具有生物活性，如酶原的激活。2蛋白质空间结构与功能的关系 蛋白质的空间结构与功能之间有密切相关性，其特定的空间结构是行使生物功能的基础。以下两方面均可说明这种相关性。（1）.核糖核酸酶的变性与复性及其功能的丧失与恢复 核糖核酸酶是由124个氨基酸组成的一条多肽链，含有四对二硫键，空间构象为球状分子。将天然核糖核酸酶在8mol/L脲中用-巯基乙醇处理，则分子内的四对二硫键断裂，分子变成一条松散的肽链，此时酶活性完全丧失。但用透析法除去-巯基乙醇和脲后，此酶经氧化又自发地折叠成原有的天然构象，同时酶活性又恢复。（2）血红蛋白的变构现象 血红蛋白是一个四聚体蛋白质，具有氧合功能，可在血液中运输氧。研究发现，脱氧血红蛋白与氧的亲和力很低，不易与氧结合。一旦血红蛋白分子中的一个亚基与O2结合，就会引起该亚基构象发生改变，并引起其它三个亚基的构象相继发生变化，使它们易于和氧结合，说明变化后的构象最适合与氧结合。从以上例子可以看出，只有当蛋白质以特定的适当空间构象存在时才具有生物活性。（五）蛋白质的重要性质蛋白质是两性电解质，它的酸碱性质取决于肽链上的可解离的R基团。不同蛋白质所含有的氨基酸的种类、数目不同，所以具有不同的等电点。当蛋白质所处环境的pH大于pI时，蛋白质分子带负电荷，pH小于pI时，蛋白质带正电荷，pH等于pI时，蛋白质所带净电荷为零，此时溶解度最小。蛋白质分子表面带有许多亲水基团，使蛋白质成为亲水的胶体溶液。蛋白质颗粒周围的水化膜（水化层）以及非等电状态时蛋白质颗粒所带的同性电荷的互相排斥是使蛋白质胶体系统稳定的主要因素。当这些稳定因素被破坏时，蛋白质会产生沉淀。高浓度中性盐可使蛋白质分子脱水并中和其所带电荷，从而降低蛋白质的溶解度并沉淀析出，即盐析。但这种作用并不引起蛋白质的变性。这个性质可用于蛋白质的分离。蛋白质受到某些物理或化学因素作用时，引起生物活性的丧失，溶解度的降低以及其它性质的改变，这种现象称为蛋白质的变性作用。变性作用的实质是由于维持蛋白质高级结构的次级键遭到破坏而造成天然构象的解体，但未涉及共价键的断裂。有些变性是可逆的，有些变性是不可逆的。当变性条件不剧烈时，变性是可逆的，除去变性因素后，变性蛋白又可从新回复到原有的天然构象，恢复或部分恢复其原有的生物活性，这种现象称为蛋白质的复性。二、习 题（一）名词解释1 必需氨基酸（essential amino acid）2 等电点(isoelectric point,pI) 3 蛋白质的一级结构(protein primary structure) 4 构象(conformation)5 蛋白质的二级结构(protein secondary structure) 6盐析(salting out)7蛋白质的变性(denaturation)8蛋白质的复性(renaturation) (二) 填空题1蛋白质多肽链中的肽键是通过一个氨基酸的_基和另一氨基酸的_基连接而形成的。2大多数蛋白质中氮的含量较恒定，平均为_%，如测得1克样品含氮量为10mg,则蛋白质含量为_%。3在20种氨基酸中，酸性氨基酸有_和_2种，具有羟基的氨基酸是_和_，能形成二硫键的氨基酸是_.4蛋白质中的_、_和_3种氨基酸具有紫外吸收特性，因而使蛋白质在280nm处有最大吸收值。5精氨酸的pI值为10.76,将其溶于pH7的缓冲液中，并置于电场中，则精氨酸应向电场的_方向移动。6组成蛋白质的20种氨基酸中，含有咪唑环的氨基酸是_，含硫的氨基酸有_和_。7蛋白质的二级结构最基本的有两种类型，它们是_和_。8-螺旋结构是由同一肽链的_和 _间的_键维持的，螺距为_,每圈螺旋含_个氨基酸残基，每个氨基酸残基沿轴上升高度为_。天然蛋白质分子中的-螺旋大都属于_手螺旋。9在蛋白质的-螺旋结构中，在环状氨基酸_存在处局部螺旋结构中断。10球状蛋白质中有_侧链的氨基酸残基常位于分子表面而与水结合，而有_侧链的氨基酸位于分子的内部。11氨基酸与茚三酮发生氧化脱羧脱氨反应生成_色化合物，而_与茚三酮反应生成黄色化合物。12维持蛋白质的一级结构的化学键有_和_；维持二级结构靠_键；维持三级结构和四级结构靠_键，其中包括_、_、_和_.13稳定蛋白质胶体的因素是_和_。14GSH的中文名称是_，它的活性基团是_，它的生化功能是_。15加入低浓度的中性盐可使蛋白质溶解度_，这种现象称为_，而加入高浓度的中性盐，当达到一定的盐饱和度时，可使蛋白质的溶解度_并_,这种现象称为_,蛋白质的这种性质常用于_。16用电泳方法分离蛋白质的原理，是在一定的pH条件下，不同蛋白质的_、_和_不同，因而在电场中移动的_和_不同，从而使蛋白质得到分离。17氨基酸处于等电状态时，主要是以_形式存在，此时它的溶解度最小。18鉴定蛋白质多肽链氨基末端常用的方法有_和_。19今有甲、乙、丙三种蛋白质，它们的等电点分别为8.0、4.5和10.0,当在pH8.0缓冲液中，它们在电场中电泳的情况为：甲_，乙_，丙_。20当氨基酸溶液的pH=pI时，氨基酸以_离子形式存在，当pHpI时，氨基酸以_离子形式存在。21谷氨酸的pK1(-COOH)2.19, pK2 (-NH+3 ) = 9.67, pKR(R基)= 4.25,谷氨酸的等电点为_。22天然蛋白质中的螺旋结构，其主链上所有的羰基氧与亚氨基氢都参与了链内_键的形成，因此构象相当稳定。23一个-螺旋片段含有180个氨基酸残基，该片段中有_圈螺旋？该-螺旋片段的轴长为_.(三) 选择题1在生理pH条件下，下列哪种氨基酸带正电荷？A丙氨酸 B酪氨酸 C赖氨酸 D蛋氨酸 E异亮氨酸2下列氨基酸中哪一种是非必需氨基酸？A亮氨酸 B酪氨酸 C赖氨酸D蛋氨酸 E苏氨酸3蛋白质的组成成分中，在280nm处有最大吸收值的最主要成分是：A酪氨酸的酚环 B半胱氨酸的硫原子C肽键 D苯丙氨酸5下列哪种氨基酸属于亚氨基酸？A丝氨酸 B脯氨酸 C亮氨酸 D组氨酸6下列哪一项不是蛋白质-螺旋结构的特点？A天然蛋白质多为右手螺旋B肽链平面充分伸展C每隔3.6个氨基酸螺旋上升一圈。D每个氨基酸残基上升高度为0.15nm.7下列哪一项不是蛋白质的性质之一？A处于等电状态时溶解度最小 B加入少量中性盐溶解度增加C变性蛋白质的溶解度增加 D有紫外吸收特性8下列氨基酸中哪一种不具有旋光性？ALeu BAla CGly DSer EVal9下列有关蛋白质的叙述哪项是正确的？A蛋白质分子的净电荷为零时的pH值是它的等电点B大多数蛋白质在含有中性盐的溶液中会沉淀析出C由于蛋白质在等电点时溶解度最大，所以沉淀蛋白质时应远离等电点D以上各项均不正确10下列关于蛋白质结构的叙述，哪一项是错误的？A氨基酸的疏水侧链很少埋在分子的中心部位B电荷的氨基酸侧链常在分子的外侧，面向水相C白质的一级结构在决定高级结构方面是重要因素之一D白质的空间结构主要靠次级键维持11列哪些因素妨碍蛋白质形成-螺旋结构？A脯氨酸的存在 B氨基酸残基的大的支链C性氨基酸的相邻存在 D性氨基酸的相邻存在E以上各项都是12于-折叠片的叙述，下列哪项是错误的？A-折叠片的肽链处于曲折的伸展状态B的结构是借助于链内氢键稳定的C有的-折叠片结构都是通过几段肽链平行排列而形成的D基酸之间的轴距为0.35nm15. 下列哪项与蛋白质的变性无关？A. 肽键断裂 B氢键被破坏C离子键被破坏 D疏水键被破坏16蛋白质空间构象的特征主要取决于下列哪一项？A多肽链中氨基酸的排列顺序 B次级键C链内及链间的二硫键 D温度及pH17下列哪个性质是氨基酸和蛋白质所共有的？A胶体性质 B两性性质C沉淀反应 D变性性质E双缩脲反应18氨基酸在等电点时具有的特点是：A不带正电荷 B不带负电荷CA和B D溶解度最大E在电场中不泳动19蛋白质的一级结构是指：A蛋白质氨基酸的种类和数目 B蛋白质中氨基酸的排列顺序C蛋白质分子中多肽链的折叠和盘绕 D包括A,B和C(四) 是非判断题( ) 1氨基酸与茚三酮反应都产生蓝紫色化合物。( ) 2因为羧基碳和亚氨基氮之间的部分双键性质，所以肽键不能自由旋转。( ) 3所有的蛋白质都有酶活性。( ) 4-碳和羧基碳之间的键不能自由旋转。( ) 5多数氨基酸有D-和L-两种不同构型，而构型的改变涉及共价键的破裂。( ) 6所有氨基酸都具有旋光性。( ) 7构成蛋白质的20种氨基酸都是必需氨基酸。( ) 8蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序在很大程度上决定了它的构象。( ) 9一氨基一羧基氨基酸的pI为中性，因为-COOH和-NH2 的解离度相同。( ) 10蛋白质的变性是蛋白质立体结构的破坏，因此涉及肽键的断裂。( ) 11蛋白质是生物大分子，但并不都具有四级结构。( ) 12.用FDNB法和Edman降解法测定蛋白质多肽链N-端氨基酸的原理是相同的。( ) 13并非所有构成蛋白质的20种氨基酸的-碳原子上都有一个自由羧基和一个自由氨基。( ) 14蛋白质是两性电解质，它的酸碱性质主要取决于肽链上可解离的R基团。( ) 15在具有四级结构的蛋白质分子中，每个具有三级结构的多肽链是一个亚基。( ) 16所有的肽和蛋白质都能和硫酸铜的碱性溶液发生双缩尿反应。( ) 17一个蛋白质分子中有两个半胱氨酸存在时，它们之间可以形成两个二硫键。( ) 18盐析法可使蛋白质沉淀，但不引起变性，所以盐析法常用于蛋白质的分离制备。( )19蛋白质的空间结构就是它的三级结构。 ( )20具有四级结构的蛋白质，它的每个亚基单独存在时仍能保存蛋白质原有的生物活性。( )21变性蛋白质的溶解度降低，是由于中和了蛋白质分子表面的电荷及破 坏了外层的水膜所引起的。( )22蛋白质二级结构的稳定性是靠链内氢键维持的，肽链上每个肽键都参与氢键的形成。（五）问答题1什么是蛋白质的一级结构？为什么说蛋白质的一级结构决定其空间结构？2什么是蛋白质的空间结构？蛋白质的空间结构与其生物功能有何关系？3蛋白质的螺旋结构有何特点？4什么是蛋白质的变性作用和复性作用？蛋白质变性后哪些性质会发生改变？5简述蛋白质变性作用的机制。6蛋白质有哪些重要功能第一章 蛋白质化学习题解答（一）名词解释1必需氨基酸：指人体（和其它哺乳动物）自身不能合成，机体又必需，需要从饮食中获得的氨基酸。2. 氨基酸的等电点：指氨基酸的正离子浓度和负离子浓度相等时的pH值，用符号pI表示。3蛋白质的一级结构：指蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序，以及二硫键的位置。4构象：指有机分子中，不改变共价键结构，仅单键周围的原子旋转所产生的原子的空间排布。一种构象改变为另一种构象时，不涉及共价键的断裂和重新形成。构象改变不会改变分子的光学活性。 5蛋白质的二级结构：指在蛋白质分子中的局部区域内，多肽链沿一定方向盘绕和折叠的方式。6盐析：在蛋白质溶液中加入一定量的高浓度中性盐（如硫酸氨），使蛋白质溶解度降低并沉淀析出的现象称为盐析。7蛋白质的变性作用：蛋白质分子的天然构象遭到破坏导致其生物活性丧失的现象。蛋白质在受到光照、热、有机溶剂以及一些变性剂的作用时，次级键遭到破坏导致天然构象的破坏，但其一级结构不发生改变。8蛋白质的复性：指在一定条件下，变性的蛋白质分子恢复其原有的天然构象并恢复生物活性的现象。（二）填空题1 氨；羧基； 2 16 ；6.25 3 谷氨酸；天冬氨酸；丝氨酸；苏氨酸4 苯丙氨酸；酪氨酸；色氨酸；紫外吸收 5 负极 6 组氨酸；半胱氨酸；蛋氨酸 7 -螺旋结构；-折叠结构8 C=O；N=H；氢；0.54nm； 3.6；0.15nm；右9 脯氨酸；羟脯氨酸 10极性；疏水性 11蓝紫色；脯氨酸12肽键；二硫键；氢键；次级键；氢键；离子键；疏水键；范德华力13表面的水化膜；同性电荷 14谷胱甘肽；巯基15增加；盐溶；减小；沉淀析出；盐析；蛋白质分离16带电荷量；分子大小；分子形状；方向；速率 17两性离子；最小 18FDNB法（2,4-二硝基氟苯法）；Edman降解法（苯异硫氢酸酯法）19不动；向正极移动；向负极移动； 20两性离子；负；213.2222氢键；2350圈；27nm（三） 选择题1B：人（或哺乳动物）的必需氨基酸包括赖氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸8种，酪氨酸不是必需氨基酸。2A：酪氨酸和苯丙氨酸在280nm处的克分子消光系数分别为540何120,所以酪氨酸比苯丙氨酸有较大吸收，而且大多数蛋白质中都含有酪氨酸。肽键的最大吸收在215nm,半胱氨酸的硫原子在280nm和215nm均无明显吸收。3D：在此4种氨基酸中，只有赖氨酸的R基团可接受氢质子，作为碱，而其它3种氨基酸均无可解离的R侧链。4B：氨基酸的-碳上连接的是亚氨基而不是氨基，所以实际上属于一种亚氨基酸，而其它氨基酸的-碳上都连接有氨基，是氨基酸。5B：天然蛋白质的-螺旋结构的特点是，肽链围绕中心轴旋转形成螺旋结构，而不是充分伸展的结构。另外在每个螺旋中含有3.6个氨基酸残基，螺距为0.54nm,每个氨基酸残基上升高度为0.15nm,所以B不是-螺旋结构的特点。6C：蛋白质处于等电点时，净电荷为零，失去蛋白质分子表面的同性电荷互相排斥的稳定因素，此时溶解度最小；加入少量中性盐可增加蛋白质的溶解度，即盐溶现象；因为蛋白质中含有酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸，所以具有紫外吸收特性；变性蛋白质的溶解度减小而不是增加，因为蛋白质变性后，近似于球状的空间构象被破坏，变成松散的结构，原来处于分子内部的疏水性氨基酸侧链暴露于分子表面，减小了与水分子的作用，从而使蛋白质溶解度减小并沉淀。7C：甘氨酸的-碳原子连接的4个原子和基团中有2个是氢原子，所以不是不对称碳原子，没有立体异构体，所以不具有旋光性。8A：蛋白质的等电点是指蛋白质分子内的正电荷桌能总数与负电荷总数相等时的pH值。蛋白质盐析的条件是加入足量的中性盐，如果加入少量中性盐不但不会使蛋白质沉淀析出反而会增加其溶解度，即盐溶。在等电点时，蛋白质的净电荷为零，分子间的净电斥力最小，所以溶解度最小，在溶液中易于沉淀，所以通常沉淀蛋白质应调pH至等电点。9A：在蛋白质的空间结构中，通常是疏水性氨基酸的侧链存在于分子的内部，因为疏水性基团避开水相而聚集在一起，而亲水侧链分布在分子的表面以充分地与水作用；蛋白质的一级结构是多肽链中氨基酸的排列顺序，此顺序即决定了肽链形成二级结构的类型以及更高层次的结构；维持蛋白质空间结构的作用力主要是次级键。10E：脯氨酸是亚氨基酸,参与形成肽键后不能再与C=O 氧形成氢键，因此不能形成-螺旋结构;氨基酸残基的支链大时，空间位阻大，妨碍螺旋结构的形成；连续出现多个酸性氨基酸或碱性氨基酸时，同性电荷会互相排斥，所以不能形成稳定的螺旋结构。11C：-折叠结构是一种常见的蛋白质二级结构的类型，分为平行和反平行两种排列方式，所以题中C项的说法是错误的。在-折叠结构中肽链处于曲折的伸展状态，氨基酸残基之间的轴心距离为0.35nm, 相邻肽链（或同一肽链中的几个肽段）之间形成氢键而使结构稳定。12A：蛋白质的变性是其空间结构被破坏，从而引起理化性质的改变以及生物活性的丧失，但其一级结构不发生改变，所以肽键没有断裂。蛋白质变性的机理是维持其空间结构稳定的作用力被破坏，氢键、离子键和疏水键都是维持蛋白质空间结构的作用力，当这些作用力被破坏时空间结构就被破坏并引起变性，所以与变性有关。 13A：蛋白质的一级结构即蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序决定蛋白质的空间构象，因为一级结构中包含着形成空间结构所需要的所有信息，氨基酸残基的结构和化学性质决定了所组成的蛋白质的二级结构的类型以及三级、四级结构的构象；二硫键和次级键都是维持蛋白质空间构象稳定的作用力，但不决定蛋白质的构象；温度及pH影响蛋白质的溶解度、解离状态、生物活性等性质，但不决定蛋白质的构象。14B：氨基酸即有羧基又有氨基，可以提供氢质子也可以接受氢质子，所以即是酸又是碱，是两性电解质。由氨基酸组成的蛋白质分子上也有可解离基团，如谷氨酸和天冬氨酸侧链基团的羧基以及赖氨酸的侧链氨基，所以也是两性电解质，这是氨基酸和蛋白质所共有的性质；胶体性质是蛋白质所具有的性质，沉淀反应是蛋白质的胶体性质被破坏产生的现象；变性是蛋白质的空间结构被破坏后性质发生改变并丧失生物活性的现象，这三种现象均与氨基酸无关。15E： 氨基酸分子上的正电荷数和负电荷数相等时的pH值是其等电点，即净电荷为零，此时在电场中不泳动。由于净电荷为零，分子间的净电斥力最小，所以溶解度最小。16B：蛋白质的一级结构是指蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序，蛋白质中所含氨基酸的种类和数目相同但排列顺序不同时，其一级结构以及在此基础上形成的空间结构均有很大不同。蛋白质分子中多肽链的折叠和盘绕是蛋白质二级结构的内容，所以B项是正确的。（四）是非判断题1错：脯氨酸与茚三酮反应产生黄色化合物，其它氨基酸与茚三酮反应产生蓝色化合物。2对：在肽平面中，羧基碳和亚氨基氮之间的键长为0.132nm，介于CN 单键和CN 双键之间，具有部分双键的性质，不能自由旋转。3错：蛋白质具有重要的生物功能，有些蛋白质是酶，可催化特定的生化反应，有些蛋白质则具有其它的生物功能而不具有催化活性，所以不是所有的蛋白质都具有酶的活性。4错：-碳和羧基碳之间的键是CC单键，可以自由旋转。5对：在20种氨基酸中，除甘氨酸外都具有不对称碳原子，所以具有L-型和D-型2种不同构型，这两种不同构型的转变涉及到共价键的断裂和从新形成。6错：由于甘氨酸的-碳上连接有2个氢原子，所以不是不对称碳原子，没有2种不同的立体异构体，所以不具有旋光性。其它常见的氨基酸都具有不对称碳原子，因此具有旋光性。7错：必需氨基酸是指人（或哺乳动物）自身不能合成机体又必需的氨基酸，包括8种氨基酸。其它氨基酸人体自身可以合成，称为非必需氨基酸。8对：蛋白质的一级结构是蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序，不同氨基酸的结构和化学性质不同，因而决定了多肽链形成二级结构的类型以及不同类型之间的比例以及在此基础上形成的更高层次的空间结构。如在脯氨酸存在的地方-螺旋中断，R侧链具有大的支链的氨基酸聚集的地方妨碍螺旋结构的形成，所以一级结构在很大程度上决定了蛋白质的空间构象。9错：一氨基一羧基氨基酸为中性氨基酸，其等电点为中性或接近中性，但氨基和羧基的解离度，即pK值不同。10错：蛋白质的变性是蛋白质空间结构的破坏，这是由于维持蛋白质构象稳定的作用力次级键被破坏所造成的，但变性不引起多肽链的降解，即肽链不断裂。11对：有些蛋白质是由一条多肽链构成的，只具有三级结构，不具有四级结构，如肌红蛋白。12错：Edman降解法是多肽链N端氨基酸残基被苯异硫氢酸酯修饰，然后从多肽链上切下修饰的残基，经层析鉴定可知N端氨基酸的种类，而余下的多肽链仍为一条完整的多肽链，被回收后可继续进行下一轮Edman反应，测定N末端第二个氨基酸。反应重复多次就可连续测出多肽链的氨基酸顺序。FDNB法（Sanger反应）是多肽链N末端氨基酸与FDNB（2,4-二硝基氟苯）反应生成二硝基苯衍生物（DNP-蛋白），然后将其进行酸水解，打断所有肽键，N末端氨基酸与二硝基苯基结合牢固，不易被酸水解。水解产物为黄色的N端DNP-氨基酸和各种游离氨基酸。将DNP-氨基酸抽提出来并进行鉴定可知N端氨基酸的种类，但不能测出其后氨基酸的序列。13对：大多数氨基酸的-碳原子上都有一个自由氨基和一个自由羧基，但脯氨酸和羟脯氨酸的-碳原子上连接的氨基氮与侧链的末端碳共价结合形成环式结构，所以不是自由氨基。14对：蛋白质是由氨基酸组成的大分子，有些氨基酸的R侧链具有可解离基团，如羧基、氨基、咪唑基等等。这些基团有的可释放H+ ,有的可接受H+ ,所以使得蛋白质分子即是酸又是碱，是两性电解质。蛋白质分子中可解离R基团的种类和数量决定了蛋白质提供和接受H+ 的能力，即决定了它的酸碱性质。15对：在具有四级结构的蛋白质分子中，每个具有三级结构的多肽链是一个亚基。16错：具有两个或两个以上肽键的物质才具有类似于双缩脲的结构，具有双缩脲反应，而二肽只具有一个肽键，所以不具有双缩脲反应。17错：二硫键是由两个半胱氨酸的巯基脱氢氧化而形成的，所以两个半胱氨酸只能形成一个二硫键。18对：盐析引起的蛋白质沉淀是由于大量的中性盐破坏了蛋白质胶体的稳定因素（蛋白质分子表面的水化膜及所带同性电荷互相排斥），从而使蛋白质溶解度降低并沉淀，但并未破坏蛋白质的空间结构，所以不引起变性。根据不同蛋白质盐析所需的盐饱和度分段盐析可将蛋白质进行分离和纯化。19错：蛋白质的空间结构包括二级结构、三级结构和四级结构三个层次，三级结构只是其中一个层次。20错：具有四级结构的蛋白质，只有所有的亚基以特定的适当方式组装在一起时才具有生物活性，缺少一个亚基或单独一个亚基存在时都不具有生物活性。21错：蛋白质变性是由于维持蛋白质构象稳定的作用力（次级键和而硫键）被破坏从而使蛋白质空间结构被破坏并山个丧失生物活性的现象。次级键被破坏以后，蛋白质结构松散，原来聚集在分子内部的疏水性氨基酸侧链伸向外部，减弱了蛋白质分子与水分子的相互作用，因而使溶解度将低。22错：蛋白质二级结构的稳定性是由链内氢键维持的，如-螺旋结构和-折叠结构中的氢键均起到稳定结构的作用。但并非肽链中所有的肽键都参与氢键的形成，如脯氨酸与相邻氨基酸形成的肽键，以及自由回转中的有些肽键不能形成链内氢键。（五） 问答题（解题要点）1答：蛋白质一级结构指蛋白质多肽链中氨基酸残基的排列顺序。因为蛋白质分子肽链的排列顺序包含了自动形成复杂的三维结构（即正确的空间构象）所需要的全部信息，所以一级结构决定其高级结构。2答：蛋白质的空间结构是指蛋白质分子中原子和基团在三维空间上的排列、分布及肽链走向。蛋白质的空间结构决定蛋白质的功能。空间结构与蛋白质各自的功能是相适应的。3答：（1）多肽链主链绕中心轴旋转，形成棒状螺旋结构，每个螺旋含有3.6个氨基酸残基，螺距为0.54nm,氨基酸之间的轴心距为0.15nm.。（2）-螺旋结构的稳定主要靠链内氢键，每个氨基酸的NH与前面第四个氨基酸的CO 形成氢键。（3）天然蛋白质的-螺旋结构大都为右手螺旋。4答：蛋白质变性作用是指在某些因素的影响下，蛋白质分子的空间构象被破坏，并导致其性质和生物活性改变的现象。蛋白质变性后会发生以下几方面的变化：（1）生物活性丧失；（2）理化性质的改变，包括：溶解度降低，因为疏水侧链基团暴露；结晶能力丧失；分子形状改变，由球状分子变成松散结构，分子不对称性加大；粘度增加；光学性质发生改变，如旋光性、紫外吸收光谱等均有所改变。（3）生物化学性质的改变，分子结构伸展松散，易被蛋白酶分解。5答：维持蛋白质空间构象稳定的作用力是次级键，此外，二硫键也起一定的作用。当某些因素破坏了这些作用力时，蛋白质的空间构象即遭到破坏，引起变性。6答：蛋白质的重要作用主要有以下几方面：（1）生物催化作用 酶是蛋白质，具有催化能力，新陈代谢的所有化学反应几乎都是在酶的催化下进行的。（2）结构蛋白 有些蛋白质的功能是参与细胞和组织的建成。（3）运输功能 如血红蛋白具有运输氧的功能。（4）收缩运动 收缩蛋白（如肌动蛋白和肌球蛋白）与肌肉收缩和细胞运动密切相关。（5）激素功能 动物体内的激素许多是蛋白质或多肽，是调节新陈代谢的生理活性物质。（6）免疫保护功能 抗体是蛋白质，能与特异抗原结合以清除抗原的作用，具有免疫功能。（7）贮藏蛋白 有些蛋白质具有贮藏功能，如植物种子的谷蛋白可供种子萌发时利用。（8）接受和传递信息 生物体中的受体蛋白能专一地接受和传递外界的信息。（9）控制生长与分化 有些蛋白参与细胞生长与分化的调控。（10）毒蛋白 能引起机体中毒症状和死亡的异体蛋白，如细菌毒素、蛇毒、蝎毒、蓖麻毒素等。第五章 酶与辅酶一、知识要点在生物体的活细胞中每分每秒都进行着成千上万的大量生物化学反应，而这些反应却能有条不紊地进行且速度非常快，使细胞能同时进行各种降解代谢及合成代谢，以满足生命活动的需要。生物细胞之所以能在常温常压下以极高的速度和很大的专一性进行化学反应，这是由于生物细胞中存在着生物催化剂酶。酶是生物体活细胞产生的具有特殊催化能力的蛋白质。酶作为一种生物催化剂不同于一般的催化剂，它具有条件温和、催化效率高、高度专一性和酶活可调控性等催化特点。酶可分为氧化还原酶类、转移酶类、水解酶类、裂解酶类、异构酶类和合成酶类六大类。酶的专一性可分为相对专一性、绝对专一性和立体异构专一性，其中相对专一性又分为基团专一性和键专一性，立体异构专一性又分为旋光异构专一性、几何异构专一性和潜手性专一性。影响酶促反应速度的因素有底物浓度（S）、酶液浓度（E）、反应温度（T）、反应pH值、激活剂（A）和抑制剂（I）等。其中底物浓度与酶反应速度之间有一个重要的关系为米氏方程，米氏常数（Km）是酶的特征性常数，它的物理意义是当酶反应速度达到最大反应速度一半时的底物浓度。竞争性抑制作用、非竞争性抑制作用和反竞争性抑制作用分别对Km值与Vmax的影响是各不相同的。酶的活性中心有两个功能部位，即结合部位和催化部位。酶的催化机理包括过渡态学说、邻近和定向效应、锁钥学说、诱导楔合学说、酸碱催化和共价催化等，每个学说都有其各自的理论依据，其中过渡态学说或中间产物学说为大家所公认，诱导楔合学说也为对酶的研究做了大量贡献。同工酶和变构酶是两种重要的酶。同工酶是指有机体内能催化相同的化学反应，但其酶蛋白本身的理化性质及生物学功能不完全相同的一组酶；变构酶是利用构象的改变来调节其催化活性的酶，是一个关键酶，催化限速步骤。酶技术是近年来发展起来的，现在的基因工程、遗传工程、细胞工程、酶工程、生化工程和生物工程等领域都有酶技术的参与。维生素是生物生长和生命活动中所必需的微量有机物，在天然食物中含量极少，人体自身不能合成，必须从食物中摄取。这些维生素既不是构成各种组织的主要原料，也不是体内能量的来源，它们的生理功能主要是在物质代谢过程中起着非常重要的作用，因代谢过程离不开酶，而结合蛋白酶中的辅酶和辅基绝大多数都含有维生素成份。机体缺乏某种维生素时，代谢受阻，表现出维生素缺乏症，而植物体内能合成维生素。第五章 酶和辅酶习题（一）名词解释1米氏常数（Km值）2酶的比活力（enzymatic compare energy）3活性中心（active center）（二）英文缩写符号1NAD+（nicotinamide adenine dinucleotide） 2FAD（flavin adenine dinucleotide）4NADP+（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate）5FMN（flavin mononucleotide）6CoA（coenzyme A）7ACP（acyl carrier protein） （三）填空题1酶是 产生的，具有催化活性的 。2酶具有 、 、 和 等催化特点。3影响酶促反应速度的因素有 、 、 、 、 和 。5与酶催化的高效率有关的因素有 、 、 、 、 等。6丙二酸和戊二酸都是琥珀酸脱氢酶的 抑制剂。7变构酶的特点是：（1） ，（2） ，它不符合一般的 ，当以V对S作图时，它表现出 型曲线，而非 曲线。它是 酶。8转氨酶的辅因子为 即维生素 。其有三种形式，分别为 、 、 ，其中 在氨基酸代谢中非常重要，是 、 和 的辅酶。9叶酸以其 起辅酶的作用，它有 和 两种还原形式，后者的功能作为 载体。10一条多肽链Asn-His-Lys-Asp-Phe-Glu-Ile-Arg-Glu-Tyr-Gly-Arg经胰蛋白酶水解可得到 个多肽。11全酶由 和 组成，在催化反应时，二者所起的作用不同，其中 决定酶的专一性和高效率， 起传递电子、原子或化学基团的作用。12辅助因子包括 、 和 等。其中 与酶蛋白结合紧密，需要 除去， 与酶蛋白结合疏松，可以用 除去。13根据酶的专一性程度不同，酶的专一性可以分为 、 、 和 。 14酶的活性中心包括 和 两个功能部位，其中 直接与底物结合，决定酶的专一性， 是发生化学变化的部位，决定催化反应的性质。15酶活力是指 ，一般用 表示。16通常讨论酶促反应的反应速度时，指的是反应的 速度，即 时测得的反应速度。17pH值影响酶活力的原因可能有以下几方面：影响 ，影响 ，影响 。18温度对酶活力影响有以下两方面：一方面 ，另一方面 。19脲酶只作用于尿素，而不作用于其他任何底物，因此它具有 专一性；甘油激酶可以催化甘油磷酸化，仅生成甘油-1-磷酸一种底物，因此它具有 专一性。20酶促动力学的双倒数作图（Lineweaver-Burk作图法），得到的直线在横轴的截距为 ，纵轴上的截距为 。21维生素是维持生物体正常生长所必需的一类_有机物质。主要作用是作为_的组分参与体内代谢。22根据维生素的_性质，可将维生素分为两类，即_和_。23维生素B1主要功能是以_形式，作为_和_的辅酶，转移二碳单位。24维生素C是_的辅酶，另外还具有_作用等。（四）选择题1酶的活性中心是指：A酶分子上含有必需基团的肽段 B酶分子与底物结合的部位C酶分子与辅酶结合的部位 D酶分子发挥催化作用的关键性结构区E酶分子有丝氨酸残基、二硫键存在的区域2酶催化作用对能量的影响在于：A增加产物能量水平 B降低活化能 C降低反应物能量水平D降低反应的自由能 E增加活化能3竞争性抑制剂作用特点是：A与酶的底物竞争激活剂 B与酶的底物竞争酶的活性中心C与酶的底物竞争酶的辅基 D与酶的底物竞争酶的必需基团； E与酶的底物竞争酶的变构剂4竞争性可逆抑制剂抑制程度与下列那种因素无关：A作用时间 B抑制剂浓度 C底物浓度D酶与抑制剂的亲和力的大小 E酶与底物的亲和力的大小5哪一种情况可用增加S的方法减轻抑制程度：A不可逆抑制作用 B竞争性可逆抑制作用 C非竞争性可逆抑制作用D反竞争性可逆抑制作用 E无法确定6酶的竞争性可逆抑制剂可以使：AVmax减小，Km减小 BVmax增加，Km增加 CVmax不变，Km增加 DVmax不变，Km减小 EVmax减小，Km增加7下列常见抑制剂中，除哪个外都是不可逆抑制剂：A 有机磷化合物 B 有机汞化合物 C 有机砷化合物 D 氰化物 E 磺胺类药物8对于下列哪种抑制作用，抑制程度为50%时，I=Ki ：A不可逆抑制作用 B竞争性可逆抑制作用 C非竞争性可逆抑制作用 D反竞争性可逆抑制作用 E无法确定9下列辅酶中的哪个不是来自于维生素：ACoA BCoQ CPLP DFH2EFMN10下列叙述中哪一种是正确的：A所有的辅酶都包含维生素组分 B所有的维生素都可以作为辅酶或辅酶的组分C所有的B族维生素都可以作为辅酶或辅酶的组分D只有B族维生素可以作为辅酶或辅酶的组分11多食糖类需补充：A维生素B1 B维生素B2 C维生素B5 D维生素B6 E维生素B712多食肉类，需补充：A维生素B1 B维生素B2 C维生素B5 D维生素B6 E维生素B713以玉米为主食，容易导致下列哪种维生素的缺乏：A维生素B1 B维生素B2 C维生素B5 D维生素B6 E维生素B714下列化合物中除哪个外，常作为能量合剂使用：ACoA BATP C胰岛素 D生物素15下列化合物中哪个不含环状结构：A叶酸 B泛酸 C烟酸 D生物素 E核黄素16下列化合物中哪个不含腺苷酸组分：ACoA BFMN CFAD DNAD+ ENADP+17需要维生素B6作为辅酶的氨基酸反应有：A成盐、成酯和转氨 B成酰氯反应 C烷基化反应 D成酯、转氨和脱羧 E转氨、脱羧和消旋（五）是非判断题（ ）1酶促反应的初速度与底物浓度无关。 （ ）2当底物处于饱和水平时，酶促反应的速度与酶浓度成正比。 （ ）3某些酶的Km由于代谢产物存在而发生改变，而这些代谢产物在结构上与底物无关。（ ）4某些调节酶的V-S的S形曲线表明，酶与少量底物的结合增加了酶对后续底物分子的亲和力。（ ）5在非竞争性抑制剂存在下，加入足量的底物，酶促的反应能够达到正常Vmax。（ ）6酶可以促成化学反应向正反应方向转移。（ ）7对于可逆反应而言，酶既可以改变正反应速度，也可以改变逆反应速度。（ ）8酶只能改变化学反应的活化能而不能改变化学反应的平衡常数。（ ）9酶活力的测定实际上就是酶的定量测定。（ ）10从鼠脑分离的己糖激酶可以作用于葡萄糖（Km=610-6mol/L）或果糖（Km=210-3mol/L），则己糖激酶对果糖的亲和力更高。（ ）11一种酶有几种底物就有几种Km值。（ ）12当SKm时， V趋向于Vmax，此时只有通过增加E来增加V。（ ）13酶的最适温度与酶的作用时间有关，作用时间长，则最适温度高，作用时间短，则最适温度低。（ ）14增加不可逆抑制剂的浓度，可以实现酶活性的完全抑制。（ ）15竞争性可逆抑制剂一定与酶的底物结合在酶的同一部位。（ ）16酶反应的最适pH值只取决于酶蛋白本身的结构。（ ）17所有B族维生素都是杂环化合物。（ ）18脂溶性维生素都不能作为辅酶参与代谢。（ ）19植物的某些器官可以自行合成某些维生素，并供给植物整体生长所需。（ ）20维生素E不容易被氧化，因此可做抗氧化剂。（六）问答题及计算题1怎样证明酶是蛋白质？2简述酶作为生物催化剂与一般化学催化剂的共性及其个性？3（1）为什么某些肠道寄生虫如蛔虫在体内不会被消化道内的胃蛋白酶、胰蛋白酶消化？ （2）为什么蚕豆必须煮熟后食用，否则容易引起不适？4对活细胞的实验测定表明，酶的底物浓度通常就在这种底物的Km值附近，请解释其生理意义？为什么底物浓度不是大大高于Km或大大低于Km呢？5有时别构酶的活性可以被低浓度的竞争性抑制剂激活，请解释？6（1）对于一个遵循米氏动力学的酶而言，当S=Km时，若V=35mol/min，Vmax是多少mol/min？ （2）当S=210 -5mo/L，V=40mol/min，这个酶的Km是多少？ （3）若I表示竞争性抑制剂，KI=410-5mol/L，当S=310-2mol/L和I=310-5mol/L时，V是多少？ （4）若I是非竞争性抑制剂，在KI、S和I条件与（3）中相同时，V是多少？第五章 酶及辅酶习题解答（一）名词解释1米氏常数（Km值）：用m值表示，是酶的一个重要参数。m值是酶反应速度（V）达到最大反应速度（Vmax）一半时底物的浓度（单位M或mM）。米氏常数是酶的特征常数，只与酶的性质有关，不受底物浓度和酶浓度的影响。2酶的比活力：比活力是指每毫克蛋白质所具有的活力单位数，可以用下式表示： 比活力=活力单位数蛋白质量（mg） 3活性中心：酶分子中直接与底物结合，并催化底物发生化学反应的部位，称为酶的活性中心。（二）英文缩写符号1NAD+ （nico
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