浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建课件

CompanyLOGO浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建课件浅黄分枝杆菌简介浅黄分枝杆菌简介v 非结核分枝杆菌非结核分枝杆菌 多存在于环境中；为条件致病菌。是指结核分枝杆菌、牛分枝杆菌与麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌。其特性有别于结核分枝杆菌，如对酸、碱比较敏感；对常用的抗结核菌药物较耐受；抗原与结核分枝杆菌有交叉，常被误诊为结核杆菌，延误病情。v 浅黄分枝杆菌浅黄分枝杆菌 革兰氏阳性杆菌，直到稍弯曲，不运动。在生长的某些阶段耐酸性酒精，全部好氧生长缓慢或很缓慢。非结核分枝杆菌的一种，慢性条件性致病，病程长引发动物食欲下降、生产率下降，常误诊为结核，在人体内经常以某些免疫系统疾病的继发性感染出现。浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建课件基因组文库简介基因组文库简介基因组文库定义: 把某种生物基因组的全部遗传信息通过克隆载体贮存在一个受体菌克隆子群体中，这个群体即为这种生物的基因组文库。即某生物的基因组片段与适当的载体在体外通过重组后，转化宿主细胞，筛选后得到大量的阳性菌落，所有菌落的集合。 浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建课件基因组文库构建过程1234基因组基因组DNA片段的制备片段的制备载体的制备载体的制备将基因组将基因组DNA片段连接入载体片段连接入载体将重组载体转入宿主细胞将重组载体转入宿主细胞浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建课件阳性克隆筛选及文库评估阳性克隆筛选及文库评估DNA与载体连接与转化与载体连接与转化浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建课件浅黄分枝杆菌基因组的制备手动法提取浅手动法提取浅黄分枝杆菌全黄分枝杆菌全基因组，并对基因组，并对基因组进行酶基因组进行酶切，通过对酶切，通过对酶切时间和酶切切时间和酶切浓度的调整制浓度的调整制备备1-7kb大小大小的基因组片段。的基因组片段。菌体核酸的菌体核酸的提取与酶切提取与酶切 浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建课件载体的扩增与酶切通过小提质粒通过小提质粒法得到一定量法得到一定量载体载体pUC18，并用并用Sau3AI的的同尾酶同尾酶BamHI进行切割，得进行切割，得到与菌体到与菌体DNA片段切口相稳片段切口相稳合的线性化合的线性化pUC18载体。载体。载体扩增载体扩增与酶切与酶切 1 2第一泳道为环状载体第二泳道为酶切载体浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建课件基因组文库的构建将将DNA片段与线片段与线性化载体用性化载体用T4连连接酶连接后，转接酶连接后，转化于大肠杆菌感化于大肠杆菌感受态细胞受态细胞DH5，用蓝白斑法筛选用蓝白斑法筛选阳性克隆，其中阳性克隆，其中白色栗粒状菌活白色栗粒状菌活即为转化成功的即为转化成功的阳性克隆阳性克隆转化及筛选转化及筛选浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建课件转化阳性菌落的PCR检测用载体用载体pUC18的通用引物对的通用引物对随机挑取的阳随机挑取的阳性白色菌落做性白色菌落做菌落菌落PCR，其，其得到的条带均得到的条带均位于位于27kb长长短范围，证明短范围，证明目的片段已经目的片段已经成功插入受体成功插入受体细胞细胞PCR检测检测浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建课件DiagramThemeGallery is a Design Digital Content & Contents mall developed by Guild Design Inc.ThemeGallery is a Design Digital Content & Contents mall developed by Guild Design Inc.TitleAdd your text浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建课件 Cycle DiagramAdd YourText hereAdd YourText hereAdd YourText here浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建课件基因组文库的容量鉴定基因组文库的容量鉴定公式：公式：N=ln(1-P)/ln1-(I/G)N:一个完全基因文库所应包一个完全基因文库所应包含的重组体克隆数含的重组体克隆数p:所期望的目的基因在基因所期望的目的基因在基因文库中出现的几率文库中出现的几率 I/G :插入片段的平均大小与插入片段的平均大小与基因组基因组DNA大小的比值大小的比值公式验证法公式验证法经公式计算当克隆经公式计算当克隆数达数达262918418个时，可个时，可99%以上以上涵盖菌体全基因组涵盖菌体全基因组，本实验得阳性克，本实验得阳性克隆约为隆约为4104个，个，说明基因库容量足说明基因库容量足够涵盖浅黄分枝杆够涵盖浅黄分枝杆菌全基因组菌全基因组浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建课件结结 论论通过实验熟通过实验熟练掌握了分练掌握了分子生学核酸子生学核酸提取、酶切、提取、酶切、连接等操作连接等操作技能技能成功构建了成功构建了浅黄分枝杆浅黄分枝杆菌的基因组菌的基因组文库，为实文库，为实验室对该菌验室对该菌的后续研究的后续研究提供了基因提供了基因的种质资源的种质资源结论结论 1结论结论 2CompanyLOGO