病原体分子诊断技术进展PPT课件

上传人:钟*** 文档编号:387672 上传时间:2018-07-20 格式:PPT 页数:30 大小:3.32MB
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资源描述
病原体分子诊断技术进展,1,分子诊断概念和特点,概念:利用标本中的核酸作为检测对象,对感染性疾病、肿瘤、遗传性疾病等进行诊断和预后判断的方法。特点 特异性高、灵敏度高 稳定性高 诊断范围广、适应性强 临床应用前景好,2,什么是核酸?,链状分子DNA (脱氧核糖核酸) 贮存遗传信息RNA (核糖核酸) 传递遗传信息,3,DNA 和 RNA 的区别,糖基+Base,Nucleoside,+Phosphate,P,Nucleotide,A、DNA和RNA的主要区别就在骨架上的糖基。B、DNA很稳定,RNA不稳定。,4,RNA 和 DNA 的结构,dsDNA,ssDNA,ssRNA,5,通常RNA在细胞中拷贝数远高于DNA的拷贝数,6,如使用rRNA为靶标,将极大地提高了取样效率和扩增检测灵敏度,A、如果2ml样本含有1个细菌 取0.2ml样本,最终得到细菌的几率是1/10。,B、如果2ml样本含有1个细菌 先裂解,后取样, 2ml样本含有10000个rRNA。 取0.2ML样本,可得到 1000个分子,7,主要的核酸扩增技术,DNA扩增技术 A、PCR:使用Taq酶进行扩增,温度循环;RT-PCR将RNA变成DNA,再进行DNA扩增 B、实时荧光PCR:扩增与PCR相同,采用实时闭管荧光检测(分子信标,Taqman探针等)RNA扩增技术 A、TMA:恒温扩增,使用RT酶和T7酶;终点杂交保护检测 B、 SAT:扩增与TMA相同,采用实时闭管荧光检测(分子信标),8,实时闭管荧光检测常见技术,9,PCR原理,10,Real-Time PCR,11,TMA原理,12,SAT 原理(实时荧光TMA),13,SAT与PCR技术原理比较,14,DNA扩增技术(PCR)用于病原体检验的不足,不能区分“活菌”“死菌”与临床相关性差 不能区分“潜伏感染”“活动性感染”临床意义小,如CMV 交叉污染 变温检测,对仪器要求高反应易受抑制,15,RNA扩增技术用于病原体检验的优势,可以区分“死菌”“活菌”:病原体死亡,RNA很快降解 与临床相关性好(培养),减少无效治疗,比如抗生素滥用可以诊断“活动性感染” 活动性感染:指示RNA转录活跃 潜伏感染:指示RNA不转录不易污染:靶标和扩增产物都是RNA灵敏度高:RNA 拷贝数 DNA拷贝数,16,RNA诊断产品的商品化程度及应用,FDA或CE 认证产品 (TMA),SFDA 认证 产品 (SAT)沙眼衣原体(CT)核酸检测试剂盒(RNA恒温扩增)淋病奈瑟菌(NG)核酸检测试剂盒(RNA恒温扩增)解脲脲原体(UU)核酸检测试剂盒(RNA恒温扩增)结核分子杆菌(TB)核酸检测试剂盒(RNA恒温扩增),.,为什么我们必须熟悉和了解RNA扩增技术?(一),17,为什么我们必须熟悉和了解RNA扩增技术?(二),18,RNA 用于TB的检测(TMA)进入多国诊疗指南,1996:美国CDC首个NAAT技术在TB实验室诊断的应用的指南 TMA通过FDA认证,配合培养法对涂阳患者进行诊断2000:美国CDC更新NAAT法在TB实验室诊断中应用的指南 TMA用于TB疑似患者(涂阳、涂阴)痰液检测、PCR用于TB涂阳患者的痰液检测2007:加拿大卫生部TB诊断标准,为什么我们必须熟悉和了解RNA扩增技术?(三),19,什么样的病原体需要分子诊断?,传统方法不能及时检测或鉴定的病原体。,20,与PCR、TMA等相比,SAT改进了捕获方法(一),优点:几乎去除了所有抑制剂允许使用大体积样本可同时处理多种样本,21,与PCR、TMA等相比,SAT开发了全自动样本处理方法(二),全自动样本处理工作站,特点不需要任何样本前处理国内唯一全自动尿样(血样等)处理系统1.5小时,96个样本,(RD Mag -96),22,SAT应用例一(CT/NG尿液检测,国内唯一),CT/NG 尿液检测,CT的反复感染不仅导致不育,而且增加感染淋球菌、HIV、HBV等风险(68倍)【1】,【1】李跃进,谭湘芳.荧光定量PCR检测性病的结果分析J.实用医技杂志,2007,14(16):2151.,23,RNA(TMA)检测尿液中的CT(美国),尿液样本的灵敏度、特异性与拭子相当,Systematic Review: Noninvasive Testing for Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae. Ann Intern Med.2005;142:914-925.,24,SAT国内数据,检测样本量:1050例,25,SAT应用例二(结核分枝杆菌检测),操作流程,26,1、以临床诊断的结果为金标准,对253例结核患者痰标本;134例其他呼吸道感染患者标本同时进行涂片、TB-SAT、 Bactec MGIT 960检测。,SAT检测痰液标本中的结核杆菌,27,28,SAT其它产品,29,小结,RNA诊断技术,包括SAT,应用于传染病诊断具有明显的优势。我们预期,在接下来的十年里,RNA诊断技术将对传染病的诊断带来革命性的变化。,30,
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