高考生物总复习 第9单元 生物技术实践 第33讲 微生物的利用

第33讲 微生物的利用 考纲要求1.大肠杆菌的培养和分离(加试)。2.分离以尿素为氮源的微生物(加试)。考点一微生物的培养和分离1大肠杆菌(1)特性：大肠杆菌是革兰氏阴性、兼性厌氧(代谢类型)的肠道杆菌，在肠道中一般对人无害，但若进入人的泌尿系统，就会对人体产生危害。(2)用途：是基因工程技术中被广泛采用的工具。2细菌的培养和分离(1)细菌的繁殖：以分裂的方式繁殖，分裂速度很快，约20 min分裂一次。(2)培养的方法：需要将已有细菌的培养物转移到新的培养基中，一般用接种环(工具)转移带菌的培养物。(3)细菌分离的方法与特点分离方法特点划线分离法操作简单涂布分离法操作复杂，单菌落更易分开3.消毒和灭菌的区别项目条件结果常用的方法消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌4.大肠杆菌的培养和分离实验(1)实验内容：将大肠杆菌扩大培养和划线分离，即用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌，培养后再在LB固体平面培养基上划线进行分离，随后培养基上就会形成一个个单独的菌落。(2)实验步骤培养基灭菌倒平板接种划线分离培养观察50 mL LB液体培养基和50 mL LB固体培养基及培养皿高压蒸汽灭菌将培养基分别倒至4个灭菌后的培养皿中，水平放置，使之形成平面在装有液体培养基的三角瓶中接种大肠杆菌，培养12 h用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液一次，在固体培养基的平板上连续划线，盖好培养皿培养皿倒置(盖在下面)，放在37 恒温培养箱中培养1224 h后，可看到划线的末端出现不连续的单个菌落(3)大肠杆菌分离的用途：单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。5微生物接种的两种常用方法比较比较划线分离法涂布分离法工具接种环玻璃刮刀原理通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细菌细胞繁殖而来的肉眼可见的细胞群体，即菌落将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细菌细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落特点方法简单，但不适宜计数单菌落更易分开，但操作复杂些目的使培养基上形成单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体菌落思考诊断1连线无菌技术的方法、类型及对象2观察甲、乙、丙、丁四幅图，熟悉倒平板的操作流程，请填空：(1)请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙乙甲丁。(2)甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。(3)丁中的操作需要等待平板冷却凝固才能进行。3下图中甲为划线分离法中最重要的环节，乙为操作的结果：(1)每一次划线后都要将接种环灼烧()(2)除第一次划线外，每一次划线的起点都是第一次划线的末端()提示平板划线时除第一次划线外，每一次划线的起点都是上一次划线的末端，而不是第一次。4如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请思考：(1)获得图A效果和B效果的接种方法分别是什么？提示获得效果A的接种方法为涂布分离法，获得效果B的接种方法为划线分离法。(2)某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成了一片，最可能的原因是什么？应当怎样操作才可避免此种现象？提示最可能的原因是菌液浓度过高或划线时在划下一区域前未将接种环灼烧灭菌；采取的措施是增大稀释倍数或每次划新区域前先将接种环灼烧灭菌。1下图为“大肠杆菌的培养和分离”实验的基本流程，请回答下列问题：(1)A过程配制的是通用细菌培养基，称为_培养基。配制时除了加入特定的营养物质以外，还要加入一定量的氯化钠，以维持_。对培养基酸碱度的调节，应该在B过程的_(填“前面”或“后面”)。(2)D过程与C过程相比，培养基中增加的物质是_，E过程所需的温度是_。(3)D过程后，一个菌体便会形成一个_，这种分离方法是_的通用方法，也是筛选特定菌株的最简便方法之一。(4)植物组织培养时，先配制MS培养基，再加入一定比例的植物激素，当生长素相对较多时，可促进_。(5)植物组织培养和微生物培养都需要无菌操作，下列不适宜用高压蒸汽灭菌的是()A接种环和镊子B三角瓶和广口瓶C发芽培养基和生根培养基D用于培养的幼茎和幼芽答案(1)LB液体渗透压前面(2)琼脂4 (3)(单)菌落消除污染杂菌(或纯化菌种)(4)生根(5)D解析(1)LB液体培养基是通用的细菌培养基，LB固体平面培养基则用于划线分离形成单菌落。氯化钠的作用是维持培养基的渗透压。调节好酸碱度后才能进行灭菌，若灭菌后再进行酸碱度调节，又会产生新的污染。(2)在液体培养基的基础上加入一定量的琼脂可形成固体培养基。菌种应置于4 C冰箱中保存。(3)通过划线分离后，一个菌体就会繁殖出一个菌落。(4)植物组织培养中生长素相对较多时，有利于生根，而细胞分裂素相对较多时，则有利于生芽。(5)高压蒸汽灭菌常用于培养基、培养器材等的灭菌，而用于培养的幼茎和幼芽则不能进行任何灭菌操作，否则会导致细胞死亡。2检验饮用水的细菌含量是有效监控疾病发生的必要措施。请回答下列与检验饮用水有关的问题：(1)要测定饮用水中大肠杆菌的数量，常采用_法，通常将水样进行一系列的梯度_，然后将上述的水样用玻璃刮刀分别涂布到_的表面进行培养，记录菌落数量。用该方法统计样本菌落数时_(填“是”或“否”)需要对照组。原因是_。(2)下面所示的四种菌落分布图中，不可能由上述方法得到的是_。(3)大肠杆菌的培养条件是无菌，培养基配制时需加入氯化钠，以维持_。配制培养基时先_后_。A调节pH B. 灭菌C消毒 D调节温度答案(1)涂布分离稀释LB固体培养基是需要判断培养基使用之前是否被杂菌污染(培养基灭菌是否合格)(2)D(3)渗透压AB3请回答微生物培养和分离的有关问题：(1)欲从土壤中分离出能利用尿素的细菌：以_为唯一氮源且加入了_指示剂的培养基，用_法分离细菌。若培养基平板上有菌落存活且颜色变_，则说明分离成功。(2)分离以尿素为氮源的细菌和分离大肠杆菌都使用了LB培养基，其成分_。A前者含琼脂，后者不含琼脂和琼脂糖B两者都含有琼脂C前者含有琼脂糖，后者不含琼脂糖但含琼脂D两者都不含琼脂和琼脂糖答案(1)尿素酚红涂布分离(或涂布)红(2)C解析(1)分离能利用尿素的细菌，只需以尿素为唯一氮源，加酚红指示剂，采用涂布分离法分离细菌，只要培养基中的指示剂变红，标志着存在脲酶水解尿素的反应，证明菌株可以以尿素为氮源。(2)分离以尿素为氮源的细菌所用培养基应含有琼脂糖，而分离大肠杆菌所用培养基则不含琼脂糖而含琼脂。考点二分离以尿素为氮源的微生物1菌种特点含有脲酶，可以通过降解尿素作为其生长的氮源。2培养基用以尿素为唯一氮源的培养基培养，以LB全营养培养基为对照。3实验原理(1)筛选以尿素为氮源的微生物，可使用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行培养选择。(2)细菌合成的脲酶能将尿素分解成NH3，致使pH升高，使酚红指示剂变红。4实验步骤制备培养基：将已灭菌的LB固体培养基和尿素固体培养基分别倒入两个培养皿中，摇匀，平放至凝固制备细菌悬液：用1 g土样配制不同浓度的细菌悬液用涂布分离法分离细菌：将不同浓度的土壤稀释液分别加到有LB培养基和尿素培养基的培养皿中，并用玻璃刮刀涂布到整个平面上培养：将培养皿倒置，在37 恒温箱中培养2448 h观察：培养基中菌落数量5反应的鉴定在配制培养基时，加入指示剂酚红，培养时细菌将尿素分解并产生碱性的氨，使培养基上菌落周围出现红色的环带。思考诊断1分析下表所示培养基的配方，回答下列问题。成分含量成分含量KH2PO41.4 g葡萄糖10.0 gNa2HPO42.1 g尿素1.0 gMgSO47H2O0.2 g琼脂糖15.0 g将上述物质溶解后，用自来水定容到1 000 mL(1)在该培养基的配方中，为微生物提供碳源的物质是葡萄糖，提供氮源的物质是尿素。(2)该培养基是(填“是”或“否”)具有选择作用，因为只有能分解尿素的微生物才能生长。2如图为分离以尿素为氮源的微生物的实验，思考回答问题。(1)实验目的是使用含有尿素的培养基分离能产生脲酶的细菌；使用酚红作为指示剂，由颜色变化检测知酶所催化的反应，相关的反应式为(NH2)2COH2O2NH3CO2。(2)制备尿素固体培养基过程中采用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌法、G6玻璃漏斗过滤法。(3)从上图所示实验过程中可判断出细菌悬液C的稀释度为104，用涂布分离法分离细菌。3判断下列叙述的正误(1)土样应从有哺乳动物排泄物的地方取()提示有哺乳动物排泄物的地方含脲酶的细菌较多。(2)取104、105的土壤稀释液各0.1 mL，分别涂布于全营养LB固体培养基、尿素固体培养基上()(3)将实验组和对照组平板倒置，37 C恒温培养2448 h()(4)在尿素固体培养基上生长的细菌都是以尿素为氮源的细菌()42013年11月22日凌晨3点，青岛黄岛区发生石油泄漏事件，一些微生物可以有效地分解石油，如何配制选择培养基将这类微生物选择出来？提示配制的选择培养基中，石油作为唯一的碳源，然后用这种培养基培养多种微生物，凡是能在该种培养基上生存的就是能分解石油的微生物。1现从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，实验过程如下图所示：请回答：(1)欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，将土壤用_进行一系列的梯度稀释，同一浓度的土壤稀释液应至少涂布_个平板，通常以每个培养皿中有_个以内的单菌落的那一组稀释倍数为最合适。(2)接种后的培养皿_于37 的恒温箱中培养。若培养基中存在含脲酶的细菌，其菌落周围会出现_，这是由于尿素被分解产生氨气，遇培养基中的_产生的颜色变化，从而证明这一菌株能以尿素为氮源。(3)分离能利用尿素的细菌时所用的培养基成分上最主要的特点是_。(4)下列操作需要在酒精灯火焰旁进行的是_(多选)。A称取葡萄糖、琼脂糖等培养基成分B倒平板C涂布平板D微生物的培养(5)与LB全营养培养基上的菌落数相比，尿素培养基上只有少数菌落的原因是_。答案(1)无菌水320(2)倒置红色环带酚红指示剂(3)以尿素作为唯一氮源的(固体)培养基(4)BC(5)土壤中能利用尿素的细菌在土壤菌群中只占极少数2如图是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程。(1)图中选择培养基应以_为唯一氮源；鉴别培养基还需添加_作为指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成_色。(2)在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品溶液0.1 mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。该过程采取的接种方法是_，每克土壤样品中的细菌数量为_108个；与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较_。答案(1)尿素酚红红(2)涂布分离法1.75少解析(1)脲酶能够催化尿素分解为氨，故图中选择培养基应以尿素作为唯一氮源。由于尿素被分解成了氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，使酚红指示剂变红色。(2)用于计数细菌菌落数的接种方法是涂布分离法，统计的菌落数应介于30300之间，故选择细菌菌落数为156、178和191的平板计数，每克土壤样品中的细菌数量为(156178191)/30.11051.75108个。由于两个或多个细菌连接在一起时，往往统计的是一个菌落，故用此方法测得的细菌数偏少。归纳整合1培养基中观测指标的分析(1)培养基中的酚红指示剂产生颜色变化(变红)，标志着存在脲酶水解尿素的作用，从而证明这一菌株能以尿素为氮源。红色环状区域的大小代表脲酶活性的强弱和含量的多少。红色区域越大，表明菌株利用尿素的能力越强。(2)与全营养培养基上的菌落数比较，尿素培养基上只有少数菌落，这一现象表明能利用尿素的细菌在土壤菌群中只占极少部分。2微生物筛选过程中必要的两种对照培养基及其作用对照组作用现象结论未接种培养基有无杂菌污染的判断未接种的培养皿中无菌落生长未被杂菌污染接种的LB全营养培养基选择培养基筛选作用的确认LB全营养培养基上的菌落数大于选择培养基上的数目选择培养基具有筛选作用做模拟练预测1(2016温州中学期末测试)下图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为1、2、3、4、5。下列操作方法正确的是()A操作前要将接种环放在火焰旁灭菌B划线操作须在火焰上进行C在5区域中才有可能得到所需菌落D在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环进行灭菌答案D解析操作前要将接种环放在火焰上灼烧灭菌，A项错误；划线操作须在火焰旁进行，B项错误；在5区域中最有可能得到所需菌落，C项错误；在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环进行灭菌，D项正确。2在细菌培养过程中，下列有关操作正确的是()A涂布器用火焰灼烧进行灭菌B培养基分装到培养皿后进行灭菌C倒平板和取菌液都必须要在酒精灯火焰旁进行D分离得到的菌落应先接种在平板上，培养24 h后，置于4 冰箱中保存答案C解析涂布器应该用高压蒸汽灭菌，A项错误；培养基应该先灭菌后分装，B项错误；倒平板和取菌液都必须要在酒精灯火焰旁进行，以防止杂菌污染，C项正确；分离得到的菌落应先接种在斜面上，置于37 的恒温箱培养24 h后，再置于4 冰箱中保存，D项错误。3下图是“分离以尿素为氮源的微生物”实验的基本流程，请回答下列问题：(1)该实验培养基不能含有_。A尿素 B氯化钠C葡萄糖 D琼脂(2)尿素溶液可用_使之无菌。若要检查B过程灭菌是否彻底，可以采用的方法是_。(3)图中步骤C为_。相对于划线分离法，过程D涂布分离法的优点是_。(4)如果菌落周围出现_色环带，说明该菌落能分泌脲酶。答案(1)D(2)G6玻璃漏斗过滤将空白培养基放在适宜温度下培养一段时间， 观察有无菌落出现(3)倒平板单菌落更易分开(4)红解析(1)分离以尿素为氮源的微生物，应该以尿素为唯一氮源，所以不应有琼脂。(2)尿素用G6玻璃漏斗过滤除去其中细菌等微生物。(4)若菌落能分泌脲酶，则菌落周围会出现红色环带。4(2014浙江自选，17节选)(1)现有一份污水样品，某兴趣小组欲检测其中的细菌数，进行以下实验。将一定量的污水样品进行浓度梯度稀释。取适量不同稀释度的稀释液，用_法分别接种于固体平面培养基上，经培养后进行计数。该实验应注意，接种前，从盛有_的容器中将玻璃刮刀取出，放在酒精灯火焰上灼烧，冷却后待用；分组时，需用_作为对照。(2)在上述细菌培养实验中进行计数时，应计数的是接种了()A各个稀释度样品的培养基上的细菌数B合理稀释度样品的培养基上的细菌数C各个稀释度样品的培养基上的菌落数D合理稀释度样品的培养基上的菌落数答案(1)涂布分离70%酒精未接种的培养基(2)D解析(1)细菌的分离与计数常用涂布分离法，即用玻璃刮刀将一定体积的稀释液涂布到固体平面培养基上。玻璃刮刀在使用前需进行灭菌处理，即将其浸入体积分数为70%的酒精中，随后取出放在酒精灯火焰上灼烧，冷却后待用。为排除其他因素的影响，提高实验的可信度，实验中要设置空白对照。(2)将菌液涂布到固体平面培养基上后，倒置放在恒温箱中培养，培养一段时间后，统计菌落数。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，这样通过统计菌落数就可估算出待测样品的细菌数目，所以要选择合理稀释度样品的培养基上的菌落数。课时训练一、选择题1下图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法错误的是()A步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行B步骤中，待倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖C步骤中，每次划线前后都需对接种环进行灼烧处理D划线接种结束后，将图平板倒置后放入培养箱中培养答案B解析由图可知，步骤是倒平板，步骤是用接种环蘸取菌液，步骤是进行平板划线，步骤是培养。步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行，防止被杂菌污染，A项正确；倒完平板后应立即盖上培养皿盖，冷却后将平板倒过来放置，B项错误；每次划线前后灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单菌落，C项正确；划线接种结束后，将平板倒置放入培养箱中培养，有利于培养基表面的水分更好地挥发和防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，D项正确。2(2016舟山中学期末测试)下列有关微生物培养的叙述中，不正确的是()A获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染B单菌落的分离是消除污染的杂菌的通用方法C培养基都必须使用高压蒸汽灭菌法灭菌D倒置平板防止培养皿盖上的冷凝水滴落答案C解析微生物培养中获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染，A项正确；通常可以采用涂布分离法或划线分离法进行单菌落的分离，以消除污染的杂菌，B项正确；培养基通常可以进行高压蒸汽灭菌，但对于培养基中有高温易分解的成分，就不能用此方法，如培养基中的尿素等物质，C项错误；划线接种结束后需要将培养皿倒置，以防止培养基蒸发冷凝成的水滴入培养基而造成污染，D项正确。3(2015普陀中学期末测试)在分解尿素的细菌的分离和鉴定中，对先后用到的两种培养基的叙述正确的是()A加入酚红指示剂作为鉴别培养基，再加入唯一碳源作为选择培养基B加入唯一氮源作为鉴别培养基，再加入酚红指示剂作为选择培养基C加入唯一氮源作为选择培养基，再加入酚红指示剂作为鉴别培养基D加入酚红指示剂作为选择培养基，再加入唯一碳源作为鉴别培养基答案C解析能合成脲酶的细菌才能分解尿素。配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌；细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。4在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂的目的是()A筛选出能分解尿素的细菌B对分离的菌种作进一步鉴定C作细菌的营养成分D若指示剂变蓝就能准确地认定该菌能分解尿素答案B解析筛选出能分解尿素的细菌用选择培养基即可，不需要加指示剂。加入指示剂的培养基，目的都是对要分离的菌种作进一步的鉴定。二、非选择题5幽门螺杆菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如下：请回答：(1)在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp含有_，它能以尿素作为氮源；若有Hp，则菌落周围会出现_色环带。(2)下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是_灭菌。A高压蒸汽 B紫外灯照射C70%酒精浸泡 D过滤(3)步骤X表示_。在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液_到培养基平面上。菌液稀释的目的是为了获得_菌落。(4)在培养时，需将培养皿倒置并放在_中，若不倒置培养，将导致_。(5)临床上用14C呼气试验检测人体是否感染Hp，其基本原理是Hp能将14C标记的_分解为NH3和14CO2。答案(1)脲酶红(2)D(3)接种涂布单(4)恒温培养箱无法形成单菌落(5)尿素解析(1)幽门螺杆菌(Hp)含有脲酶，能以尿素为氮源，在加入尿素和酚红指示剂的培养基中培养Hp，由于尿素经脲酶的降解可产生碱性的NH3，NH3能使培养基中的酚红由红黄色变成红色，故菌落周围会出现红色环带。(2)由于尿素加热会分解，对尿素溶液进行灭菌最好用G6玻璃砂漏斗过滤。(3)微生物的分离和培养步骤：配制培养基灭菌、倒平板接种培养。为获得单菌落，接种操作前应先将菌液稀释，然后将菌液涂布到培养基平面上即可。(4)微生物培养时需将培养皿倒置并放在恒温培养箱中，若不倒置培养，则无法形成单菌落。(5)幽门螺杆菌能将14C标记的尿素分解为NH3和14CO2，故临床上常用14C呼气试验检测人体内幽门螺杆菌的存在。6从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，实验过程如图所示：请回答：(1)图中物质A为_，若要统计每克土壤样品中以尿素为氮源的细菌的活菌数目，宜采用_法接种到尿素培养基上，对照组配制的培养基为_培养基，若用同浓度的土壤稀释液接种，实验组培养皿中菌落数_(大于、等于或小于)对照组。在能利用尿素的细菌菌落周围，有红色环带出现的原因是_。(2)下列培养基中，能分离出分解尿素的细菌的是()A葡萄糖、NaCl、K2HPO4、酚红、琼脂糖、水B葡萄糖、NaCl、K2HPO4、酚红、琼脂糖、水、尿素CNaCl、琼脂糖、水、蛋白胨、酵母提取物、尿素D葡萄糖、NaCl、K2HPO4、酚红、琼脂糖、水、蛋白胨、酵母提取物(3)欲将分离得到的以尿素为氮源的细菌进行扩大培养，应使用_培养基。答案(1)无菌水涂布分离LB全营养小于因为能利用尿素的细菌产生的脲酶，将培养基中的尿素分解，产生的氨使指示剂呈红色(2)B(3)LB液体7(原创)有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。请回答问题：(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_为唯一碳源的培养基上。从功能上讲，该培养基属于_(A.固体B液体C纯化D选择)培养基。(2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即_。(3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围透明圈的大小，透明圈大说明该菌株的降解能力_。(4)通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、_和高压蒸汽灭菌。无菌技术要求实验操作应在酒精灯_附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。答案(1)原油D(2)划线分离法和涂布分离法(3)强(4)干热灭菌火焰解析(1)可以将所需要的微生物从混杂的微生物群中分离出来的培养基为选择培养基。欲筛选出能降解原油的菌株，培养基中应只含有原油而无其他碳源，这样不能降解原油的细菌在此培养基上不能生存，可筛选出能分解原油的菌种。(2)分离纯化菌种时，接种的方法有划线分离法和涂布分离法，其目的都是使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单菌落，以便于纯化菌种。(3)降解原油能力越强的菌株，在菌落周围形成的透明圈越大。(4)实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌(如接种环)、干热灭菌(如培养皿)和高压蒸汽灭菌(如培养基)等。无菌技术要求整个实验操作都要在酒精灯火焰附近进行，以避免周围微生物的污染。8(2016金丽衢十校联考)下表是3组生物实验培养基。请回答下列问题：组别培养基a无机盐、蔗糖、维生素和甘氨酸等有机物、水、琼脂b葡萄糖、NaCl、K2HPO4、尿素、酚红、水、琼脂糖c蛋白胨、酵母提取物、NaCl、水、琼脂(1)分离以尿素为氮源的细菌应选用培养基_。在含有脲酶的细菌菌落周围会出现_，这是由于尿素被分解产生的_使pH升高，酚红指示剂产生颜色变化，从而证明这一菌株可以尿素为氮源。变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力_。(2)用培养基a进行植物组织培养，则培养基中还需加入_。一般先用_(填“发芽”或“生根”)培养基进行培养，使之长出较多的丛状苗，然后将丛状苗分株培养。(3)生产上利用黑曲霉或苹果青霉来提取果胶酶，在用果胶酶水解果胶的实验中，下列说法正确的是_。A实验后滴加酒精的目的是增加果胶酶的活性B沸水浴加热后果胶酶的活性随着温度的下降逐渐恢复C间歇搅拌2030 min的目的是让果胶酶与果胶充分接触D选用黑曲霉提取液是因为果胶酶只能在生物细胞内起催化作用答案(1)b红色环带氨越强(2)植物激素(植物生长调节剂)发芽(3)C解析(1)分离以尿素为氮源的细菌应选用以尿素为唯一氮源并添加酚红指示剂的培养基。分解尿素的微生物可产生脲酶，脲酶可催化尿素分解产生氨，氨使酚红指示剂变红，从而在菌落周围形成红色环带，形成的红色环带越大，表明该菌株利用尿素的能力越强。(2)植物组织培养所需的MS培养基需加入植物激素。培养过程中一般先用发芽培养基进行培养，使之长出较多的丛状苗，然后将丛状苗分株培养，诱导生根。(3)在用果胶酶水解果胶的实验中，实验操作后滴加酒精的目的是检验实验过程中果胶是否被水解；沸水浴加热后果胶酶会失去活性；只要条件适宜，果胶酶在细胞内外均可发挥催化作用。9(2015宁波鄞州中学练习)有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境，研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分离能降解苯磺隆菌株的实验过程如下图所示。请回答问题：(1)微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、_、 _四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是_。(2)纯化菌株时，通常使用的划线工具是_。在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线。这样做的目的是_。 (3)若要检测土样中的细菌含量，应采用_法。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养了一段时间，这样做的目的是_。答案(1)氮源无机盐只有能利用苯磺隆的微生物能正常生长和繁殖(2)接种环将聚集的菌体逐步减少以便获得单个菌落(3)涂布分离检测培养基平板灭菌是否合格解析(1)微生物生长所需要的主要营养物质包括碳源、氮源、水和无机盐。使用选择培养基是因为选择培养基上只有能利用苯磺隆的微生物能正常生长和繁殖，同时又能抑制或阻止其他微生物的生长。(2)划线分离法接种时常使用接种环划线。在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线。这样做的目的是将聚集的菌体逐步减少以便获得单个菌落。(3)涂布分离法常常用来进行微生物的分离和计数。为检验培养基平板灭菌是否合格，常常需要在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养一段时间，观察有无菌落形成，若没有菌落形成则表明培养基灭菌合格，否则不合格。10石油烃是环境的重要污染源。为了筛选出具有强分解石油烃能力的微生物，进行了一系列操作，请回答下列问题：(1)分解石油烃的微生物一般要从土壤中分离，获取土壤样品的取样地点最好选在_。(2)微生物实验室采用_法对培养基进行灭菌处理。A干热灭菌 B过滤灭菌C灼烧灭菌 D高压蒸汽灭菌(3)下图为获取土壤样品后的培养研究过程：为了能有效地分离出分解石油烃的微生物，过程所用培养基的成分的特点是_，从而有利于分解石油烃的微生物的生长。(4)对进行接种常采用的两种方法分别是_和_。(5)若发现在中无法区分菌落，可以将图中取出的菌液_。(6)若实验室为分离纯化优良菌种进行了如下操作，排序最合理的是_。A BC D(7)整个微生物的分离和培养的操作，一定要注意在_条件下进行。答案(1)石油污染明显处(2)D(3)以石油烃为唯一碳源(4)划线分离法涂布分离法(5)进行(梯度)稀释(6)B(7)无菌解析(1)分解石油烃的微生物在石油污染明显处分布较多。(2)微生物实验室常用高压蒸汽灭菌法对培养基灭菌。(3)实验过程中，过程所用培养基应用石油烃作为唯一碳源，以抑制其他种类微生物的生长，从而分离出以石油烃为碳源的微生物。(4)在微生物的分离实验中，常用划线分离法或涂布分离法进行接种。(5)若发现在中无法区分菌落，可能是菌液中细菌浓度太高，可进行梯度稀释处理后再进行接种。(6)图示为用划线分离法进行接种分离。接种过程中应先在酒精灯火焰上灼烧接种环后，蘸取菌液进行接种，整个操作在酒精灯火焰旁进行，接种结束后还须在酒精灯上灼烧接种环。(7)为避免污染，整个微生物的分离和培养的操作，一定要注意在无菌条件下进行。