强筋健骨丸修订后药品标准草案

强筋健骨丸修订后药品标准草案Qiangjin Jiangu Wan【处方】 制川乌240g 制草乌240g 石斛 20g 川牛膝20g 党参40g 木瓜20g 钩藤20g 续断40g陈皮40g 制马钱子20g 天南星(制)40g 半夏(制)80g【制法】 以上十二味，粉碎成细粉，过筛，混匀，用水泛丸。每100g药丸用百草霜粉和礞石细粉各5g混合包衣，干燥，打光，即得。【性状】 本品为黑褐色的水丸；味辛，微苦。【鉴别】 （1）取本品，置显微镜下观察：石细胞类长方形、方形或长椭圆形，胞腔较大。纤维表面类圆形细胞中含细小圆形硅质块，排列成行。联接乳管直径1215m，含细小颗粒状物。木化薄壁细胞成片，呈类方形、类圆形、类多角形或细长方形，壁稍厚，纹孔较多，孔沟大多明显。草酸钙针晶成束，长32144m，存在于粘液细胞中或散在。草酸钙砂晶密集，有的聚集于细胞一角隅，含晶细胞较大，类长方形或类圆形。 （2）取本品3g，研细，加水20ml，置温水浴中浸渍4小时，滤过，滤液浓缩至1ml。取浓缩液1滴点于圆形滤纸中央，以甲醇扩散展开后，喷以0.2%茚三酮溶液，80烘约10分钟，显蓝色斑点。 （3）取本品3g，研细，加浓氨试液2ml使湿润，再加氯仿-乙醇（101）混合液10ml，密塞，振摇5分钟，浸渍2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿1ml溶解，作为供试品溶液。另取士的宁和马钱子碱对照品，分别加氯仿制成每1ml各含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录 B）试验，吸取上述三种溶液各10l，点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液（450.60.4）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。（4）取本品5g，研细，加甲醇40ml，回流60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml溶解，用正丁醇萃取2次，每次10ml，合并正丁醇溶液，蒸干，残渣加甲醇1ml溶解作为供试品溶液；另取橙皮苷对照品，加甲醇溶解制成饱和溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录 B）试验，吸取上述两种溶液各10l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-氯仿-甲醇-甲酸-水（5320.20.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。（5）取党参对照药材1g，加甲醇10ml，回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml溶解，用正丁醇10ml萃取，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（附录 B）试验，吸取上述对照药材溶液和鉴别（4）项下的供试品溶液各5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（920.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%对二甲氨基苯甲醛40%硫酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。（6）取川牛膝对照药材1g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（附录 B）试验，吸取上述对照药材溶液和鉴别（4）项下的供试品溶液各5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（720.5）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。（7）取续断对照药材1g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（附录 B）试验，吸取上述对照药材溶液和鉴别（4）项下的供试品溶液各5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-氯仿-甲酸（8110.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%对二甲氨基苯甲醛40%硫酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。（8）取本品9g，研碎，加乙醇回流提取30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇萃取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取钩藤对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录B）试验，吸取上述二种溶液各10l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲醇-浓氨水（20110.1）为展开剂，展开，取出，晾干。置于紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。【检查】 乌头碱：取本品5g，研细，加氨试液2ml，再加乙醚40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿1ml溶解，作为供试品溶液；另取乌头碱对照品，加氯仿溶解制成每1ml含2mg的溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录 B）试验，吸取上述两种溶液各10l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇（450.5）（用浓氨试液饱和）为展开剂，展开，取出，晾干，用碘蒸气熏蒸1030分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，不得显大于对照品的色斑。 其他：应符合丸剂项下的有关各项规定（附录 A）。【含量测定】 照高效液相色谱法（附录 D）测定。色谱条件与系统适应性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈0.01mol/L磷酸二氢钾水溶液（1882）为流动相；检测波长为254 nm ；理论塔板数按士的宁峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备 精密称取士的宁对照品9mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取该液1ml，加甲醇稀释至10ml，摇匀，即得（每1ml含士的宁0.036mg）。供试品溶液的制备 取本品，研细，精密称取5g，加浓氨试液2ml，加氯仿约50ml，超声处理30分钟，滤过，用氯仿分次洗涤容器、残渣及滤纸，洗液滤入同一量瓶中，加氯仿至100ml，摇匀，精密量取滤液25ml，蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20l，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每克含士的宁（C21H22N2O2）应为0.150.45mg。【功能与主治】 祛风除痰，强筋壮骨。用于左瘫右痪，筋骨疼痛，风湿麻木，腰膝痿软。【用法与用量】 用黄酒或温开水送服，一次1015粒，一日2次。【注意】 孕妇忌用。【规格】 每25粒重3g【贮藏】 密闭，防潮。强筋健骨丸修订后药品标准草案起草说明【名称】 强筋健骨丸 Qiangjin Jiangu Wan【处方】 本品处方12味中药，均收载于中国药典2010年版一部，其中含有马钱子、川乌和草乌的炮制品。所有药味应符合其规定，特别是毒性药品的炮制必须符合中国药典2010年版一部的要求。【制法】 经多年生产，该工艺符合实际，操作性强，故维持原标准。【性状】 经过多年对所生产成品的性状观察，均与原标准描述相符，故维持原标准。【鉴别】 （1）显微鉴别：取本品置显微镜下观察：石细胞类长方形、方形或长椭圆形，胞腔较大(制川乌)。纤维表面类圆形细胞中含细小圆形硅质块，排列成行（石斛）。联接乳管直径1215m，含细小颗粒状物（党参）。木化薄壁细胞成片，呈类方形、类圆形、类多角形或细长方形，壁稍厚，纹孔较多，孔沟大多明显（木瓜）。草酸钙针晶成束，长32144m，存在于粘液细胞中或散在（半夏）。草酸钙砂晶密集，有的聚集于细胞一角隅（川牛膝），含晶细胞较大，类长方形或类圆形（川牛膝）。（3）为马钱子的薄层色谱鉴别。马钱子中主要含有士的宁和马钱子碱；原标准中方法重复性好，故维持原标准（附图1）。（4）为陈皮的薄层色谱鉴别。陈皮中含有挥发油、黄酮甙（如橙皮苷）等成分；陈皮苷较易溶于水和甲醇，利用此性质，用甲醇提取，为了除去干扰，将甲醇提取液蒸干，加水溶解，用正丁醇萃取法又将陈皮苷提取出来；陈皮苷与三氯化铝反应可形成络合物，而在紫外灯（365nm）下显示强烈的黄绿色荧光，利用此性质显色。经过试验，用乙酸乙酯-氯仿-甲醇-甲酸-水（5320.20.5）为展开剂，效果满意，陈皮苷斑点分离完全。按照正文方法试验，同时制备陈皮空白对照，结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点。空白对照色谱显示，其它药味无干扰（附图2）。（5）为党参的薄层色谱鉴别。党参含三萜类化合物无羁萜（friedelin）、蒲公英萜醇乙酸酯、-菠甾醇及其葡萄糖苷、7-豆甾烯醇及其葡萄糖苷、菠甾酮（spinesterone）；尚含党参苷、党参内酯和党参酸。上述成分在甲醇中可溶，因而采用了鉴别（4）中的供试品溶液，简化了操作；三萜类化合物可与2%对二甲氨基苯甲醛40%硫酸乙醇溶液，在加热情况下显示不同的颜色，利用此性质显色；经过反复摸索，用甲苯-乙酸乙酯-甲酸（920.5）为展开剂，对游离的三萜类成分鉴别效果较好。按照正文方法试验，同时制备党参空白对照，结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点。空白对照色谱显示，其它药味无干扰（附图3）。（6）为川牛膝的薄层色谱鉴别。川牛膝中含有皂苷、蜕皮甾酮、齐墩果酸等成分。分别用样品的甲醇提取液和乙酸乙酯提取液，对上述成分进行鉴别，以川牛膝对照药材和齐墩果酸对照品为对照，结果齐墩果酸色班对应不明显，皂苷色班干扰大不易辩识，但是，对照药材色谱，与供试品色谱有一个亮兰色的荧光色斑强烈对应；经过空白试验证实，该色班为川牛膝所显示。按照正文方法试验，同时制备川牛膝空白对照，结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点。空白对照色谱显示，其它药味无干扰（附图4）。（7）为续断的薄层色谱鉴别。续断根含生物碱、挥发油和多种三萜皂苷及其苷元，所以采用甲醇提取、水溶解、正丁醇萃取的方法制备样品溶液，经试验，用硅胶G薄层板，以甲苯-乙酸乙酯-氯仿-甲酸（8110.5）为展开剂，展开，取出，晾干。喷以2%对二甲氨基苯甲醛40%硫酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色清晰，结果续断对照药材显示两个灰褐色主色斑，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置显相同的色斑；通过空白试验，结果显示其它药味无干扰（附图5）。 （8）为钩藤的薄层色谱鉴别。方法以钩藤为对照药材，用正文的方法对样品进行处理后，按正文色谱条件进行薄层分析，得到的色谱图斑点清晰，无干扰。结果供试品色谱中，在365nm的紫外灯下观察荧光，有2-3个荧光斑点与对照药材一致。同时用空白样品做对照试验，均无干扰，如图6所示。 试验中发现，在图谱的上端出现边缘效应。边缘效应可以用先饱和再展开的方法消除。【检查】（1）应符合丸剂项下的有关各项规定（附录A）。经过对5批样品的检查，结果均符合其规定，检查结果见表1。 表1：制剂通则检查结果批号项目040103040122040201040219040321重量差异符合规定符合规定符合规定符合规定符合规定水分（%）7.87.48.08.16.9溶散时限（min）5150483837细菌（CFU）/g120480780040420霉菌（CFU）/g1010101010大肠杆菌未检出未检出未检出未检出未检出活螨未检出未检出未检出未检出未检出（2）乌头碱：川乌和草乌为毒性中药，其中所含的乌头碱是有毒成分，经过炮制后，其含量大大减少，从而降低了毒性，但是，存在由于炮制不当可能乌头碱残留量较高的现象，本品处方含有大量的制川乌和制草乌，应对有毒的乌头碱进行控制。根据中国药典2000年版一部2“附子”项下，对乌头碱的控制要求1，建立了本品中乌头碱的薄层色谱控制法。经实验用硅胶G薄层板，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇（450.5）（用浓氨试液饱和）为展开剂，展开，取出，晾干，用碘蒸气熏蒸30分钟，乌头碱分离较好。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置不得显大于对照品的色斑。具体方法见正文。 (3) 重金属：取本品研细，精密称取1.0g，按中国药典2000年版一部炽灼残渣检查法（附录J），在500600炽灼至灰化。取残渣按中国药典2000年版一部重金属检查法第二法（附录 E）依法操作。标准铅液（10g/ml）用量为1ml。结果见表2。表2：重金属检查结果批号取样量（g）比色结果重金属含量（ppm）0401031.0345浅于对照管100401221.0011浅于对照管100402011.0226浅于对照管100402191.0317浅于对照管100403211.0049浅于对照管10五批样品重金属含量均未超过10ppm，故未将此项检查列入标准正文。 （4）砷：取本品研细，精密称取1.0g，加氧化镁0.2g，15%硝酸镁溶液2ml，混匀，低温蒸干，用小火炭化至无烟后，550灼烧4h，冷却，加水1ml搅拌，水浴蒸干，再550灰化2h，残渣加盐酸5ml溶解，再用水21ml洗坩埚，合并盐酸液和洗液，按中国药典2000年版一部砷盐检查法第一法（附录 F），依法检查，标准砷液（1g/ml）用量为1 ml。结果见表3。表3：砷盐检查结果批号取样量（g）砷斑颜色砷含量（ppm）0401031.0054浅于对照品10401221.0147浅于对照品10402011.0507浅于对照品10402191.0306浅于对照品10403211.0158浅于对照品1 五批样品砷含量均低于1ppm，故未将此项检查列入标准正文。【含量测定】 本品由十二味中药组成，其中马钱子为毒性中药，其有毒成分主要为马钱子碱和士的宁，经过沙烫法炮制后，其含量明显下降。虽然如此，制马钱子中还含有相当量的马钱子碱和士的宁，为了保证本品的安全有效，建立了用高效液相色谱法测定其中士的宁含量的方法，效果满意。该方法操作简单，准确，重复性好。1.仪器与试药：1.1. 仪器：P200型液相色谱仪。UV200型紫外分光检测器。KQ-300DE型超声波清洗器1.2. 试药：士的宁对照品（中国药品生物制品鉴定所）供试样品（本厂制备） 乙腈（色谱纯）水为重蒸馏水其它试剂均为分析纯2. 试验溶液的制备2.1 .对照品溶液的制备：精密称取士的宁对照品9.41mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml含士的宁0.3764mg）。2.2. 供试品溶液制备：取本品，研细，精密称取5g，加浓氨试液2ml，加氯仿约50ml，超声处理30分钟，滤过，用氯仿分次洗涤容器、残渣及滤纸，洗液滤入同一量瓶中，加氯仿至100ml，摇匀，精密量取滤液25ml，蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2.3阴性对照液的制备：按处方和工艺制备不含马钱子的样品，按样品溶液制备方法制备。 3. 色谱条件：色谱柱：Hypersil ODS C18（2004.6mm）5m；流动相：乙腈0.01mol/L磷酸二氢钾水溶液（18：82）为流动相；检测波长为254 nm ；灵敏度：0.2AUFS；流速：1.0ml/min。本条件是根据文献3建立，该文献中的测定条件为：色谱柱C18( 10 m ,4 .6mm 2 5 0mm) ；流动相为0.01mol/L磷酸二氢钾水溶液甲醇乙腈 ( 732 74 0 ) ，流速 1ml/min；检测波长254nm。经ml过用该流动相试验，士的宁峰保留时间太短，经调整为乙腈0.01mol/L磷酸二氢钾水溶液（18：82），士的宁分离较满意；理论塔板数按士的宁峰计算为2876。为了考察干扰组分的干扰情况，分别吸取对照品溶液、样品溶液及阴性对照液各20l，注入液相色谱仪，计录色谱图。结果样品色谱中，在与对照品色谱相同保留时间有对应的峰，阴性对照液无对应峰（附图6）。4. 线性考察：精密量取对照品溶液5ml，置25 ml 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取该液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取上述系列溶液各20l，注入液相色谱仪，记录峰面积（结果见表4），以进样量X（g）与峰面积Y回归，得回归方程（附图7）。 Y = 1072973X 32958 r = 0.9999表4：线性试验结果X（g）0.3010.6020.9031.2041.506Y301029601999930506进样量在0.3011.506g范围，线性良好。5. 精密度考察：取浓度为0.0376mg/ml对照品溶液。连续进样5次，记录士的宁峰面积，计算相对标准偏差（结果见表5）。表5：精密度试验结果序号12345峰面积781462788142770001761185763524RSD（%）1.506. 稳定性试验：取批号为040103的样品，按正文拟定方法制备供试品溶液，每间隔1h进样一次，共5次，记录士的宁峰面积，计算相对标准偏差（结果见表6）。 表6：稳定性试验结果时间（h）01234峰面积781197751369764243778255765432RSD（%）1.567. 提取完全性考察：称取样品粉末5份，按供试品溶液制备方法，分别超声处理20、30、40、50、60min。按正文拟订方法测定士的宁的含量（结果见表7）。表7：提取时间考察结果时间（min）1020304050士的宁（mg/g）0.1610.1850.1870.1860.187结果超声处理30min后，测定结果变化不大，说明超声处理30min时，士的宁已完全溶解。8. 重复性试验：取批号为040103 的样品5份，按正文拟订方法测定士的宁的含量，结果见表8。表8：重复性试验结果编号士的宁（mg/g）平均含量（mg/g）RSD（%）10.18520.18430.1880.1841.8240.17950.1869. 回收率试验：取已知含量的样品，研细，精密称取2.5g，共5份，分别加入一定量的士的宁对照品，按正文拟订方法测定士的宁含量，计算回收率，结果见表9。、 表9：回收率试验结果原含有量（mg）加入量（mg）测得量（mg）回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）0.4620.5641.00896.810.4560.3760.82999.200.4280.3760.79597.6198.461.230.5170.5641.07598.940.4220.3760.79899.7310. 样品测定：按正文拟订方法测定5批样品中士的宁的含量，结果见表10。表10：样品测定结果（n=2）批号士的宁（mg /g）RSD（%）0401030.1841.820401220.1521.230402010.1870.350402190.1660.160403210.1921.48结果5批含量均在0.15mg/g以上；由于士的宁具有较强的毒副作用，服用不得超量。为了保证本品的有效安全性，应规定士的宁含量上限。经计算本品处方中制马钱子含量为2.4%，一次服用量仅只有0.04g，远远低于中国药典2010年版一部“马钱子”项下规定的服用剂量（0.30.6g）1，所以，本品按剂量服用是安全的。但是考虑到马钱子药材中士的宁含量的差异，为了避免药材中含量过高而造成临床副作用出现；以及马钱子经过炮制后士的宁含量大幅度下降的情况，暂定本品中士的宁的含量上限为测定结果最高值的二倍附近，确定为0.45mg/g较合理。故暂定本品含士的宁每克应在0.150.45mg 。参考文献1. 中国药典，一部，2010： 47页2. 鲁燕侠等，反相高效液相色谱法同时测定祛痹丹胶囊中士的宁和马钱子碱的含量，中国医院药学杂志 ，2001，08期3. 中国药典，一部，2000：附录34页图1 马钱子TLC（从左到右依次排列）1 士的宁、马钱子碱对照品2 供试品（040103） 3 供试品（040122）4 供试品（040201）5 空白对照 图2 陈皮TLC（从左到右依次排列）1 陈皮苷对照品2 供试品（040103）3 供试品（040122）4 供试品（040201）5 空白对照 图3 党参TLC（从左到右依次排列）1 党参对照药材2 供试品（040103）3 供试品（040122）4 供试品（040201）5 空白对照 图4 川牛膝TLC（从左到右依次排列）1 川牛膝对照药材2 供试品（040103）3 供试品（040122）4 供试品（040201）5 空白对照 图5 续断TLC（从左到右依次排列）1 续断对照药材2 供试品（040103）3 供试品（040122）4 供试品（040201）5 空白对照 图-6 强筋健骨丸薄层色谱图（从左到右依次排列）1.供试品（101129）2.供试品（110411）3.供试品（110728） 4.钩藤对照药材 5.空白样品供试品16 / 16文档可自由编辑打印