饲料成分分析实验：实验三、四 饲料粗蛋白质测定

实验三、实验三、(1)饲料粗蛋白质测定饲料粗蛋白质测定(消化消化) 一、原一、原 理理 RCHCOOHNH2+ H2SO4(NH4)2SO4 +SO2+CO2+H2O无水无水Na2SO4CuSO4 (NH4)2SO4+ NaOH(饱和饱和)NH3+ Na2SO4+ H2ONH3+ H3BO3(NH4)2B4O7(NH4)2B4O7 + HCl (标准标准)NH4Cl + H3BO3指示剂指示剂蓝蓝 色色灰白或灰红色灰白或灰红色二、主要仪器二、主要仪器凯氏微量定氮蒸馏仪凯氏微量定氮蒸馏仪 凯氏半微量定氮蒸馏仪凯氏半微量定氮蒸馏仪( (改良式改良式) ) 1. 试样的消化：试样的消化：1)准确称取试样准确称取试样0.5-1g(含含N 5-80mg)，无损地放入凯氏，无损地放入凯氏烧瓶或消煮管中；烧瓶或消煮管中；2)加入硫酸铜加入硫酸铜0.9g，无水硫酸钠，无水硫酸钠15g，并与试样混合均并与试样混合均匀；加入浓硫酸匀；加入浓硫酸25ml(勿混摇勿混摇)；3)在消煮炉上先用小火小心加热在消煮炉上先用小火小心加热(约约180)，待样品焦，待样品焦化、泡沫消失后，再加强火力化、泡沫消失后，再加强火力360-410消化，直至消化，直至溶液变澄清溶液变澄清(天蓝色天蓝色)后，后，再继续加热消化再继续加热消化1.5hr-2hr；三、测定步骤三、测定步骤4)试样分解液制备：待试样消煮液稍冷却，慢试样分解液制备：待试样消煮液稍冷却，慢慢加入蒸馏水慢加入蒸馏水25-30ml、混匀，、混匀，无损地转移至无损地转移至200或或250ml容量瓶中、混匀容量瓶中、混匀(勿倒置混勿倒置混)；5) 待试样液冷却后，加蒸馏水至容量瓶刻度，待试样液冷却后，加蒸馏水至容量瓶刻度，充分混匀，即为试样分解液。充分混匀，即为试样分解液。 实验四、饲料粗蛋白质测定实验四、饲料粗蛋白质测定(蒸馏蒸馏)1. 凯氏蒸馏仪安装、调试：凯氏蒸馏仪安装、调试：气密性检查气密性检查、清洗；蒸汽、清洗；蒸汽发生瓶的蒸馏水中应加入甲基红指示剂数滴和硫酸发生瓶的蒸馏水中应加入甲基红指示剂数滴和硫酸数滴，并保持此液为红色；数滴，并保持此液为红色；2. 取取2%硼酸溶液硼酸溶液20ml放入三角烧瓶，加入混合指示放入三角烧瓶，加入混合指示剂剂1滴滴(显淡紫红色显淡紫红色)，接至蒸馏仪的冷凝管末端，接至蒸馏仪的冷凝管末端，并，并打开蒸气旁路开关；打开蒸气旁路开关；3. 准确吸取试样分解液准确吸取试样分解液1020ml(视含视含N量而定量而定)，加入，加入蒸馏仪反应室中，并用少量蒸馏水冲洗加样口；蒸馏仪反应室中，并用少量蒸馏水冲洗加样口；4. 先关闭加样口，先关闭加样口，加入饱和加入饱和NaOH溶液溶液510ml；小心打；小心打开加样口使之流入反应室中，立即关闭加样口，再用开加样口使之流入反应室中，立即关闭加样口，再用少量蒸馏水冲洗加样口；关好加样口防止漏气；少量蒸馏水冲洗加样口；关好加样口防止漏气；5. 通入蒸气蒸馏，此时反应室液体应呈棕褐色通入蒸气蒸馏，此时反应室液体应呈棕褐色(否则需否则需补加碱液补加碱液)；待硼酸溶液变蓝后再继续蒸馏待硼酸溶液变蓝后再继续蒸馏45min，然后使冷凝管末端离开液面，再蒸馏然后使冷凝管末端离开液面，再蒸馏1min，并用少量，并用少量蒸馏水冲洗冷凝管末端。蒸馏水冲洗冷凝管末端。6. 蒸馏结束，排净反应废液，洗净蒸馏室，开始新的蒸蒸馏结束，排净反应废液，洗净蒸馏室，开始新的蒸馏过程。馏过程。7. 滴滴 定：蒸馏后的硼酸吸收液立即用定：蒸馏后的硼酸吸收液立即用0.01M盐酸盐酸标准溶液进行滴定，当溶液由蓝色变为灰白色标准溶液进行滴定，当溶液由蓝色变为灰白色或灰红色时即为滴定终点。或灰红色时即为滴定终点。8. 结果计算：结果计算：粗蛋白质粗蛋白质(%) =100WV/V(V2V1 )N0.0146.25