微生物分类学之沙门氏菌检验

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,本资料来源,沙门氏菌及其检验,一、概述,在微生物分类学中，沙门氏菌属（,Salmonella,）是肠杆菌科的一个大属，包括,2000,多个血清型，它们在形态结构、培养特性、生化特性和抗原构造方面都非常相似，是一类形态短小的革兰氏阴性杆菌，主要寄居于人和其它温血动物的肠道中，可引起多种性质的疾病，根据沙门氏菌的致病范围，可将其分为三大类群。,第一类群：专门对人致病。如伤寒沙门氏菌,甲型、乙型、丙型副伤寒沙门氏菌。,第二类群：能引起人类食物中毒，称之为食物中毒沙门氏菌群，如鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、纽波特沙门氏菌等。,第三类群：专门对动物致病，很少感染人，如马流产沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌，此类群中尽管很少感染人，但近年也有感染人的报道。,2,根据侵入机体沙门氏菌菌种的不同，在临床上引起四种不同的疾病,:,（,1,）伤寒、副伤寒,由沙门氏属中的伤寒杆菌和甲、乙、丙型副伤寒杆菌引起。,（,2,）食物中毒,沙门氏菌属引起的食物中毒，主要以肠炎杆菌、鼠伤寒杆菌、猪霍乱杆菌、丙型副伤寒杆菌和汤普逊杆菌等最为多见。临床症状主要是胃肠炎。病程较短，一般,24d,可完全恢复。,（,3,）败血症,多为猪霍乱杆菌引起，甲、乙、丙型副伤寒杆菌和肠炎杆菌亦可引起败血症。,（,4,）慢性肠炎,沙门氏杆菌可引起慢性、持久性肠炎。,3,沙门氏菌广泛分布于自然界，,是引起食物中毒的重要病原菌。在世界各国各类细菌性的食物中毒中，沙门氏菌常居前列。因此，沙门氏菌的检测是各国检验机构对多种进出口食品的必检项目之一。,沙门氏菌不产生外毒素，但能产生毒力较强的内毒素。,沙门氏菌主要通过食物、饮水经口感染。可存在多种食物中，包括生肉、禽、蛋、奶制品、虾、鱼和田鸡腿等。,4,二、沙门氏菌的生物学特性,1,、形态与染色特性：,革兰氏阴性短杆菌，无芽孢,一般无荚膜，周生鞭毛（除鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌外），大多数具有菌毛。,2,、培养特性：,需氧或兼性厌氧；普通营养琼脂上生长良好，菌落中等大小，无色半透明、圆形、光滑、湿润。,5,3,、生化特性：,大部分发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇和山梨酸产气；,一般不发酵乳糖和蔗糖，不发酵侧金盏花醇；,一般不产吲哚，,V-P,反应阴性；,不分解尿素，苯丙氨酸不脱氨；,三糖铁琼脂斜面常产生,H,2,S,。,4,、抵抗力：,较弱，不耐热，最适温度,37,，最适,pH6.8-7.8,。,5,、毒素特征：,不产外毒素，产毒性很强的内毒素，这是致病的主要原因。,6,6,、血清学特性：,沙门氏菌具有复杂的抗原结构。虽然沙门氏菌具有,O,、,H,、,K,和其它表面物质,(,如菌毛,),四种抗原，但只有,O,抗原是每个菌株均有的成分。,1,）,O,抗原（菌体抗原）,*,存在于菌体表面，为脂多糖，多糖部分决定其特异性，,*,O,抗原耐热,(100,、,2.5h,或,121,、,2h,加热均不破坏其抗原性,),，其特异性不易丧失或变异。,*,一个菌体具有一种或多种不同的,O,抗原。,7,2,）,H,抗原（鞭毛抗原）,*,H,抗原存在于鞭毛中，不耐热，化学成分蛋白质，其抗原性可以被酒精所破坏。,*,H,抗原可分为两相,第,1,相：为特异相，用小写英文字母表示，,a,z,，,Z,以后则从,z,1,、,z,2,，已编到,z,83,。,第,2,相：为非特异相以阿拉伯数字表示，共,7,种。,具有第,1,相和第,2,相,H,抗原的细菌称为双相菌，大多数沙门氏菌属于此；,仅有一相者称单相菌，如肠炎沙门氏菌。,极少数无鞭毛菌两相抗原都不具有，称为无相菌，如鸡白痢沙门氏菌。,8,3,）,Vi,抗原（包膜抗原）,少数菌沙门氏菌中尚有一种表面包膜抗原，功能与大肠杆菌的,K,抗原类同，因一般认为它与毒力,(Virulence),有关，故称,Vi,抗原。,经过几次传代、,60,热处理或石炭酸处理后容易消失。,9,三、,生化反应,10,1,、吲,哚,哚试,验,验,(,indoltest),细菌,产,产生,色,色氨,酸,酸酶,，,，可,分,分解,蛋,蛋白,胨,胨中,的,的色,氨,氨酸,，,，生,成,成靛,基,基质,（,（吲,哚,哚）,，,，靛,基,基质,与,与试,剂,剂对,二,二甲,基,基氨,基,基苯,甲,甲醛,作,作用,，,，生,成,成玫,瑰,瑰靛,基,基质,。,。,色氨,酸,酸,吲,吲,哚,哚（,无,无色,）,）,对,对二,甲,甲基,氨,氨基,苯,苯甲,醛,醛,玫,玫,瑰,瑰吲,哚,哚（,红,红色,，,，,+,大肠杆菌,）,）,不产吲哚,（,（无色，,-,产气杆菌,）,）,试验方法,：,：取培养,24h,培养液，,先,先加入少,量,量乙醚，,摇,摇动试管,以,以提取和,浓,浓缩吲哚,，,，待其浮,于,于培养液,表,表面后，,再,再沿试管,壁,壁徐缓加,入,入吲哚试,剂,剂数滴，,在,在接触面,呈,呈红色，,即,即为阳性,。,。,应用：用,于,于肠道杆,菌,菌的鉴定,11,Indol test,吲哚试验,tryptophan,色氨酸,indole,吲哚玫,瑰,瑰吲哚,Kovacsreagent,吲哚试剂,（对二甲,基,氨基苯甲,醛,醛）,-+,E.coli,蛋白胨水,试,试管,12,2,、尿素酶,（,（,Urease,，脲酶）,试,试验,有些细菌,能,能产生尿,素,素酶，将,尿,尿素分解,、,、产生,2,个分子的,氨,氨，使培,养,养基变为,碱,碱性，酚,红,红呈粉红,色,色。尿素,酶,酶不是诱,导,导酶，因,为,为不论底,物,物尿素是,否,否存在，,细,细菌均能,合,合成此酶,。,。其活性,最,最适,pH,为,7.0,。,酚红：,黄,黄色红色（,+,普通变形,杆,杆菌）,黄色（,-,大肠杆菌,）,）,试验方法,：,：挑取,1824h,待试菌培,养,养物大量,接,接种于液,体,体培养基,管,管中，摇,匀,匀，于,361,培养，观,察,察结果。,或,或涂布并,穿,穿刺接种,于,于琼脂斜,面,面，不要,到,到达底部,，,，留底部,作,作变色对,照,照。培养,24h,左右，观,察,察结果，,如,如阴性应,继,继续培养,至,至,4,天，作最,终,终判定，,变,变为粉红,色,色为阳性,。,。,13,Urease Test,尿素酶试,验,验：,urea,尿素,ammonia,氨,14,3,、氨基酸,脱,脱羧酶的,测,测定,有些细菌,含,含有氨基,酸,酸脱羧酶,，,，使羧基,释,释出，生,成,成胺类和,二,二氧化碳,。,。此反应,在,在偏酸的,条,条件下进,行,行，当培,养,养基含胺,类,类时呈碱,性,性反应，,使,使指示剂,变,变色。,接,接种与观,察,察结果：,用,用幼龄培,养,养液作为,菌,菌种，直,接,接接种。,接,接种后封,油,油，对照,管,管与测定,管,管同时接,种,种封油。,肠,肠肝菌科,的,的细菌于,37,培养,4,天观察。,当指示剂,（,（溴甲酚,紫,紫）呈紫,色,色或带红,色,色调的紫,色,色者为阳,性,性，呈黄,色,色者为阴,性,性。对照,管,管应呈黄,色,色反应。,15,16,4,、,三糖铁,（,（,TSI,）琼脂,试,试验,试验方,法,法：以,接,接种针,挑,挑取待,试,试菌可,疑,疑菌落,或,或纯培,养,养物，,穿,穿刺接,种,种并涂,布,布于斜,面,面，置,361,培养,1824h,，观察,结,结果。,培养基,：,：乳糖,：,：蔗糖,：,：葡萄,糖,糖,=10,：,10,：,1,；加有,酚,酚红,本试验,可,可同时,观,观察糖,发,发酵产,酸,酸或产,酸,酸产气,（,（变黄,）,）；产,生,生硫化,氢,氢（变,黑,黑）。,只能利,用,用,葡萄糖,的,的细菌,，,，,葡萄糖,被,被分解产酸可使斜,面,面先变黄，但因,量,量少，,生,生成的,少,少量酸,，,，因接,触,触空气,而,而氧化,，,，加之,细,细菌利,用,用培养,基,基中含,氮,氮物质,，,，生成碱性产物，,故,故使斜,面,面后来,又,又变红，底部,由,由于是,在,在厌氧,状,状态下,，,，酸类,不,不被氧,化,化，所,以,以仍保,持,持黄色,。,。,17,18,5,、,-,半乳糖,苷,苷酶（,ONPG,）的测,定,定,ONPG:,邻硝基,酚,酚,-D-,半乳糖,苷,苷。具,有,有半乳,糖,糖苷酶,的,的,细菌，,能,能使其,水,水解，,从,从而释,放,放黄色,的,的邻硝,基,基酚,ONPG,试验,左为阳,性,性（黄,）,）右为阴,性,性对照,19,四、检,测,测方法,20,从食品,中,中分离,和,和鉴定,沙,沙门氏,菌,菌，当,前,前通常,采,采用的,方,方法共,分,分,5,个步骤,：,：,前增菌,：,：食品样,品,品在含,有,有营养,的,的非选,择,择性培,养,养基中,增,增菌，,使,使受损,伤,伤的沙,门,门氏菌,细,细胞恢,复,复到稳,定,定的生,理,理状态,。,。,加工食,品,品均应,经,经过前,增,增菌。,（选择,性,性）增,菌,菌：此培养,基,基允许,沙,沙门氏,菌,菌持续,增,增菌，,同,同时阻,止,止大多,数,数其他,细,细菌的,增,增殖。,未经加,工,工的食,品,品不必,经,经过前,增,增菌而,直,直接增,菌,菌。,选择性,平,平板分,离,离：采用固,体,体选择,培,培养基,，,，抑制,非,非沙门,氏,氏菌的,生,生长，,提,提供肉,眼,眼可见,的,的疑似,沙,沙门氏,菌,菌纯菌,落,落的识,别,别。,生物化,学,学筛选,：,：排除大,多,多数非,沙,沙门氏,菌,菌，也,提,提供了,沙,沙门氏,菌,菌培养,物,物菌属,的,的初步,鉴,鉴定。,血清学,技,技术鉴,定,定培养,物,物菌种。,21,中华人,民,民共和,国,国国家,标,标准,食,食,品,品卫生,微,微生物,学,学检验,沙,沙门氏,菌,菌检验,GB4789.4-2003,冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品,鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品,前增菌法,25g,BPW225mL,36,1,一般,4h,，干蛋品,18h,24h,10mL,MM,（或,TTB,）,100mL,10mL,SC,100mL,直接增菌法,25g,灭菌生理盐水,25mL,检样匀液,25mL,MM,（或,TTB,）,100mL,检样匀液,25mL,SC,100mL,BS,DHL,（或,HE,、,WS,、,SS,）,TSI,（排除,A/AH,2,S,结果,）,）,，靛基,质,质，尿,素,素，,KCN,，赖氨,酸,酸,H,2,S,靛,尿,KCN,赖（,或,或一项,不,不符）,沙门氏,菌,菌血清,学,学试验,甘露醇,+,山梨醇,+,H,2,S,靛,尿,KCN,赖,H,2,S,靛,尿,KCN,赖,/,非如左,述,述的各,种,种反应,结,结果,沙门氏,菌,菌血清,学,学试验,ONPG,沙门氏,菌,菌,非沙门,氏,氏菌,42 18h,24h,36,1 18h,24h,42 18h,24h,36,1 18h,24h,36,1 40h,48h,36,1 18h,24h,22,23,24,25,谢谢观,看,看,/,欢迎下,载,载,BYFAITHI MEANAVISIONOFGOODONECHERISHES ANDTHEENTHUSIASMTHAT PUSHESONETOSEEKITSFULFILLMENTREGARDLESSOFOBSTACLES.BY FAITH IBYFAITH,