幽门螺杆菌检测课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/9/14,#,幽门螺杆菌感染的实验诊断,讲课内容,第一节,幽门螺杆菌特点,第二节,幽门螺杆菌感染的检测方法,第三节,幽门螺杆菌检测方法的临床应用,1,2,3,第一节 幽门螺杆菌特点,幽门螺杆菌（,Helicobacter pylori,简称,HP,），呈弧形或,S,形，有,12,个微小弯曲，属,微需氧菌,，,在,pH,值为,68,时繁殖,最为活跃，该菌具有丰富的,尿素酶,，可分解食物中的尿素产生氨，该菌生长于胃粘液深层，胃粘膜表面，多在胃窦部以胃小凹、上皮皱褶的内折及腺腔内为多。,H.Pylori,感染和十二指肠溃疡,H.Pylori,感染,D/G,细胞功能改变遗传易感性,壁细胞总体增加,B,型慢性胃窦炎 胃泌素 胃酸分泌量,H.Pylori,的迁移十二指肠粘膜胃上皮化生,十二指肠球炎,十二指肠球溃疡,H.Pylori,感染和胃癌的关系,浅表性胃炎,正常胃粘膜基因损伤,H.Pylori,感染弥漫性胃癌,萎缩性胃炎,环境因素胃粘膜肠上皮化生 高,CagA+-HP,滴度,宿主因素 的,H.pylori,菌株感染,肠型早期胃癌进展期胃癌,3.HP,的毒力作用,取决于,定植能力,菌株的基因型,细菌的圆球体样型态,对抗菌药物的敏感性,第二节 幽门螺杆菌感染的检测,侵入性检测方法,非侵入性,检测方法,快速尿素酶试验,病理切片染色,培养,黏膜涂片革兰氏染色,基因方法,:PCR,等,13,C-,或,14,C-,尿素呼气试验,Hp,粪便抗原试验,Hp,血清抗体试验,试验原理,HP,能产生丰富尿素酶，将尿素分解、产生,2,个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。,操作过程,活检同时取,2,块组织进行检测（胃窦和胃体各,1,块），标本放置于试剂后观察颜色变化。,注意事项,检测结果受试剂,pH,值、取材部位、组织大小、细菌量、观察时间、环境温度等因素影响,（一）快速尿素酶试验,RUT,一,、创伤性检查,胃镜检查胃黏膜取材,直接涂片革兰氏染色，也可包埋切片，常规,HE,染色或银染，直接镜检观察,Hp,。,直接镜检,（二）组织学检查,1.,免疫组化染色特异性高。,2.HE,染色可同时作病理诊断；,3.,荧光原位杂交（,FISH,）具有较高敏感性,1.,在胃镜取胃粘膜放在转运培养基中。,2.,接种于,Hp,牛脑浸液培养基，分区划线。,3.,置,5-12,CO2,培养箱,35-37,，,3-5d,形成小的半透明灰色菌落，有微弱的溶血环。,培养过程,诊断,Hp,最可靠的方法，可作为验证其他诊断性试验的“金标准”。,一般用于药敏试验和科研。,（三）细菌培养,幽门螺杆菌的尿素酶,(A,、,B,、,C,、,D),基因、,16S-rDNA,基因、,VacA,及,CagA,基因均已克隆成功，根据幽门螺杆菌不同的耙基因，设计不同的引物，从而建立不同的,PCR,系统，扩增产物可经凝胶电泳分析,.,原理与方法,（四）聚合酶链反应试验,(PCR,检测技术,),1.,与细菌培养和组织学染色镜检比较无明显优越性。,2.,现在可收集胃液,PCR,检测幽门螺杆菌敏感性高，但可能与口腔和胃内其它尿素酶阳性菌丛起交叉反应,注：,HP,的基因分型（,HP,菌属亚群）及致病性,分布比例,VacA基因,CacA基因,致病性,型,56%,+,+,胃炎、十二指肠溃疡、胃癌,型,16%,-,-,胃炎,中间表达型,28%,+/-,+/-,VacA,基因表达空泡毒素,87KD,CagA,基因表达细胞毒素相关蛋白,128KD,CagA,基因仅出现于,VacA,产生细胞毒效应时,，,是,VacA,产生效果的标志,原理和过程,HP,能产生丰富尿素酶，能分解胃中的尿素，当,整粒,摄入含同位素碳,-13,的尿素胶囊后，碳,-13,尿素在尿素酶作用下，分解为氨和碳,-13,二氧化碳，碳,-13,二氧化碳被小肠上段吸收后，进入血循环，并随呼气排出，分析呼气中的碳,-13,就可诊断该细菌的存在,特点和注意事项,1.,易于操作；可反映全胃,Hp,感染状况。,2.,检测前一个周内应停用抗生素、铋剂、质子泵抑制剂等药。,3.,孕妇、哺乳期妇女及儿童不宜做。,（一）,13C-,或,14C-,尿素呼气试验,二、非创伤性检查,多采用,ELISA,双抗体夹心法，或胶体金试条法。留取晨粪便，用稀释液稀释，再加入试条或微孔板检测。,原理与方法,（二）幽门螺杆菌粪便抗原检测,1.,粪便抗原检测灵敏度高、准确性好，,HP,死亡但抗原成分仍保留下来，故在治疗前后都可用。,2.,适用于所有年龄和类型的患者（,儿童,）。,多采用,ELISA,双抗原夹心法，或胶体金试条法。可快速检测人血清、血浆或全血中幽门螺杆菌抗体。,原理与方法,（三）幽门螺杆菌血清抗体检测,1.,检测的抗体是,IgG,，反映一段时间内,Hp,感染情况，部分试剂盒可同时检测,CagA,和,VacA,抗体。,2.,主要适用于流行病学调查。,第三节 幽门螺杆菌检测方法的临床应用,结束语,当,你尽了自己的最大努力,时,，,失败,也是伟大,的，所以不要放弃，坚持就是正确的。,When You Do Your Best,Failure Is Great,So DonT Give Up,Stick To The,End,感谢聆听,不足之处请大家批评指导,Please Criticize And Guide The,Shortcomings,演讲人：,XXXXXX,时 间：,XX,年,XX,月,XX,日,