基因工程的基本操作程序lk

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,1.2 基因工程的基本操作程序,1）目的基因的获取,2）,基因表达载体,的构建,3）将目的基因导入受体细胞,4）目的基因的检测与鉴定,基因工程的四个基本步骤：,一、目的基因的获取,从基因文库中获取目的基因,利用PCR技术扩增目的基因,人工合成,目的基因是,编码蛋白质,的基因。,1.从基因文库中获取目的基因：,基因文库:,基因组文库:,部分基因文库:,将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因。,基因文库中包含了一种生物所有的基因.,基因文库中包含了一种生物的一部分基因。如cDNA文库。,2.利用PCR技术扩增目的基因,3.人工合成基因法,基因比较小，核苷酸序列已知。,二、,基因表达载体,的构建（,核心,）,1.目的：,使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可遗传给下一代，同时，使目的基因能表达。,2.组成：,目的基因,启动子,终止子,标记基因,3.构建方法,（1）用一定的限制酶切割质粒，使其出现一个切口，露出黏性末端。,（2）用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端。,（3）将切下的目的基因片段插入质粒的切口处，再加入适量DNA连接酶，形成了一个重组DNA分子（重组质粒）,二、,基因表达载体的构建（,核心,）,启动子,终止子,标记基因,基因的首,端,，,RNA聚合,酶,识别、结合部位,，驱动基因的转录。,基因的尾端，使转录停止。,鉴别受体细胞是否含目的基因（如抗生素抗性基因）,三、将目的基因导入受体细胞,目的基因进入受体细胞，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。,1.转化,2.将目的基因导入植物细胞,（1）常用方法：,农杆菌转化法,农杆菌转化法过程,适用：,双子叶植物和裸子植物,受体细胞：,植物活细胞,植物组织培养技术,（2）其他方法,基因枪法,花粉管通道法,（适用于单子叶植物）,3.将目的基因导入动物细胞,显微注射技术,(2)转基因动物受体细胞,受精卵或早期胚胎细胞,(1)方法：,4.将目的基因导入微生物细胞,(2)原核生物作为受体细胞的优点,繁殖快、多为单细胞，遗传物质相对较少。,(1)过程,细胞经,Ca,2+,处理成,感受态细胞,，和重组表达载体混合，完成转化。,四、目的基因的检测与鉴定,(1)转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因,1.分子水平检测,方法：,DNA分子杂交技术，是否出现杂交带。,四、目的基因的检测与鉴定,1.分子水平检测,(2)目的基因是否转录出mRNA,(3)目的基因是否翻译成蛋白质,分子杂交技术，是否出现杂交带,抗原抗体杂交，是否出现杂交带,2.个体水平的鉴定,如抗虫或抗病的,接种,实验、基因工程产品与天然产品的,功能活性,比较,知识小结：,