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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,欢迎大家莅临指导,1,动物细胞工程,许玉娟,2018.1.10,2,3,考点一,.,动物细胞培养,单个细胞,细胞悬液,原代培养,传代培养,教材,P,44-45,50,代后,细胞癌变,2,次胰蛋白酶,4,动物细胞培养原理：,_,。其过程所用培养基一般是,_,培养基。,动物细胞培养时选用幼龄动物组织或胚胎进行细胞培养，因为,_.,动物细胞培养过程中两次用到,_,，第一次的作用是,_,；第二次是,_,，目的是避免动物细胞的接触抑制。,将动物细胞分散成单个细胞培养的原因：,保证细胞所需要的营养供应。,保证细胞内有害代谢产物的及时排出。,细胞增殖,液体,分化程度低，增殖能力强，更易于培养。,胰蛋白酶,将剪碎的组织分散成单个细胞,将贴壁细胞从瓶壁上分离下来,特 别 提 醒,5,微量元素,6,1.分析命题热图，明确答题要点,如图，为动物细胞培养过程中细胞增殖情况的变化曲线，图中,B,、,E,两点表示经筛选、分装后继续培养。据图分析：,(1)原代培养和传代培养的分界点是哪个？,(3),E,点后细胞大多数具有异倍体核型，这样的细胞有什么特点？,E,点后的细胞属于细胞系，能无限增殖。,(2),AB,段和,DE,段繁殖速度缓慢的原因是什么？,B,点之前的培养称为原代培养，之后的培养称为传代培养。,发生了接触抑制。,癌细胞,阅读题目 圈出关键词 分析考点,7,C,过程,条件,培养过程过程中,细胞变化,阅读题目 圈出关键词 分析考点,8,大家有疑问的，可以询问和交流,可以互相讨论下，但要小声点,9,难,易,结果,10,选取,10,代以内的细胞，因为：,_,。,一般能保持正常,的二倍体核型,学生活动：课本,P,48,图，完成学案填空,重组细胞,重组胚胎,11,1,.,(2016全国课标卷，40),下图表示通过核移植等技术获得某种克隆哺乳动物,(,二倍体,),的流程。,回答下列问题：,(1),图中,A,表示正常细胞核，染色体数为,2n,，则其性染色体的组成可为,_,。过程,表示去除细胞核，该过程一般要在卵母细胞培养至适当时期再进行，去核时常采用,_,的方法。,XX或XY,显微操作去核法,(2)经过多次传代后，供体细胞中_的稳定性会降低。,因此，选材时必须关注传代次数。,(3)若获得的克隆动物与供体动物性状不完全相同，从遗传物质的角度分析其原因是_。,(4)与克隆羊“多莉(利)”培养成功一样，其他克隆动物的成功获得也证明了,_,遗传物质（核型）,卵母细胞的细胞质中的遗传物质会对克隆动物的性状产生影响,已经分化的动物体,细胞核,具有全能性,供体性别,选修三,P,49,来源,供体核,卵母,核移植技术,阅读题目 圈出关键词 分析考点,12,1.动物细胞融合,(1)原理：,_,。,(2)融合方法：聚乙二醇(PEG)、,_,、电激等。,(3)意义：突破了,的局限，使,成为可能，也为制造_开辟了新途径。,细胞膜的流动性,灭活的病毒,有性杂交方法,远缘杂交,单克隆抗体,考点三、动物细胞融合与单克隆抗体的制备,抗 体,13,(1)优点：特异性强、,，可大量制备。,2.单克隆抗体,(1)制备过程,杂交瘤细胞,能产生特异性抗体,灵敏度高,妙学妙记,1,、制备过程的“,122”,一融合，二筛选，二培养,2,、单克隆抗体的优点,可、特、灵,14,3,）、两次筛选目的是什么？,第,1,次,-,杂交瘤细胞（多种）。,第,2,次,-,能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。,问题强化：,1,）、本过程利用了哪些原理？,免疫原理，动物细胞融合和动物细胞培养原理,2,）、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与,B,细胞融合？,继承了双亲细胞的遗传物质，能无限增殖又能分泌特异性抗体。,4）、为什么细胞融合过程中使用病毒需要灭活？不灭活行吗？,灭活的病毒能使细胞膜打开，细胞发生融合，不灭,活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。,15,1.(2014,课标卷,，,40),研究者用抗原,(A),分别免疫,3,只小鼠,(X,、,Y,和,Z),，每只小鼠免疫,5,次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价,(,能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数,),，结果如下图所示。,制备杂交瘤细胞，取免疫后小鼠的,B,淋巴细胞,(,染色体数目,40,条,),与体外培养的骨髓瘤细胞,(,染色体数目,60,条,),按一定比例加入试管中，再加入,PEG,诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗,A,抗体的杂交瘤细胞。,(1),制备融合所需的,B,淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到,16000,以上，则小鼠最少需要经过,_,次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的,X,、,Y,、,Z,这,3,只免疫小鼠中，最适合用于制备,B,淋巴细胞的是,_,小鼠，,理由是,_,。,(2),细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有,_,，体系中出现多种类型细胞的原因是,_,。,(3),未融合的,B,淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是,_,。,4,Y,Y,小鼠的抗体效价最高,B,淋巴细胞相互融合形成的细胞，骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞,细胞融合是随机的，且融合率达不到,100%,正常细胞不能无限增殖,融合,16,2.,（海南高考）单纯疱疹病毒,型,(HSV),可引起水泡性口唇炎。,利用杂交瘤技术制备出抗,HSV,的单克隆抗体可快速检测,HSV,。回答下列问题：,(1),在制备抗,HSV,的单克隆抗体的过程中，先给小鼠注射一种纯化的,HSV,蛋白，一段时间后，若小鼠血清中抗,_,的抗体检测呈阳性，说明小鼠体内产生了,_,反应，再从小鼠的,_,中获取,B,淋巴细胞。将该,B,淋巴细胞与小鼠的,_,细胞融合，再经过筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞，该细胞具有的特点是,_,。,(2),若要大量制备抗该蛋白的单克隆抗体，可将该杂交瘤细胞注射到小鼠的,_,中使其增殖，再从,_,中提取、纯化获得。,(3),通过上述方法得到的单克隆抗体可准确地识别这种,HSV,蛋白，其原因是该抗体具有,_,和,_,等特性。,HSV,蛋白,体液免疫,脾脏,骨髓瘤,无限增殖且产生特异性抗体,腹腔,腹水,灵敏度高,特异性强,单克隆抗体,17,易错清零,易,错点1动物细胞培养时，可使用胰蛋白酶,或,胃蛋白酶。,胃蛋白酶适宜pH约为1.8。,胰蛋白酶为7.27.8，而动物细胞培养的适宜pH为7.27.4。,易,错点2动物细胞培养液中加入5%CO,2,的目的是维持气体平衡或用于呼吸。,目的是,“,维持培养液的pH,”,。,易,错点3选择M末期的卵母细胞作核移植的受体细胞。,M中期的卵母细胞，此时具备受精能力，细胞质中的物质能刺激融合后重组细胞进行分裂分化，形成重组胚胎。,易,错点4混淆原代培养与传代培养,(1)原代培养：细胞悬液第一次在瓶中培养，没有分瓶前的细胞培养。,(2)传代培养：原代培养的细胞由于空间不足或细胞密度过大导致接触抑制，需重新用胰蛋白酶处理，进行分瓶扩大培养，即传代培养。,18,动物细胞融合,单克隆抗体的制备,动物细胞培养,动物体细胞核移植技术,胚胎工程,动物细胞工程,小结,19,
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