动感七方块模板(共31张PPT)

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,动感七方块模板,第一页，共31页。,1,3,实验结果,4,5,项目成果,经费使用,目录,研究对象,6,收获体会,7,后期打算,2,研究方案,第二页，共31页。,第三页，共31页。,EMA,研究,方案,实验,结果,项目成果,经费使用,收获体会,后期打算,研究,对象,腺病毒,第四页，共31页。,单击添加大标题,Your text,第五页，共31页。,研究,方案,实验,结果,项目成果,经费使用,收获体会,后期打算,研究,对象,细胞的选择和培养,腺病毒培养及其滴度的测定,EMA-Real Time PCR,检测死活,腺,病毒,预试,EMA-PCR,检测死活,腺病毒方法建立,第六页，共31页。,1,、细胞选择和培养,Hela,细胞,使用广泛,易于培养,对腺病毒敏感,培养方法：传代细胞培养法,研究方案,第七页，共31页。,该病毒预计的PFUs为1.,注：项目经费中有20%为教师指导经费，以上经费计算中均已扣除。,第二十二页，共31页。,3、EMA-Real Time PCR检测死活腺病毒预试,结果观察细胞病变效应（CPE）,初步证明EMA能够有效抑制死病毒的扩增。,注：孔17分别是：阳性对照、阴性对照、Marker、7型腺病毒3株、新城疫鸡瘟病毒1株.,论文EMA-PCR技术用于快速鉴别死活腺病毒的初探,PCR扩增产物检测分析,EMA-PCR检测死活腺病毒方法建立,最低EMA浓度对活病毒PCR扩增的影响,7乘以CCID50的滴度即为预计的PFUs。,4、EMA-PCR检测死活腺病毒方法建立,论文EMA-PCR技术用于快速鉴别死活腺病毒的初探,第二十七页，共31页。,7乘以CCID50的滴度即为预计的PFUs。,研究方案,2,、腺病毒培养和滴度测定,制备,密度为,80%,单层,细胞,接种,腺病毒标准株（购自,ViraQuestinc,）,结果观察,细胞病变效应（,CPE,）,收获病毒，于,-80,冻存,50%,终点法测定滴度,第八页，共31页。,研究方案,3,、,EMA-Real Time PCR,检测死活,腺,病毒,预试,初步证明,EMA,能够有效抑制死病毒的扩增。,在预试结果良好的情况下，对,EMA,浓度进行了优化。,问题：,Real Time PCR,影响因素较多,优化相关条件，影响实验进度,Real Time PCR,实验耗材较贵,，,研究经费受限,实际检测中，对病毒定量的意义,第九页，共31页。,研究方案,4,、,EMA-PCR,检测死活,腺病毒方法建立,病毒灭活条件,EMA,浓度选择：,抑制死病毒,DNA,扩增的最低浓度,最低,EMA,浓度对活病毒,PCR,扩增的影响,PCR,方法评价,第十页，共31页。,研究方案,病毒灭活条件,取,200L,滴度已知的病毒，于,65,水浴,30min,后，接种生长良好的,Hela,细胞，观察灭活后的病毒能否感染,Hela,细胞从而出现葡萄串状的,CPE,。,第十一页，共31页。,研究方案,PCR,方法评价,DNA,模板制备,引物及,PCR,扩增程序,PCR,扩增产物检测分析,方法灵敏度测定,方法特异性检测,PCR,方法,第十二页，共31页。,单击添加大标题,Your text,第十三页，共31页。,研究,方案,实验,结果,项目成果,经费使用,收获体会,后期打算,研究,对象,第十四页，共31页。,实验结果,表,1,细胞致病变效应百分率计算法,稀释度,细胞培养病变孔数,/,接种孔数,累计数（孔）,累计病变细胞孔,有病变,无病变,比例,%,10,-4,4/4,9,0,9/9,100,10,-5,3/4,5,1,5/6,83,10,-6,2/4,2,3,2/5,40,10,-7,0/4,0,7,0/7,0,1,、收获,10,6,CFU/mL,腺病毒,第十五页，共31页。,实验结果,依据,Reed-Muench,公式：,根据,Poisson,分布的公式,P(0)=e,(-m),，因为任何,CCID,50,的,P(0)=0.5,，因此,e,(-m)=,0.5,，,m=-,0.50.7,。所以,0.7,乘以,CCID,50,的滴度即为预计的,PFUs,。该病毒预计的,PFUs,为,1.110,6,PFU/mL,第十六页，共31页。,实验结果,低倍镜,2,、病毒灭活条件：,65,，,30min,。,第十七页，共31页。,实验结果,低倍镜,第十八页，共31页。,实验结果,图,1,抑制死细胞,DNA,扩增的,EMA,浓度选择结果,注：孔,1,7,分别是：阳性对照、阴性对照、,Marker,、,EMA,浓,度为,0,、,70,、,120,、,150g/mL,。,3,、,EMA,浓度选择,120g/mL,第十九页，共31页。,实验结果,图,2 120g/mL EMA,对活菌扩增的影响结果,注：孔,1,8,分别是：阳性对照、阴性对照、,Marker,、活病毒数,10,6,、,10,5,、,10,4,、,10,3,、,10,2,。,120g/mL EMA,对活菌扩增无影响,第二十页，共31页。,实验结果,图,3 PCR,检测腺病毒的灵敏度,注：孔,1-9,分别是：阴性对照、阳性对照，稀释度,10,-1,10,-4,，,Marker,稀释度,10,-4,、,10,-5,.,4,、方法灵敏度,10,3,PFU/mL,第二十一页，共31页。,实验结果,图,4 PCR,检测腺病毒特异性结果,1,注：孔,1,8,分别是：阳性对照、阴性对照、,Marker,、,3,型腺病毒,3,株、,4,型腺病毒,2,株,.,5,、方法特异性,第二十二页，共31页。,实验结果,图,5 PCR,检测腺病毒特异性结果,2,注：孔,1,7,分别是：阳性对照、阴性对照、,Marker,、,7,型腺病毒,3,株、新城疫鸡瘟病毒,1,株,.,第二十三页，共31页。,第二十四页，共31页。,研究,方案,实验,结果,项目成果,经费使用,收获体会,后期打算,研究,对象,论文,EMA-PCR,技术用于快速鉴别死活腺病毒的初探,研究证实,EMA-PCR,方法可快速鉴别死活腺病毒，能有效避免单纯,PCR,检测腺病毒产生的假阳性结果。,第二十五页，共31页。,单击添加大标题,Your text,第二十六页，共31页。,研究,方案,实验,结果,项目成果,经费使用,收获体会,后期打算,研究,对象,项目,支出金额（元）,结余金额（元）,腺病毒标准株,3500,12500,病毒,DNA,提取试剂盒,2872.4,9627.6,细胞培养,6759.4,2868.2,RTQ-PCR/PCR,1430.3,1437.9,其余实验室耗材,876.7,561.2,合计,15438.8,561.2,注：项目经费中有,20%,为教师指导经费，以上经费计算中均已扣除,。,第二十七页，共31页。,单击添加大标题,Your text,第二十八页，共31页。,研究,方案,实验,结果,项目成果,经费使用,收获体会,后期打算,研究,对象,项目的认识加深,自身,能力的提高,思考和学习的重要性,意识到自己存在的问题,第二十九页，共31页。,单击添加大标题,Your text,第三十页，共31页。,研究,方案,实验,结果,项目成果,经费使用,收获体会,后期打算,研究,对象,项目研究中，我们以腺病毒为例，建立其方法，在此基础之上，推广应用于其它病毒。方法的成功应用还需要解决一系列问题，如死活病毒的比例会不会影响实验结果；滴度相同的不同,DNA,病毒，所需,EMA,浓度是否存在差异等,。,第三十一页，共31页。,