生化反应与血清学鉴定

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,一、生化反应,掌握细菌生化反应的原理和临床意义。,熟悉鉴别细菌常用的生化试验原理、方法和结果判断。,实验目的,生化反应基本原理,不同的细菌,含有不同的分解代谢的酶,具有不同的分解代谢途径,对同一营养物质的分解代谢及其产物有所不同,利用生化方法检测代谢产物以判断细菌的分解代谢特征，从而达到鉴定细菌的目的。,称：,细菌的生化反应检测法,知识点,常见的生化反应,对,糖,的,发,酵,甲基红试验,单糖发酵试验,VP,试验,对,蛋白质的分解,吲哚试验,硫化氢试验,枸橼酸盐利用试验,尿素酶试验,其他试验,实验材料,1.,菌种,大肠埃希菌、沙门氏菌,2.,微量生化反应管,葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇、蛋白胨水（靛基质）、硫化氢。,3.,试剂,吲哚试剂,葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖,大肠埃希菌：分解乳糖产酸产气,致病性肠道细菌：大多数不分解乳糖,1.,糖发酵试验,HCOOH,脱氢酶,CO,2,+H,2,1.,糖发酵试验,（,1,）原理,细菌产生的酶,酸,糖,（酸碱指示剂）,气体,溴甲酚紫,1.,糖发酵试验,（,2,）方法,37,培养,18,24h,5,种糖生化反应管,大肠埃希菌、沙门氏菌,接种针穿刺接种,观察结果,中性或碱性 ,紫色,酸性 ,黄色,1.,糖发酵试验,（,3,）结果判断,溴甲酚紫, ,有细菌生长培养基呈混浊，可能出现,3,种结果。,（,3,）结果判断,2.,靛基质（吲哚）试验,色氨酸酶,吲哚,（无色）,色氨酸,吲哚试剂,玫瑰吲哚,（红色）,（,1,）原理,（,2,）结果判断,阳性,2.,靛基质（吲哚）试验,3.,硫化氢试验,酶,硫化氢,含硫氨基酸,硫化铁,黑褐色,或硫化铅,（,1,）原理,（,2,）结果判断,3.,硫化氢试验,生化反应材料分配,分组,两人,/,组,菌种,沙门氏菌、大肠杆菌各一支,生化反应管,七支,/,人,二、血清学鉴定,掌握细菌的血清学鉴定法 。,实验目的,实验原理,根据抗原抗体反应具有高度特异性的特点，用已知抗体来检测未知抗原（细菌）。,二、血清学鉴定,实验材料,1.,菌种,待检细菌,2.,试剂,多价沙门菌,O(A-F),诊断血清,3.,其他,载玻片,沙门氏菌的主要抗原组成,O,抗原,：,至少,58,种,含相同抗原组分归为一组，引起人类疾病的沙门菌大多数在,AF,组。,H,抗原：,分,为,、相，相以,a,、,b,、,c,等表示，相以,1,、,2,、,3,等表示。,Vi,抗原：,抗原性弱，不稳定,，,可阻止,O,抗原与其相应抗体的凝集反应,。,沙门氏菌诊断血清（,11,种）,O2,O4,O7,O9,Ha,Hb,Hc,Hd,Hi,Vi,A-F,群多价,O,A-F,群多价,O,先用,A,F,和,Vi,血清检测，根据结果再进行其他鉴定。,注意：,实验方法,50ul,血清,+,待检菌,50ulNS+,待检菌,结果判断,均匀混浊,颗粒状凝集物,组别,菌 型,抗 原,o,H,A,甲型副伤寒沙门菌,1,2,12,a:-,B,乙型副伤寒沙门菌,德比沙门菌,鼠伤寒沙门菌,1,4,5,12,1,4,12,1,4,5,12,b:1,2,f,g:-,i:1,2,C,猪霍乱（或丙型副伤寒）沙门菌,6,7,(Vi),c:1,5,D,伤寒沙门氏菌,9,12,Vi,d:-,E,鸭沙门氏菌,3,10,e,h:1,6,F,阿伯丁沙门氏菌,11,i:1,2,沙门氏菌属国内常见菌型诊断抗原表,注意事项,1.,生理盐水端应不出现凝集颗粒。,2.,沙门菌,Vi,抗原存在时可阻止,O,抗原与相应抗体发生凝集，故在做玻片凝集时应加注意，需事先加热破坏,Vi,抗原，,O,抗原才得以与相应的,O,诊断血清发生凝集。,血清学实验进程,先鉴定,A,F,和,Vi,，根据结果再进行其他鉴定。,A,F,Vi,实验进程,-,-,为非沙门氏菌属，不再继续鉴定其他抗原成分。,+,-,初步判断为沙门氏菌属，继续鉴定其他抗原成分。,-,+,初步判断为沙门氏菌属，但需去除菌体,Vi,荚膜后再继续鉴定其他抗原成分。,血清学实验材料分配,分组,4,人,/,组,菌种,待测菌种一支,诊断血清,1,盒,/,组,群别,菌 型,抗 原,o,H,A,甲型副伤寒沙门菌,1,2,12,a:-,B,乙型副伤寒沙门菌,德比沙门菌,鼠伤寒沙门菌,1,4,5,12,1,4,12,1,4,5,12,b:1,2,f,g:-,i:1,2,C,猪霍乱（或丙型副伤寒）沙门菌,6,7,(Vi),c:1,5,D,伤寒沙门氏菌,9,12,Vi,d:-,E,鸭沙门氏菌,3,10,e,h:1,6,F,阿伯丁沙门氏菌,11,i:1,2,沙门氏菌属常见菌型诊断抗原表,