天然药物化学实验须知实验要求

,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,天然药物化学实验须知实验要求,天然药物化学实验须知实验要求,第1页,试验一 药用植物化学成份提取,一 试验目标,1,了解天然药品成份分析方法,2,掌握预试验试验技术,二 试验原理：,1,单项预试法：寻找特定成份。,2,系统预试法：在未知情况下对可能含有各类成份进行全方面检验。,天然药物化学实验须知实验要求,第2页,三 试验步骤：,1,制备样品试液,（,1,）石油醚提取液,挥发油、油脂、甾醇三萜,（,2,）乙醇提取液,黄酮内酯、生物碱、酚类香 醇、萜类内酯、强心苷、鞣质、有机酸,（,3,）水提取液,氨基酸、多肽、蛋白质、糖类、皂苷有机酸,2,选择适当展开系统,3,薄层层析,取长春花粉末,20g,加,70%,乙醇,150ml,加热回流,0.5h,抽滤，滤液减压浓缩至浸膏。,展开系统：氯仿：甲醇,=10,：,1,天然药物化学实验须知实验要求,第3页,试验 二 薄层层析及中药成份预试验,一 试验目标：,1,了解薄层层析原理及应用。,2,掌握薄层层析试验技术。,二 试验原理,薄层色谱即,TLC,，属固液吸附色谱，利用吸附剂（硅胶）对不一样组分吸附能力差异，从而到达分离目标方法。,三,TLC,应用,1,可用于判断两个化合物是否相同。,2,可用于确定混合物中含有组分数。,3,可用于为柱色谱选择适当展开剂。,4,可跟踪有机反应。,天然药物化学实验须知实验要求,第4页,试验步骤,1,点样：画出起点线，即距离薄层板一端约,1cm,处。,2,展开：浸入深度,0.5cm,待展开剂前沿离顶端,1cm,处，取出用铅笔画出展开剂前沿。,展开剂：氯仿：石油醚,=5,：,1,显色：（,1,）紫外灯；（,2,）碘缸；（,3,）,5%,硫酸乙醇溶液,4,计算比移值,Rf=,原点距斑点中心距离,/,原点距展开剂前沿距离,思索题：,1,、在混合物薄层色谱中，怎样判定各组分在薄层上位置？,2,、展开剂高度若超出了点样线对试验结果有何影响？,3,、对一个未知混合物怎样选择展开剂？,天然药物化学实验须知实验要求,第5页,试验三 硅胶柱层析,一 试验目标,1,、了解硅胶柱层析原理。,2,、掌握硅胶柱层析技术。,二 试验原理,硅胶柱层析属吸附色谱，是利用吸附剂硅胶对被分离物质吸附能力不一样，用溶剂洗脱，以使组分分离。,天然药物化学实验须知实验要求,第6页,三 试验步骤,1,装柱,湿法：量取一定量体积洗脱剂（,V0,），倒入色谱柱中，然后，将硅胶放置于烧杯中，加入一定量洗脱剂搅拌至无气泡，加入柱内，并将活塞打开，一边沉降一边加，直到加完硅胶，仍使洗脱剂流滴一段时间，使色谱柱中高于硅胶溶剂几乎全部留入接收瓶中，正确计量接收器中溶剂量（,V1,），计算色谱柱保留体积（,V0-V1,）,2,上样,干法：称取一定量硅胶（色谱柱中硅胶量,10%,），置于蒸发皿中，用滴管慢慢加入样品溶液，用滴管慢慢加入样品溶液，边加边搅拌，待硅胶已完全被样品溶液湿润时，在水浴锅上蒸除溶剂，蒸除溶剂后吸附有样品硅胶在,1000C,加热除去水分，,天然药物化学实验须知实验要求,第7页,3,洗脱,样品加完后打开活塞放出液体至柱面相同时，加入洗脱剂至液面高出柱面约,10cm,在柱面上加入一个小滤纸片，再加,2cm,厚硅胶，再加一团脱脂棉。,洗脱剂：石油醚：乙酸乙脂：,=3,：,1,洗脱搜集：每份洗脱液按,30ml,搜集,显色合并：,天然药物化学实验须知实验要求,第8页,槐花米中芦丁提取分离,天然药物化学实验须知实验要求,第9页,试验目标,经过芦丁提取与精制，掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物原理与操作。,了解苷类结构研究普通程序和方法,了解,UV,在黄酮类化合物结构判定中应用,天然药物化学实验须知实验要求,第10页,试验原理,芦丁溶于热水，难溶于冷水，且分子具较多酚羟基，显弱酸性，在碱液中易溶，在酸中易析出沉淀，故可采取碱提酸沉法提取芦丁。,天然药物化学实验须知实验要求,第11页,试验方法,1,、芦丁提取、精制,槐米粗粉（,40g,）,置,1000ml,烧杯中，加水,600ml,，搅拌下加入石灰乳，调,pH89,，加热至微沸，保持,30,分钟，趁热抽滤。,残渣,滤液,在,6070,下用浓盐酸调,pH45,，静置,1,小时，抽滤,沉淀（粗品芦丁）,滤液,天然药物化学实验须知实验要求,第12页,粗品芦丁,将沉淀悬浮于蒸馏水中，加热煮沸,15min,，趁热 抽滤,残渣,滤液,在,6070,下用浓盐酸调,pH45,，静置,1,小时，抽滤,芦丁精品,注：,加石灰乳时,pH,不能过高，不然钙能与芦丁形成螯合物而不溶于水而析出；,加热过程中须不停补充蒸发掉水分，以保持,pH89,；,pH,过低会使芦丁形成盐而降低产率；,可利用芦丁在冷热水中溶解度差异来到达结晶目标。得到沉淀要粗称一下，,按芦丁在热水中,1,：,200,溶解度加蒸馏水进行重结晶。,天然药物化学实验须知实验要求,第13页,2,、芦丁判定,（,1,）芦丁定性反应：,取芦丁,34mg,，加乙醇,56ml,使溶解，分成三份做下述试验。,取上述溶液,12ml,，加,2,滴浓盐酸，再酌加少许镁粉注意观察,颜色改变情况。,取上述溶液,12ml,，然后加,2%ZrOCl,2,甲醇溶液，并详细统计,颜色改变情况。,取上述溶液,12ml,，,加等体积,10%,萘酚乙醇溶液，摇匀，,沿着管壁滴加浓硫酸，注意观察两液界面颜色改变,天然药物化学实验须知实验要求,第14页,思索题,苷类结构判定大致程序怎样？,怎样确定芦丁结构中糖基是否联结在槲皮素,3-,O,-,上？,怎样证实芦丁分子中只含有一个葡萄糖及一个鼠李糖？,天然药物化学实验须知实验要求,第15页,大黄中蒽醌类成份提取分离,天然药物化学实验须知实验要求,第16页,试验目标,1,掌握,PH,梯度萃取原理及操作技术；,2,掌握蒽醌类化合物判定方法；,3.,了解液液萃取法分离混合物试验方法；,天然药物化学实验须知实验要求,第17页,试验原理,利用乙醇为提取溶剂，可把不一样类型性质互异蒽醌类成份提取出来；,总蒽醌苷元在乙醚中有一定溶解度，故回收乙醇后得总提取物可用乙醚提取总苷元；,依据蒽醌衍生物酸性强弱，用不一样碱液进行萃取，最终得到不一样蒽醌苷元。,天然药物化学实验须知实验要求,第18页,试验方法,1,、大黄中总蒽醌成份提取分离,大黄粗粉,100g,置,1000ml,圆底烧瓶中，加入,95%,乙醇,250ml,，回流提取,2hr,，趁热抽滤,醇液,药渣,加入,95%,乙醇,200ml,，回流提取,1.5hr,，趁热抽滤,醇液,药渣,天然药物化学实验须知实验要求,第19页,乙醇提取液,静置冷却，抽滤,滤液,减压回收乙醇至糖浆状，将浓缩物转移至,250ml,三角瓶中,乙醇总提物,放冷，加入乙醚,60ml,冷浸，振摇,20,将乙醚液倾入,500ml,三角瓶中,乙醚层,浸膏,40ml,乙醚,+16ml,丙酮冷浸三次（每次,15,）,乙醚层,浸膏,乙醚总提液,天然药物化学实验须知实验要求,第20页,2,、游离蒽醌分离,乙醚总提液,5%NaHCO3,水溶液萃取,3,次，每次,40,、,30,、,30ml,，至水层颜色变浅,乙醚层,碱水层,5%Na,2,CO3,水溶液萃取,3,次，每次,40,、,35,、,35ml,碱水层,乙醚层,2%NaOH,水溶液萃取,3,次，每次,30ml,，,乙醚层,碱水层,滴加,HCl,酸化，静置沉淀，抽滤，水洗至中性，干燥,沉淀I，大黄酸,酸化，抽滤水洗，干燥,沉淀,大黄素,酸化，抽滤水洗，干燥,沉淀,大黄素甲醚、大黄酚,天然药物化学实验须知实验要求,第21页,3,、蒽醌类化合物检识,（,1,）薄层判别,吸附剂：硅胶,展开剂：石油醚,-,正己烷,-,苯,-,甲酸乙酯,-,甲醇,-,水,（,25,：,75,：,5,：,35,：,6,：,25,）,显 色：紫外灯下观察，斑点为黄色,（,2,）呈色反应,滴加,2%NaOH,水溶液，观察颜色改变,滴加,0.5%,醋酸镁乙醇溶液，观察颜色改变,滴加浓硫酸数滴，观察颜色改变,天然药物化学实验须知实验要求,第22页,