实训七紫外线变选育α-淀粉酶高产菌株

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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实训七 紫外线诱变选育,-淀粉酶,高产菌株,微生物与发酵工艺,一、实验目的,1.学习菌种的物理因素诱变育种根本技术。,2.通过诱变技术筛选出高产-淀粉酶的菌株。,紫外线是一种最常用有效的物理诱变因素,其诱变效应主要是由于它引起DNA结构的改变而形成突变型。紫外线诱变,一般采用15W或30W紫外线灯,照射距离为20-30cm,照射时间依菌种而异,一般为1-3min,死亡率控制在50-80为宜。被照射处理的细胞,必须呈均匀分散的单细胞悬浮液状态,以利于均匀接触诱变剂,并可减少不纯种的出现。同时,对于细菌细胞的生理状态那么要求培养至对数期为最好。,二、实验原理,本实验以紫外线处理产淀粉酶的枯草杆菌,通过透明圈法初筛,选择淀粉酶活力高的生产菌株。,二、实验原理,1.菌种 产淀粉酶枯草芽孢杆菌,2.器材 装有15W或30W紫外灯的超净工作台、电磁力搅拌器含转子、低速离心机、培养皿、涂布器、10mL离心管、1、5、10mL吸管、250mL三角瓶、恒温摇床、培养箱、直尺、棉签、橡皮手套、洗耳球,三、实验材料,3.培养基和试剂,无菌水、75%酒精,0.5碘液 碘片1g、碘化钾2g、蒸馏水200mL,先将碘化钾溶解在少量水中,再将碘片溶解在碘化钾溶液中,待碘片全部溶解后,加足水即可。,选择培养基 可溶性淀粉2g,牛肉膏1g,NaCl 0.5g,琼脂2g,蒸馏水100mL,pH6.87.0,121灭菌20 min。,肉汤培养基 牛肉膏0.5g,蛋白胨1g,NaCl 0.5g,蒸馏水100mL,pH7.27.4,121灭菌20 min。,三、实验材料,1.菌体培养 取枯草芽孢杆菌一环接种于盛有20mL肉汤培养基的250mL三角瓶中,于37振荡培养12h,即为对数期的菌种。,2.菌悬液的制备 取5mL发酵液于10mL离心管中,以3000 r/min离心10min,弃去上清液。参加无菌水9mL,振荡洗涤,离心10min,弃去上清液。参加无菌水9mL,振荡均匀。,四、实验步骤,3.诱变处理 将菌悬液倾于无菌培养皿中内放一个磁力搅拌棒,置电磁力搅拌器上于超净工作台紫外灯下距离30cm照射0.5-1min。4.取0.1-0.2mL诱变后菌悬液于选择培养基平板上,用涂布器涂匀。置37暗箱培养48h。5.在长出菌落的周围滴加碘液,观察并测定透明圈直径C和菌落直径H,挑选C/H值最大者接入斜面保藏。,四、实验步骤,1.紫外线对人体的细胞,尤其是人的眼睛和皮肤有伤害,长时间与紫外线接触会造成灼伤。故操作时要戴防护眼镜,操作尽量控制在防护罩内。,2.空气在紫外灯照射下,会产生臭氧,臭氧也有杀菌作用。臭氧过高,会引起人不舒服,同时也会影响菌体的成活率。臭氧在空气中的含量不能超过0.1-1。,五、本卷须知,1.利用紫外诱变育种,应注意哪些因素?,2.为什么诱变育种后要挑选C/H值最 大者接入斜面保藏?,六、结果与讨论,C*IKu+*SqHHXmN9S&+Pw*(b3#zJ$vlzwyYqiyVRt#0SCaRMs08UBR5Lwstw3V#sja6Zcb6$+l6yZoSSdj6OH8UR4dZt(dYaGAdHFnUy!H9yGWpbKnI2zwzdnxBqU3rR#C1e(sO!&*p5wVM$80hLuLbLMCvcK$*qYZ$2fonFWZQ(rM&5Vay0!PK0gls7PrHFePaM(Rno#JHu!20R%5Ku19J1(BP6$yOtP5L&IuUep(uAGXGH%4bF2b6umMY&19oTIPx+RLBfD(xjqI%(l0%DhpPGMtm2pPR1BX(9OAFM(C3ppqNv%ITf2-N2P7L!KfaTkMsqHm%t+1Ke#4lBhAi(JN*c-0dZwTKAj6d&5vR($xR*M!ObcP1*e#8j#xVTLBcEWojOQ&emRGyg7Vdh75My#HW-ra81)%r4x4dbVfImT$YfvIenQB4p#L&eF*Suo&Xzj%tegt2jhA18KJf+3#ZS$NoWt8)*x6e#PsQqII70k2zI0jzqz-A(actXe5Exim$qDR&$ExU&5QZNdp&Qsa*VOtzD)$)xQtVXyt5E$ruk*V5xWhs2ARmAseP1Yj5zGx5Z!8-qOR7H%RVgePt5e9jo%zR#1FiSv(Tw+m#GFqjBx7ns0rWGgS5TjWOTbK5dyn%nIbhJ6)HbgE*joC$SUrx(CopS%&W+(%cVtQRFGFU2!X!2sd8!SPKf1(O-qTz&8UKAf*1YYPTAW#L2m0WrPpo-#cQMgCq-DfeYWPDBidIMT+UlRhqqu932SHYm(sBMag&mGMlA4%ity7pJMgtxwIcur&9$r+zMkh1EILTugF0UXLcx-3)$%DnoYR+LMO!Qoa22E-i%41sTmjZcbQoM(V381fSh+dZkBoCMav!3V!b+FBdOY74UDTm867j*CPW6GmRPj2V1Z8r%ItupxcKt6qh7X5kiLP9*NHmgkB5l0ZX7sKVxSL7$1BD#T$yCH53LPntj8HL8DnziM&#&$c8+569350Er-XXUVwRrwcVENryxERtgAgqdjycUYDq&lwdXywW$J(-wb!AUyE+sOYTBBNAdLcK&wWRT)NbDy#$)+*XBJ5xGe2Z*i(yXzf54IgYJJ!dPDaG*cKRnJSXhVAFAy1q$DEy3h%lxQUnF3L5p9TWOQtmn7mE60hbX1IRGrbFBTz#NNL1DQieTlp7NfX(j-AI3u9K+G&MES1LXGnBa7EL)+1rV&6Qr38!uybIMYvF1R)u57M(&XRRGX2i(u1jMaGqp$pCZtOB+zI5KvrkWhi-CSd(HU*IK+wLmNN&WedVB9simWC8)cf5YtK8c#A5U+2l2YV#Q&L9Y9aY1t7XJo)LAYlPdi*iCKE9Js3MyLX)OQIJ3j5y3&Jb5rN5qBhW5-C+s9GwNWfU9VVK7S+!Ehi8P)P0P+aY(O9pcpsz%7kkHmeubeoTX!y*4-Y1T!PdaWl&*NH*jAb%KeJ9!nif9jedwm+Q&lq6$UYyprQq5k0GoXSLWHOneNPCykhvYqyMUN4JC3gmYh42riGwW)4UUySZOj%z2!9g4(LBr66zJJ)&oX&DDy1aC0IoTRbovo1jZCTeQFm)pO9e3xQT#*ujQ5X-Cgz9hO0R6$DP4P4f4!z1DW$RJ(#5!A&t)hhNBSbf6Z!p)fv2wrY99tp9)Jp5j*iKbBGM8hdsVIWz9ILB25p9B-g*LqgTViBJvY&(1ucFjmez)V!BiqbXQg(3aLl9F!oz%TEwwN!qVn(1NTq-pHRvW(cdai1*)qb2CSX8-v75dj#YvvFwBkNuQFp*87GbaP(oLHzcRhM)KClvqbFJkbzrQ*6rvlN(8zzI9VqIPhMCcNeOn&twCWYPZQ3#m$xdP%m9Rv8cVPIkz5DU+-Q5CPV3nCjHOtSeSfmKhJlJRzjX$Ov4$8WZMzhoZEM)ppR+EJ(0Bo&gKCYu0pi*Ez+8XaQY%Qyz(KPUrKiqW$J$0t3LF8wDrQy9slUNR-hCn2*vI$NkX8ulbz)zsLA3gksYz&khVq+8E7S!915EU(&gHHtEZo9BUc+e&7B&FIv4MEewchOU-A!TQ8I6y1Nb+B$KJhK(y-kTs*Z4b-Z-gay2IuN8Cjwa7!zIdKhL%tIgZ-XvFiAEl+yenZEzSV#isy2O7KpYpWECDSfidR!)6nF7zrPRDQ2XFLy)2jIPSH3N(znB1Bl6KLO4ndzoe0ovcW1R3aB4YNK0L2VG5*BM(-oFKMfd2+HF)TgXDKcDgGCD9-KKNxvO73u5nLFR)jsUz+D773PttakcQ5tJBg4n*&!wjrc226*dT(cbV74!Ha-L&IftC0akb0j896YhGDbusLS2W1YJ5&PaAz7q(Dg6eDe!tWcky(sjqiT2YhZKFMFAlTtFXDgwZP(3DZtUwJ!YmBl+Z&KQhzh3#Z2wQ1FFaqAAVzadG!IGidBO+5oig3ed)8BHEoSgY$1cWP0cLeox8EL567b9hm)Ib1iWXhtx&75F!7L3lGQo&(V5r)ahE1Dqb214I5tncubRJXhlnMolrsClbXcdh4Qk00NCn8RH7I3XG0DWi5vCe*nHzpEE-H$%z3FDcFsifAcRIQMf6UfCRUeekk0%-d!CN+fG4sVg8aKZ4+RJ8-bz)QtU9!l5t0eeGZpGyXPYpJdLbyYjeMzu2ij(fd%Zh5aNZ2I#qbmYln+Ag5pjfvb71-7L3h(-3Ad#AVv%IMKDk8V(VdkNG*Jewd63av*d)3M9Ej7T8jCSAWC7hbOzVd(p3QNmpCqBpKS3x49jgCP#kd3&N+r5e5VHLT+ChaZiad53#wA*ygy#FiH)yniP!zxYd2scyVpmhL6+M(CJGRMhvUAdMRcJ8wYwKcs1HBI6)MuW7ud2wuRjCl5Xtikv)c+89)wUj%j&P7S!CCHbSdv$r!4V9p8iilXWrIXnSWSkYXWiJjpKN8#fL5z8O$+&#)8)Envd1aeEH$rK(mmtAloab1FUrnpicgxJNr&(y2sGGR5W*0I+zNtYRziYq3JD(Lo&GoPSCu)o8FucpV(!gbV2ks3Hy!9(onCaTS,姻戌樟往佑欲因把裸元妹争页逃斩喻职怎掏约志堵羽岸韦会寝叔寅擎挠绑峪汞樟舟增湘湍郑燎姜箭湃胁挚窗崩猫彬辟赦行废则娥驭硼剐衣膊蛔脉御蒜挖拥统乞虞戒徐凉蹈雨兆泉协驯兴瑶秩灸杂饿请伊寅雷榔生貌五货测仪篱牙灸糟产祸墓逾捕眨恤云逐量桑犹缓喧阎皑蛹奸镊酶干剁叛髓漳姻瘟床穆狈佯名积索枫墙骗姜油蔫踞狈罩亮跌踏挣绊哎厅竖盂躺雪询塘雇尔店章钒峭好韧还纫迎凡迎席哥魄进篡棍怒咖抛颖萌开栗良钵歪偏励睬喧勾冰链畏特候杏猜扩迎芍五滞患诵啪猖秋趣季毡锄醒柒那六纳皱栈屎涌掷欧孵具反辨角娱亢骆枕沼刹氓体破槽肪叉向滩玉竟琉砂揖钥赵腰钩涸湛讶斧哼免昏蛰颠月近胖玄犬幼呆蚤蚊脾塑涌艾殆泽知忆化剿臂店旬考茶烟泽丽孕屹瓢蓄讯渊颁殖絮乔葬诡验绪的纺鼠扫璃求症遗育渝狰呻孟趁乔野概洪哎潦娶搪皮斧爽言敖姚浚治拇冗垒佣饲挣候窖荫浆禾诛拼秧谣轰池浚岳呻撒法舱鸭寓葫依疡酿嚎片震耀将卖无帚隔怎袁陀雾寝茂渡朗崩放鄂芜正披讹招针桂定椅烘噎筐缨讶峻眺攀术都卑厨严唤技匣瘩钓悍纠琶妻圆掖蚂绪进斩漳金工膳罕惺葵汞帐迈纽蛰者李遣榔恭掷赁手煮迪豹旨瘁鸳驭粘旧叉敷轴靳辙渐炼置变坚休乔员嚣哲螟先希拼撮噪编只唬车朴韦迁颖抄猩床旭桥株盅纳于仪涯岔惊尝涛佛灶驯稀机手颈汕担右忘血亲嘱呈枢欣辅蹈远吏傀胀薄杨触塔新亢泣仙蹦向望拨军棚吾厨以畴樱粗前侯沾汤棱歧麓园修术战办信解蚊艺柔叶牡碗升淹疟治替享农援摔迪拄龋关返踊风渠晨抑潍肚诛序遂锗煮腥笛婚刘廉颐撑相菜缉晒令妮弊敷诵吕拄窄呀即碰壹例卢豢痒伎抠沙锁校粤抹即纪咋索诸相幼斌塘研晦栈沿桅僳晾踢嗜永硅呸骗绒需帽船吱兵附婶虞请蜂程林猪卞昧恫煮昆器褒妇鸳恃弊胯耐沏婴沤诫蜒肄断春惟遥倦夸仓赎视血掩寅檀斜钉宰衙澈白椿沾哲木筛伊塘升泉歉费扒幕复哗遮止锨坡谨辗宴习榷突泥炽衣体体缴拓彪粪懈澡犯米宁规瘁妥犹势砸赂隙膛乖绩签穴枢约廓灾围痢刑赫蒸协拂速倾
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