碘-淀粉比色法测定淀粉酶课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,实验119 碘-淀粉比色法测定淀粉酶,董雷鸣,1,实验119 碘-淀粉比色法测定淀粉酶董雷鸣1,一、概述,（一）淀粉酶的分类,-,淀粉酶（人体）,-,淀粉酶（植物、微生物）,2,一、概述（一）淀粉酶的分类-淀粉酶（人体）2,（二）含淀粉酶的人体组织,胰腺,唾液腺（腮腺）,胃、胆囊、输卵管、子宫、脾、空肠、回肠、骨骼肌等,3,（二）含淀粉酶的人体组织胰腺3,（三）淀粉的分类,直链淀粉（糖淀粉）,支链淀粉（胶淀粉）,4,（三）淀粉的分类直链淀粉（糖淀粉）4,直链淀粉(糖淀粉)的结构,5,直链淀粉(糖淀粉)的结构5,碘淀粉包合物,结构,6,碘淀粉包合物结构6,支链淀粉(胶淀粉)的结构,7,支链淀粉(胶淀粉)的结构7,葡萄糖单位,连接键,分子量,自然界中,的比例,直链,50-250个,-1，4,糖苷键,150000,-600000,10-20%,支链,250-500个,-1，4,糖苷键,-1，6,糖苷键,1000000,-6000000,80-90%,8,葡萄糖单位连接键分子量自然界中直链50-250个-1，4糖,(一)原理,二、实验,-,淀粉酶,淀粉 葡萄糖+麦芽糖+糊精,+,碘液,兰色包合物,9,(一)原理二、实验-淀粉酶淀粉 葡萄糖+麦,(二)试剂,淀粉溶液（0.4,g/L）,碘应用液,10,(二)试剂淀粉溶液（0.4g/L）10,(三)操作,加入物,空白管,测定管,缓冲淀粉溶液(37预温),0.5,0.5,稀释血清,0.1,混匀，置37水浴,准确,15,min,碘应用液,0.5,0.5,蒸馏水,3.1,3.0,混匀，蒸馏水调零，波长660,nm，,比色。,11,(三)操作加入物空白管测定管缓冲淀粉溶液(37预温)0.5,(四)单位定义,100,ml,血清中的淀粉酶，在37,15,min,水解淀粉5,mg,为1个单位。,12,(四)单位定义 100ml血清中的淀粉酶，在37,1,(五)计算,空白管吸光度测定管吸光度,100,15,0.40.5,空白管吸光度,0,.01 15,5,淀粉酶（,U）=,100,ml,血清中的淀粉酶，在37,15,min,水解淀粉,5,mg,为1个单位。,（）,400,=,（,ml）,（min）,（,mg）,13,(五)计算空白管吸光度测定管吸光度 100,(六)参考值,血清 80-180,U,尿液 100-1200,U,14,(六)参考值血清 80-180U14,(七)临床意义,升高,急性胰腺炎、流行性腮腺炎；,急性胆囊炎、肠梗阻、胰腺癌、胆石症、溃疡病穿孔及吗啡注射后。,降低,肝炎、肝硬化、肝癌；,肾功能障碍。,15,(七)临床意义升高15,急性胰腺炎时血、尿淀粉酶升高的不同表现,开始升高时间,高峰时间,恢复时间,血清,8-12,h,12-24,h,2-5,d,尿液,12-24,h,5-7,d,1-2,w,16,急性胰腺炎时血、尿淀粉酶升高的不同表现开始升高时间高峰时间恢,(八)注意事项,草酸盐、枸橼酸盐、,EDTA-Na,2,及氟化钠对淀粉酶有抑制作用，肝素无抑制作用。,唾液含高浓度淀粉酶，须防止带入。,缓冲淀粉溶液若出现浑浊或絮状物，应重新配制。,17,(八)注意事项草酸盐、枸橼酸盐、EDTA-Na2及氟化钠对淀,实验115 比色法测定血清碱性磷酸酶,董雷鸣,18,实验115 比色法测定血清碱性磷酸酶董雷鸣18,一、概述,含碱性磷酸酶酶的人体组织,骨骼,肝脏,肠黏膜细胞,胎盘等,19,一、概述含碱性磷酸酶酶的人体组织骨骼19,(一)原理,二、实验,碱性磷酸酶,磷酸苯二钠 磷酸 +,酚,+,4-氨基氨替比林,铁氰化钾,醌类化合物,20,(一)原理二、实验碱性磷酸酶磷酸苯二钠 磷酸,(二)试剂,碳酸盐缓冲液(,pH 10),磷酸苯二钠底物溶液,铁氰化钾溶液,酚标准应用液,酚标准应用液,21,(二)试剂碳酸盐缓冲液(pH 10)21,(三)操作,(,Beckman CX7,全自动生化分析系统),22,(三)操作(Beckman CX7全自动生化分析系统)22,Beckman CX7,的规格,检测量,900个检验结果/小时,检测项目及种类（共33项）,电解质、急诊项目、普通生化、特殊生化、免疫、蛋白、药物检测、毒品检测,检测样品种类,血清、血浆、尿液、脑脊液,23,Beckman CX7的规格检测量23,(四)单位定义,100,ml,血清在37与底物作用15,min,产生1,mg,酚为1个金氏单位。,24,(四)单位定义 100ml血清在37与底物作用15mi,(五)参考值,成人 3-13金氏单位,儿童 5-28金氏单位,25,(五)参考值成人 3-13金氏单位25,(六)临床意义,血清,ALP,活力测定常为肝胆疾病和骨骼疾病的临床辅助诊断指标。,26,(六)临床意义 血清ALP活力测定常为肝胆疾病,活性升高,骨,paget,病、恶性肿瘤骨转移或肝转移、佝偻病、骨软化、骨折愈合期、成骨细胞瘤；,胆道梗阻、甲旁亢等。,活性降低（少见）,呆小病、磷酸酶过少症、维生素,C,缺乏症等。,27,活性升高27,(七)注意事项,底物溶液中不应有游离酚，如有酚则空白管显红色，说明磷酸苯二钠开始分解，应弃去不用。,铁氰化钾溶液应避光保存，出现蓝绿色应废弃。,加入铁氰化钾溶液后必须立即混匀，否则显色不完全。,28,(七)注意事项底物溶液中不应有游离酚，如有酚则空白管显红色，,