血凝实验真菌检查法

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,遵义医学院,*,第五次实验,1,、血凝试验,（,1,份,/,人）,2,、真菌检查法（,1,份,/,人）,3,、真菌大小培养观察,4,、观察梅毒螺旋体形态（示教）,5,、性病防治（录像）,实验内容,掌握,真菌检查实验原理及方法,掌握,血凝实验原理及方法,熟悉螺旋体及支原体形态学观察方法,二、教学目的及教学要求,（一）、病毒血凝实验,原理：某些病毒由于表面有由糖蛋白组成的血凝素（,HA,），在一定条件下，能与某些动物或人的红细胞表面的糖蛋白受体结合产生凝集，称为红细胞凝集试验或血凝试验，能形成血凝现象的病毒有：流感病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、乙脑病毒等。,操作步骤,试管号,1,2,3,4,5,6,7,8,9,生理盐水（,ml,）,1:10,病毒液（,ml,）,0.5,0.25,+,0.25,0.25,+,0.25,0.25,+,0.25,0.25,+,0.25,0.25,+,0.25,0.25,+,0.25,0.25,+,0.25,0.25,-,病毒稀释度,110,120,140,180,1160,1320,1640,1:1280,对照,0.5%,鸡红细胞悬液（,ml,）,每管,0.25ml,摇匀后，静置室温,30-60min,观察结果,弃去,0.25ml,*,观察结果时要轻拿、勿摇动,血凝试验结果判定,结果观察：,凝集特别显著：“”,凝集现象次之：“”,凝集清楚可见：“”,稍显凝集者：“”,血凝效价,：呈“”凝集时的最高稀释度为最终滴度。,意 义,检查病毒的存在。,滴定病毒的血凝效价，采用一定的病毒量进行其他实验，通常采用,4,个血凝单位。,（二）、真菌检查法（,1,份,/,人）,概念：真菌,是一大类具有细胞壁和典型细胞核不含叶绿素，不分根、茎、叶的真核细胞型微生物。,分类：单细胞和多细胞,单细胞真菌,：,呈圆形或卵圆形常见于酵母菌，类酵母菌以出芽方式繁殖。,卵圆形,G+,，,着色不一,可见假菌丝,白假丝酵母,多细胞真菌形态,菌丝,孢子,真菌基本形态,单细胞真菌：白假丝酵母，卵圆形，革兰染色阳性，着色不一，可见假菌丝。,多细胞真菌：丝状菌或霉菌，有菌丝和孢子。,烟曲霉,白假丝,酵母,菌落特征,:,酵母型真菌,类酵母型真菌,丝状菌落,单细胞,多细胞,酵母型菌落,类酵母型菌落,酵母型菌落,类酵母型菌落,真菌的菌落,白假丝酵母：菌落圆形，较大，白色菌落底层有假菌丝,多细胞真菌：观察气生菌丝，营养菌丝，表面隆起，浅沟及菌落基底颜色。,白假丝酵母,(,血平板,),黄曲霉,1,、营养要求不高，常用沙保弱培养基培养。,2,、生长缓慢，培养,1,4,周才出现典型菌落。,3,、培养温度为,22-28,，但某些深部真菌最 适生长温度为,37,。,4,、最适酸碱度为,PH4.0,6.0,。,5,、湿度要求较高。,真菌培养特性,原理,直接涂片检查,用显微镜直接检查标本中有无菌丝及孢子的存在，对皮肤丝状菌的感染可作初步诊断，本法简单迅速易行。,材 料,标本,:,脚皮等,试剂,:10,KOH,器具,:,玻片、镊子、酒精灯等,方法,KOH,透明法,（,1,）,取脚皮少许于玻片上，加二滴,10%K0H,溶液，覆盖一盖玻片,，置火焰上微微加热，以加速角质溶解，使标本透明，然后微微加压，使成薄片，并需驱去气泡，用吸水纸吸去周围溢液，（如为毛发标本，切忌加热加压过甚，以保持毛发原形为宜，便于观察真菌与毛发的关系）显微镜检查。,（,2,）将已制备的标本片，先用低倍镜检查，然后再用,高倍镜证实,注意：盖玻片倾斜,45,度慢慢盖上，不能产生气泡！,标本片制备,真菌检查镜下观,报告：“找到菌丝或孢子”“找到发外孢子”“找到发内菌丝”,（三）、支原体,支原体是一类没有细胞壁，呈多形性，能在无生命的培养基中生长繁殖的最小微生物。大小介于细菌和病毒之间。普通染色不易着色，用,Giemsa,染色着色较浅。革兰染色为阴性。营养要求较高，需要在含,10,20%,马血清和酵母浸液的培养基上生长。最适的,pH7.8,8.0.,生长缓慢,在固体培养基上培养,2,3,天后才出现菌落。典型的菌落呈,“,荷包蛋,”,状，中心厚边缘薄的菌落形态。菌落表面呈颗粒状,观察支原体集落,（四）、观察梅毒螺旋体形态,梅毒螺旋体：,Fontana,镀银染色，菌体非常细小，弯曲，螺旋状，呈棕褐色，有,紧密,螺旋。,下一堂实验课内容,1.,鸡胚形态结构观察,2.,鸡胚接种,3.,病毒的细胞培养能,CPE,4.,观察病毒包涵体（示教）,5.,病毒组织培养法,(,录像,)6.,实验总结,