分子诊断策略与常用技术

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,第十二章 分 子 诊 断,一、分子诊断的概念和特点,概念：,利用现代分子生物学和分子遗传学的技术和方法，通过检测基因结构或其表达水平是否正常，从而对人体健康状态和疾病作出诊断的方法。,传统的诊断：表现型基因型,基 因 诊 断：基因型表现型,（逆向诊断）,特点,特异性强,灵敏度高,早期诊断性,适应性强,一、分子诊断的概念和特点,检测致病基因突变；分析与疾病连锁的遗传标志；建立多基因疾病表型克隆；定量分析致病基因的表达水平,已明确疾病表型与基因型的关系,分子诊断的前提,4,二、分子诊断策略,直接诊断,直接检测致病基因的突变,基因突变类型,缺失、点突变、重复、插入等,间接诊断,应用,DNA,多态性为遗传标记进行连锁分析，确定待测者是否得到带有致病的染色体，从而间接地作出诊断,DNA,多态,RFLP,、,VNTR,、,SNP,DNA,多态（,DNA Polymorphism,）,群体中每个个体,DNA,区域中等位基因（或片段）存在两种或两种以上的形式，对基因功能没有影响，称,DNA,多态,。,DNA,分析中常用的遗传性多态性标记有,3,类：,1,）,RFLP,：,称限制性片段长度多态性，为第一代多态性标记；,2,）,重复序列多态性（,VNTR,）,：如,STR,其重复次数在人群中存在变异，形成多态即,VNTR,，为第二代多态性标记；,3,）,单碱基多态性（,SNP,）,：发生在基因组中的单个核苷酸的替代，为第三代多态性标记。,二、分子诊断策略,三、分子诊断常用技术,核酸分子杂交技术,等位基因特异寡核苷酸探针,(allele specific oligonucleotide,ASO),DNA,限制性长度多态性,(restriction fragment length polymorphism,RLFP),分析,PCR-SSCP,DNA,测序,DNA,芯片技术,点突变（,C to,T,）,5,3,3,5,G,5,3,引物,1,引物,2,探针,1,探针,2,A,等位基因特异寡核苷酸探针（,ASO,）,原理,指,DNA,序列上发生一个变异后获得或丢失了一限制性识别位点，使,DNA,限制性片段长度发生变化，在人群中形成两种或两种以上的限制性类型,利用特定限制性识别位点进行基因分析,限制性片段长度多态性分析（,RFLP,）,RLFP,分析法,RFLP,分析,优点,分辩率高，无需标记,重复性好，简便快速直观,主要用于核酸变异分析比较,微生物的分群分型，癌基因分析，遗传病的诊断等。,局限,只能应用突变引起限制性酶切位点改变筛选，检测效率低。,原理,将经扩增的,DNA,片段变性形成单链，由于序列不同，单链构象就有差异，在中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳的迁移率不同，通过与标准物的对比，即可检测出有无变异。,优点,检测基因变异，具有操作简便、快速特点，不需特殊设备，适用于大样本筛选。,己广泛应用于检测各种病原体基因的点突变及缺失突变，基因的多态性分析等。,PCR/,单链构象多态性分析（,SSCP,）,（,PCR-SSCP,）示意图,DNA,测序,DNA,自动测序结果举例,DNA,芯片技术,四、分子诊断的应用及举例,遗传疾病,肿瘤,感染性疾病,判断个体疾病易感性,器官移植组织配型,法医学中个体识别、亲子鉴定,Mst,酶切位点,(CCTNAGG),5,3,正常基因,5,3,突变基因,1.15kb,1.35kb,镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析,G,A,G,G,T,G,谷,Aa,缬,Aa,+,0.2kb,1.15kb,1.35kb,正常人,突变携带着,患者,镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析,Normal,Gene Probe,与正常,Probe ,杂交稳定,Mutation,S,Gene Probe,与异常,S,杂交 稳定,镰状红细胞贫血患者基因组的,ASO,探针杂交,20,斑点杂交结果：,镰状红细胞贫血患者基因组的,ASO,探针杂交,/S S/S,正常探针,异常探针,正常人,纯合突变,杂合突变,Leber,病患者,PCR/SSCP,分析,+,9,、静夜四无邻，荒居旧业贫。,2024/10/23,2024/10/23,Wednesday,October 23,2024,10,、雨中黄叶树，灯下白头人。,2024/10/23,2024/10/23,2024/10/23,10/23/2024 12:22:42 PM,11,、以我独沈久，愧君相见频。,2024/10/23,2024/10/23,2024/10/23,Oct-24,23-Oct-24,12,、故人江海别，几度隔山川。,2024/10/23,2024/10/23,2024/10/23,Wednesday,October 23,2024,13,、乍见翻疑梦，相悲各问年。,2024/10/23,2024/10/23,2024/10/23,2024/10/23,10/23/2024,14,、他乡生白发，旧国见青山。,23 十月 2024,2024/10/23,2024/10/23,2024/10/23,15,、比不了得就不比，得不到的就不要。,十月 24,2024/10/23,2024/10/23,2024/10/23,10/23/2024,16,、行动出成果，工作出财富。,2024/10/23,2024/10/23,23 October 2024,17,、做前，能够环视四周；做时，你只能或者最好沿着以脚为起点的射线向前。,2024/10/23,2024/10/23,2024/10/23,2024/10/23,9,、没有失败，只有暂时停止成功！。,2024/10/23,2024/10/23,Wednesday,October 23,2024,10,、很多事情努力了未必有结果，但是不努力却什么改变也没有。,2024/10/23,2024/10/23,2024/10/23,10/23/2024 12:22:42 PM,11,、成功就是日复一日那一点点小小努力的积累。,2024/10/23,2024/10/23,2024/10/23,Oct-24,23-Oct-24,12,、世间成事，不求其绝对圆满，留一份不足，可得无限完美。,2024/10/23,2024/10/23,2024/10/23,Wednesday,October 23,2024,13,、不知香积寺，数里入云峰。,2024/10/23,2024/10/23,2024/10/23,2024/10/23,10/23/2024,14,、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。,23 十月 2024,2024/10/23,2024/10/23,2024/10/23,15,、楚塞三湘接，荆门九派通。,十月 24,2024/10/23,2024/10/23,2024/10/23,10/23/2024,16,、少年十五二十时，步行夺得胡马骑。,2024/10/23,2024/10/23,23 October 2024,17,、空山新雨后，天气晚来秋。,2024/10/23,2024/10/23,2024/10/23,2024/10/23,9,、杨柳散和风，青山澹吾虑。,2024/10/23,2024/10/23,Wednesday,October 23,2024,10,、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。,2024/10/23,2024/10/23,2024/10/23,10/23/2024 12:22:42 PM,11,、越是没有本领的就越加自命不凡。,2024/10/23,2024/10/23,2024/10/23,Oct-24,23-Oct-24,12,、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。,2024/10/23,2024/10/23,2024/10/23,Wednesday,October 23,2024,13,、知人者智，自知者明。胜人者有力，自胜者强。,2024/10/23,2024/10/23,2024/10/23,2024/10/23,10/23/2024,14,、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。,23 十月 2024,2024/10/23,2024/10/23,2024/10/23,15,、最具挑战性的挑战莫过于提升自我。,十月 24,2024/10/23,2024/10/23,2024/10/23,10/23/2024,16,、业余生活要有意义，不要越轨。,2024/10/23,2024/10/23,23 October 2024,17,、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。,2024/10/23,2024/10/23,2024/10/23,2024/10/23,MOMODA POWERPOINT,Lorem ipsum dolor sit,eleifend nulla ac,fringilla purus.Nulla iaculis tempor felis amet,consectetur adipiscing elit.Fusce id urna blanditut cursus.,感谢您的下载观看,专家告诉,内容总结,第十二章 分 子 诊 断。第十二章 分 子 诊 断。基 因 诊 断：基因型表现型。直接诊断直接检测致病基因的突变。基因突变类型缺失、点突变、重复、插入等。DNA多态（DNA Polymorphism）。1）RFLP：称限制性片段长度多态性，为第一代多态性标记。3）单碱基多态性（SNP）：发生在基因组中的单个核苷酸的替代，为第三代多态性标记。等位基因特异寡核苷酸探针(allele specific oligonucleotide,ASO)。DNA限制性长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RLFP)分析。点突变（C to T）。GAG GTG。/S S/S。Leber 病患者 PCR/SSCP分析。5月-2205:47:3605:47May-2211-May-22。15、比不了得就不比，得不到的就不要。专家告诉,