实验二-影响酶促反应的因素课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验二温度、,pH,值、激活剂和抑制剂对酶活性的影响及特异性,一、实验目的,1,通过实验，观察温度、,pH,值、激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响。,2,能运用所学的生化知识对实验结果进行正确的分析。,二、实验原理,利用淀粉及其水解产物的颜色反应，来比较唾液淀粉酶在不同条件下催化淀粉水解的程度，从而判断温度、,pH,、激动剂和抑制剂对酶的活性影响。,淀粉,糊精,麦芽糖和葡萄糖,蓝色,碘,紫色红色无色,无色,碘,碘,二、实验原理,在低温时，酶活性降低，酶促反应速度较慢，甚至停止；随着温度升高，酶的活性恢复，反应速度加快；当达到最适温度时，酶的活性最大，酶促反应速度达到最大。人体内大多数的酶的最适温度在,37,左右。温度过高，酶变性失活，酶促反应速度下降，甚至停止。,每种酶都有最适的,pH,值，在最适,pH,值时，酶的活性最大，酶促反应速度最快；偏离酶的最适,pH,均可引起酶蛋白变性而降低或失去活性。唾液淀粉酶的最适,pH,值为,6.8,。,氯离子对唾液淀粉酶有激活作用；铜离子对唾液淀粉酶有抑制作用。,三、实验材料,1.1%,淀粉溶液 取可溶性淀粉,1g,加,5ml,蒸馏水,调成糊状,再加,80ml,蒸馏水,加热并不断搅拌,使其充分溶解,放冷,最后用蒸馏水稀释至,100ml,。,2.pH3.0,缓冲液 取,0.2mmol/LNa2HPO4,溶液,205ml,，,0.1mol/L,柠檬酸溶液,795ml,混合即成,.,3.pH6.8,缓冲液 取,0.2mmol/LNa2HPO4,溶液,772ml,，,0.1mol/L,柠檬酸溶液,228ml,混合即成,.,4.pH8.0,缓冲液 取,0.2mmol/LNa2HPO4,溶液,972ml,，,0.1mol/L,柠檬酸溶液,28ml,混合即成,.,5.0.9%NaCl,溶液,6.1%CuSO4,溶液,7.,碘液,9.,试管架,11.,试管夹,12.,滴管,13.,白瓷板,14.,恒温水浴箱,15.,电炉,16.,烧杯,【,注意事项,】,1.,注意实验器材的干净，避免杂质影响反应结果,2.,各管反应时间应严格控制，保证一致。,四、实验方法,稀释唾液制备 用水漱口，含蒸馏水咀嚼,2,分钟后，把唾液吐进烧杯中备用。,（注：唾液淀粉酶活性具有个体差异，按下述各实验方法进行实验，有部分同学可能失败，可重新操作，但在重做过程中，要根据第一次实验结果改变稀释唾液的用量，反应太慢，则增加稀释唾液用量，如果反应太快，则减少稀释唾液的用量）,煮沸唾液的制备 取上述唾液约,5ml,，放入沸水中煮沸,5,分钟，取出备用。,（一）温度对酶促反应速度的影响,管 号,1,2,3,缓冲液（,pH6.8,）,20,滴,20,滴,20,滴,1%,淀粉溶液,10,滴,10,滴,10,滴,把三支管溶液摇匀，然后分别放至相应的温度中水浴预温,预温温度,0,37,37,预温,5,分钟后取出，继续向各管加入相应唾液,稀释唾液,10,滴,10,滴,煮沸唾液,10,滴,把三支管摇匀，然后分别放至相应的温度中水浴,10,分钟，加碘,2,滴,水浴温度,0,37,37,结果与分析,取白瓷板一块，向各凹分别加,1,滴碘液，每隔半分钟用滴管或玻棒从,2,号管取溶液,1,滴，加到已加有碘液的小凹中，观察颜色变化，直至与碘不呈色时（即只显棕黄色时），向各管加碘液,1,滴，摇匀观察颜色变化,(,切记勿摇动,),。摇匀再观察。,（二）,pH,对酶促反应速度的影响,管号,1,2,3,1%,淀粉溶液,10,滴,10,滴,10,滴,pH5.0,缓冲液,10,滴,pH6.8,缓冲液,10,滴,pH8.0,缓冲液,10,滴,稀释唾液,5,滴,5,滴,5,滴,把三支管摇匀，然后放至,37,水浴,10,分钟，加碘,2,滴摇匀,结果与分析,将各管混匀，放进,37,水浴箱中保温。,取白瓷板一块，向各凹分别加,1,滴碘液，每隔半分钟用滴管或玻棒从,2,号管取溶液,1,滴，加到已加有碘液的小凹中，观察颜色变化，直至与碘不呈色时（即只显棕黄色时），向各管加碘液,1,滴，摇匀观察颜色变化。,（三）激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响,管号,1,2,3,4,1%,淀粉溶液,10,滴,10,滴,10,滴,10,滴,pH6.8,缓冲液,10,滴,10,滴,10,滴,10,滴,蒸馏水,2,滴,氯化钠溶液,2,滴,CuSO,4,溶液,2,滴,Na,2,SO,4,溶液,2,滴,稀释唾液,5,滴,5,滴,5,滴,5,滴,把三支管摇匀，然后放至,37,水浴,10,分钟，加碘,2,滴摇匀,结果与分析,将各管摇匀，放进,37,水浴箱中保温。取白瓷板一块，向各凹分别加,1,滴碘液，每隔半分钟用滴管或玻棒从,2,号管取溶液,1,滴，加到已加有碘液的小凹中，观察颜色变化，直至与碘不呈色时（即只显棕黄色时），向各管加碘液,1,滴，摇匀，观察各管颜色变化。,激活剂与抑制剂,激活剂与抑制剂,五、思考题,1.,什么是酶的最适温度？,2.,什么是酶的最适,pH?,3.,激活剂与抑制剂对酶活性影,响实验中设置第四管的作用,是什么？,4.,什么是酶的特异性？,（四）酶的专一性对酶促反应的影响。,加入物,1,号管,2,号管,3,号管,PH,值,6.8,缓冲液,20,滴,20,滴,20,滴,1%,的淀粉,10,滴,10,滴,1%,的蔗糖,10,滴,煮沸唾液,5,滴,稀释唾液,5,滴,5,滴,结果与分析,（,2,）混匀，,37,水浴,10min,，分别加入班氏试剂,20,滴。,（,3,）各管摇匀置于沸水煮沸,8-10min,，观察结果并记录。,酶的专一性,