影响免疫组化染色的因素和对策培训课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,影响免疫组化染色的因素和对策,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,影响免疫组化染色的因素和对策,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,影响免疫组化染色的因素和对策,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,影响免疫组化染色的因素和对策,影响免疫组化染色的因素和对策,影响免疫组化染色的因素和对策,一、影响免疫组化染色质量的因素,1,、标本的固定,手术标本的及时固定是保证免疫组化染色质量的关键。未能及时固定的组织，会造成细胞的变性和自溶，导致结构的破坏和抗原物质的弥散，在免疫组化染色上表现为抗原定位的变化和背景染色的增高。,过度的固定会造成抗原决定簇的封闭和抗原的丢失。,2,影响免疫组化染色的因素和对策,一、影响免疫组化染色质量的因素1、标本的固定2影响免疫组化染,同一病例的,ER,表达情况,ER,ER,固定不及时,固定二周后取材,固定,8,小时后取材,3,影响免疫组化染色的因素和对策,同一病例的ER表达情况ERER固定不及时固定二周后取材固定8,未及时固定的乳腺癌组织,ER,表达胞浆着色,4,影响免疫组化染色的因素和对策,未及时固定的乳腺癌组织ER表达胞浆着色4影响免疫组化染色的因,影响免疫组化染色质量的因素,2,、切片质量的影响,切片太厚、皱褶，刀痕，敷贴不牢固，以及脱蜡不彻底，均会影响免疫组化的染色质量，易出现非特异性染色和染色不均匀。,5,影响免疫组化染色的因素和对策,影响免疫组化染色质量的因素2、切片质量的影响5影响免疫组化染,影响免疫组化染色质量的因素,3,、抗原修复环节的影响,抗原修复环节在免疫组化染色中是极为重要的环节。不同的修复时间、不同的修复方法、不同的抗原修复液，最终的结果会有差异。,6,影响免疫组化染色的因素和对策,影响免疫组化染色质量的因素3、抗原修复环节的影响6影响免疫组,同一蜡块不同修复方式的结果,ER,Her-2(2+),Her-2(1+),微波修复,水浴修复,7,影响免疫组化染色的因素和对策,同一蜡块不同修复方式的结果ERHer-2(2+)H,同一蜡块不同修复时间的结果,8,影响免疫组化染色的因素和对策,同一蜡块不同修复时间的结果8影响免疫组化染色的因,同一蜡块使用不同修复液的结果,Ki-67,EDTA,柠檬酸,9,影响免疫组化染色的因素和对策,同一蜡块使用不同修复液的结果Ki-67EDTA柠檬酸9,4,、操作过程中细节问题的影响,滴加抗体未完全覆盖组织，,PBS,残留过多，操作过程中切片干燥等原因，会出现边缘效应和染色不均匀及北京染色等。,10,影响免疫组化染色的因素和对策,4、操作过程中细节问题的影响10影响免疫组化染色的因素和对策,抗体覆盖组织不完全造成的边缘效应,11,影响免疫组化染色的因素和对策,抗体覆盖组织不完全造成的边缘效应11影响免疫组化染色的因素和,抗体覆盖不均匀的灶状着色,12,影响免疫组化染色的因素和对策,抗体覆盖不均匀的灶状着色12影响免疫组化染色的因素和对策,影响免疫组化染色质量的因素,5,、第一抗体、检测系统的影响,使用不同克隆、不同种属来源的抗体，不同的检测系统，免疫组化的染色会产生差异。,使用三步法试剂盒（如,SP,法）生物素系统进行免疫组化染色时，如果操作不当会产生较强的背景染色。,13,影响免疫组化染色的因素和对策,影响免疫组化染色质量的因素5、第一抗体、检测系统的影响13影,影响免疫组化染色质量的因素,6,、显色剂、复染剂的影响,不同的,DAB,显色试剂盒、不同的显色时间，会对免疫组化染色强度及级别判断产生影响。,苏木素复染过深、过浅，对比都不清晰。,14,影响免疫组化染色的因素和对策,影响免疫组化染色质量的因素6、显色剂、复染剂的影响14影响免,DAB,显色恰当,GST-,15,影响免疫组化染色的因素和对策,DAB显色恰当GST-15影,影响免疫组化染色的因素和对策培训课件,Ki-67,17,影响免疫组化染色的因素和对策,Ki-6717影响免疫组化染色的因素和对策,胸腔积液离心包埋细胞块的免疫组化染色,TTF-1,CK7,18,影响免疫组化染色的因素和对策,胸腔积液离心包埋细胞块的免疫组化染色TTF-1CK718影响,Calponin,19,影响免疫组化染色的因素和对策,Calponin19影响免疫组化染色的因素和对策,TOPO,20,影响免疫组化染色的因素和对策,TOPO20影响免疫组化染色的因素和对策,CK5/6,21,影响免疫组化染色的因素和对策,CK5/621影响免疫组化染色的因素和对策,P63,22,影响免疫组化染色的因素和对策,P6322影响免疫组化染色的因素和对策,DAB,显色适当，苏木素复染过浅,23,影响免疫组化染色的因素和对策,DAB显色适当，苏木素复染过浅23影响免疫组化染色的因素和对,二、免疫组化染色的质量控制,组织固定,1,、标本在离体后应立即浸泡于相当于标本体积,810,倍的标准固定液中，大标本要剖开固定。离体后标本固定前存放不得超过,30,分钟。,2,、在实际工作中，就可操作性而言，,10%,的缓冲福尔马林是兼顾保存组织形态和抗原性通行的、被广泛接受的选择。,3,、适度、适时的固定。一般而言，大标本只要做到及时切开固定，在室温下,12,小时即可达到固定要求；为了适应免疫组化染色标准化的需要，标本固定后应及时取材，通常固定时间不得超过,24,小时。,4,、达到固定时间要求而不能及时进入脱水程序的标本，建议将标本置入,70%,的乙醇中进行暂时保存直至进入组织脱水程序。,24,影响免疫组化染色的因素和对策,二、免疫组化染色的质量控制组织固定24影响免疫组化染色的因素,免疫组化染色的质量控制,脱水及制片,1,、建立严格的组织脱水试剂规范化更换制度，保证组织处理质量。,2,、切片厚度一般,34,m,，厚薄均匀、平整，无刀痕、折叠，采用高质量防脱载玻片。,3,、切片在,60,烤箱内烤,23,小时，或者,70,烤箱内,1,小时。,4,、脱蜡要和常规切片分开，使用单独的二甲苯，如果温度过低或二甲苯使用次数较多，可适当延长脱蜡时间。,25,影响免疫组化染色的因素和对策,免疫组化染色的质量控制脱水及制片25影响免疫组化染色的因素和,免疫组化染色的质量控制,抗原修复,抗原修复的方式有多种，热修复一般推荐高压锅热修复法，但是微波修复也有其方便的一面。影响抗原修复的基本因素是加热的温度和加热的时间，以及所使用的修复液的,PH,值。需要操作者在实际工作中摸索总结，同时要根据每种抗体的具体要求，找到较适合的修复方式。抗原修复的恰当与否，直接关系到免疫组织化学染色的成败，进一步影响最后结果的正确判读。,26,影响免疫组化染色的因素和对策,免疫组化染色的质量控制抗原修复26影响免疫组化染色的因素和对,免疫组化染色的质量控制,抗体及检测系统的选择,选择优良的抗体和检测试剂盒，新买抗体要进行敏感性测试，找到最佳的抗原修复条件，每次试验要设置相应的阳性和阴性对照。,试剂的使用一定在其有效期内，同时经常观察抗体使用过程中的结果变化，如不理想要及时更换。,27,影响免疫组化染色的因素和对策,免疫组化染色的质量控制抗体及检测系统的选择27影响免疫组化染,免疫组化染色的质量控制,显色和复染,不要忽视显色过程，和常规染色类似，显色不恰当也会造成染色的前功尽弃。不同的组织、不同的抗体显色时间有差异，必要时使用显微镜观察切片的显色效果。,苏木素复染过深过浅都会造成对比不清晰，不利于观察评价。,28,影响免疫组化染色的因素和对策,免疫组化染色的质量控制显色和复染28影响免疫组化染色的因素和,免疫组化染色的质量控制,影响免疫组化染色的因素很多。在操作中应注重细节，避免随意性，严格按照技术流程规范化操作，一个小的细节的疏忽或随意性操作，都可能会对免疫组化染色造成明显的影响。我们应该在实际工作中每一步都做到位，养成一丝不苟的工作作风。,29,影响免疫组化染色的因素和对策,免疫组化染色的质量控制影响免疫组化染色的因素很多。在操作中应,设置阳性对照组织芯片,30,影响免疫组化染色的因素和对策,设置阳性对照组织芯片30影响免疫组化染色的因素和对策,