药物色谱分析-5

Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Click to edit Master title style,药物色谱分析,-5,高效液相色谱法分类及仪器装置,齐永秀,药物分析教研室,一、,高效液相色谱,法的定义及分类,二、,高效液相色谱法的特点,三、高效液相色谱仪的基本装置,主要内容,一、,高效液相色谱,法的定义,高效液相色谱（,HPLC,）：,在经典液相色谱法基础上,采用,GC,理论和,实验技术,以高压输液系统、高效固定相、,高灵,敏检测系统形成一种分离和分析方法。,HPLC,特点：,“,三高,”,、,“,一快,”,、,“,一广,”,高选择性,可将性质相似的组分分开；高效能,柱效可,达,30000,块,/,米，多次利用组分性质差异进行分离；高灵,敏度,10,-9,10,-12,g,，适于痕量分析；分析速度快,几,几,十分钟完成分离分析,一次可测多种样品；应用范围广,80%,有机物质能得到分析。,二、,高效液相色谱法与经典色谱法的比较,主要区别：固定相、输液设备和检测手段差别,经典,LC,仅做为一种分离手段,HPLC,可用于分离和分析,项目,经典柱色谱法,高效液相色谱法,固定相粒度,/,m,75 500,310,固定相粒径分布,/RSD,20%30%,5%,柱长,/cm,10100,525,柱内径,/cm,25,0.30.46,柱入口压力,/,MPa,0.0010.1,240,柱效,/,每米理论塔板数,10100,1,10,4,1,10,6,分析速度,慢,快,色谱柱使用情况,只可用一次,可重复多次使用,在线检测,不能在线检测,能在线检测,定性定量准确度,一般较差,好,1,、分析对象差别,GC,：,能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，,高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物,的样品不能检测（占有机物的,20%,）,HPLC,：,溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发,性和热稳定性的限制，且分子量大、难气化、热稳,定性差及高分子和离子型样品也可检测（占有机物,的,80%,）,二、,高效液相色谱法与气相色谱法比较,2,、流动相差别,GC,：,流动相为惰性气体，种类少，,组分与流动相,无亲合作用力，组分只与固定相作用而实现分离,HPLC,：,流动相为液体，,流动相与组分间有亲合作,用力，为提高柱的选择性、改善分离增加了有力因,素，且流动相种类较多，选择余地大。选用不同比,例的两种或两种以上液体作为流动相，可以使难分,离的组分得到很好的分离,3,、操作条件差别,GC,：,加温操作,HPLC,：,室温高压操作（液体粘度大，峰展宽小）,三、,HPLC,主要类型和分离方法,四类基本类型色谱法,分配色谱法（组分在两相溶解性能的差异）,吸附色谱法（组分在两相吸附作用力的差异）,离子交换色谱法（离子交换能力的差异）,空间排阻色谱法（组分分子线团尺寸差异）,三、,高效液相色谱仪的基本装置,三、,高效液相色谱仪的基本装置,1.,高压输液系统,(,一,),储液罐,(,对洗脱液化学惰性,预先脱气,),常用脱气方式,:,真空脱气机脱气法,超声波脱气法：,500ml,溶液约,20,30min,吹氦脱气法,三、,高效液相色谱仪的基本装置,1.,高压输液系统,(,二,),高压输液泵,要求：,流量稳定、输出压力高、流量范围宽、耐酸,碱和缓冲液腐蚀、泵体易清洗,类型：,往复柱塞泵、注射泵、气动放大泵、液压隔,膜泵,三、,高效液相色谱仪的基本装置,1.,高压输液系统,(,三,),梯度洗脱装置,低压梯度洗脱装置：,高压梯度洗脱装置：,三、,高效液相色谱仪的基本装置,2.,进样系统,自动进样器进样,六通阀进样,三、,高效液相色谱仪的基本装置,3.,色谱柱,要求,:,分离度高、柱容量大、分析速度快,结构：,增加色谱柱的柱长可以提高柱效，目前的,装填设备和技术，只能保证柱长在,100,250mm,之间,获得好的效果。,三、,高效液相色谱仪的基本装置,4.,检测器,要求,:,灵敏度高、响应对流动相流量和温度不敏感、不引起柱外谱带展宽、线性范围宽、适用范围广,类型：,紫外吸收检测器（,UVD,），蒸发光散射检测器,（,ELSD,），折光指数检测器（,RID,），电导检测器,（,ECD,），荧光检测器（,FLD,）和质谱检测器（,MSD,）,三、,高效液相色谱仪的基本装置,4.,检测器,-,光电二极管阵列紫外检测器,同时得到多个波长的色谱图,对每个色谱峰的指定位置实时记录吸收光谱图,在色谱运行期间逐点进行光谱扫描,得到时间,-,波长,-,吸光度三维图形,可以选择整个波长范围内的宽谱带检测,一次进样,所有组分均能检测,三、,高效液相色谱仪的基本装置,4.,检测器,-,光电二极管阵列紫外检测器主要应用特色,色谱峰的纯度检查,:,比较光谱法,吸收比法,双波长法,色谱峰的鉴定,谱带宽度检测,峰抑制,选择最大波长,三、,高效液相色谱仪的基本装置,5.,馏分收集器,6.,数据处理及色谱工作站,谢谢各位！,