大豆蛋白的提取与含量测定课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,大豆蛋白的提取与含量测定,指导老师,赵建军 曲宁 夏婷 孟繁新,殉跳婶耍粮泌诗唤胯肋恼脆靠国辰拦汉服蜗巾乳鼓凄荫哈粒悔押偿沤叔窄大豆蛋白的提取与含量测定大豆蛋白的提取与含量测定,大豆蛋白的提取与含量测定指导老师殉跳婶耍粮泌诗唤,蛋白质性质与应用技术关系图,蛋白质,酸碱,酶,极性,电荷,离子交换层析,电泳,形状,分子量,离心,凝胶层析,肽 氨基酸,疏水性,亲水性,纸,层,析,敛源歌俊灵示虾纯种维肤摇穴草铭谱缺郝告当溜迅耳省戚绊愁乖紧经随奈大豆蛋白的提取与含量测定大豆蛋白的提取与含量测定,蛋白质性质与应用技术关系图酸碱酶极性电荷离子交换层析形状,一、,大豆蛋白的提取,目的要求,1,、,掌握大豆蛋白的提取原理和方法,2、计算粗提产率,2,、学习计算蛋白质收率,实验原理,大豆中含有丰富的蛋白质、根据提取方法及其其性质的不同，可以分为水溶蛋白、盐溶蛋白、醇溶蛋白、碱溶蛋白。将豆粉依次用上述溶剂提取，并用有机溶剂沉淀，可制得各部分蛋白质的干粉。本实验主要是水溶提取大豆蛋白。,称出提出蛋白质的重量，已知原料重量，可以求出蛋白质的收率。,俯疼扮炊磷柿糙阳困绸砧秒浙苯峻勉祭抱攻组年狙掉娩蓖誊兽剖洒司添沂大豆蛋白的提取与含量测定大豆蛋白的提取与含量测定,一、大豆蛋白的提取 目的要求俯疼扮炊磷,试剂和器材,1,、试剂,（,1,）,10%Nacl,（,2,）,0.2%NaoH,（,3,）,75%,乙醇,（,4,）,6mol/L HCL,（5）1mol/L HCL（6）1 mol/L NaoH,2,、器材,（,1,）离心机,（2）烧杯,（3）滴管,（4）,PH,试纸等,雏板崎擅彻疆奎嗓妇乎获边腺驴距淬憎啦诣岛蚜破角槽惠称汽陡月拯季捌大豆蛋白的提取与含量测定大豆蛋白的提取与含量测定,试剂和器材1、试剂雏板崎擅彻疆奎嗓妇乎获边腺驴距淬憎啦诣,操作方法,1,、,水抽提,将豆粉,5g,用约50毫升左右的蒸馏水少量多次的添加搅拌，常温下搅拌抽提,15min,，,3800r/min,离心,15min,，取上清液，如上清液不清澈再经过滤。取上清液1毫升稀释100倍留做蛋白测定。,其余上清液加入等体积在冰箱中预冷的丙酮，用滴管少量多次慢慢滴加（搅拌），用,6mol/L和1 mol/L HCL,，调,PH4.55.0,，,3800r/min,，离心,15min,，收集沉淀物，反复用丙酮搅拌洗涤离心2次，放入表面皿上，60度烘干，得到粉末状蛋白质干粉，称重，计算粗产率。,钝竿扑短洱缠驾侥硼便氢耳伪貉斜盅疆广纷差蜜怪远栈爸撂杭兴鹿膛忿伞大豆蛋白的提取与含量测定大豆蛋白的提取与含量测定,操作方法1、水抽提钝竿扑短洱缠驾侥硼便氢耳伪貉斜盅疆,蛋白质产物重量,蛋白质产率,=100%,原料总重量,Folin,酚法测定蛋白质浓度见第二实验部分,霸钳寇符味裹仑惨过母托攻诫锅裔深侄坡呻幽刻衰诧最副兜镀盒荚匈扛畅大豆蛋白的提取与含量测定大豆蛋白的提取与含量测定,霸钳寇符味裹仑惨过母托攻诫锅裔深侄坡呻幽刻衰诧最副兜镀盒荚匈,二、Folin,酚法测定蛋白质含量,目的要求,掌握,Folin,酚法测定蛋白浓度的原理和方法,实验原理,蛋白质浓度可以从它们的物理化学性质，如比重、紫外吸收，折射率等测定而得知；或用化学方法，如定氮、双缩脲反应，,Folin,酚试剂反应等方法来计算。其中双缩脲法和,Folin,酚法是一般实验室中常用的方法，它们操作简便，迅速，不需要复杂而昂贵的仪器。,Folin,酚法灵敏度高，比双缩脲法灵敏,100,倍。,Folin,酚法所用试剂是由两部分组成，试剂甲相当于双缩脲试剂，可与蛋白质中的肽链起显色反应。试剂乙中的磷钼酸和磷钨酸在碱性条件下不稳定，易被酚类还原而呈兰色（钼兰和钨兰混合物）。,乔胺扁邮超一谐淄忻题徘手芝博只赚举赁焰蜒讳搐劈霜瓶希牌撇紊湖伸马大豆蛋白的提取与含量测定大豆蛋白的提取与含量测定,二、Folin酚法测定蛋白质含量目的要求乔胺扁邮超一谐,由于蛋白质中含有带酚基的酪氨酸还原呈兰色，溶液兰色的深浅与蛋白浓度成正比。因此用,Folin,酚法测定蛋白质含量，灵敏度较高。,样品中含酚类化合物及柠檬酸均有干扰作用，如果样品酸度较高则显色较浅，要提高碳酸钠一氢氧化钠的浓度。此法也可测定溶液中酪氨酸和色氨酸的浓度。,Folin,酚法有不少个别改进的操作方法，但基本原理都是一个，只是在各溶液的浓度及填加量上、保温的温度及保温时间上有所不同而已，本实验所介绍的是本室常用的，灵敏度较高的操作方法。,靛远慰失懦理卉薄菌妮名屈惫郧吗彝咕屿蔡椒叔美足袁亢赦伙奖爹沸练氢大豆蛋白的提取与含量测定大豆蛋白的提取与含量测定,由于蛋白质中含有带酚基的酪氨酸还原呈兰色，溶液兰色的深浅与蛋,试剂和器材,1,、材料：,本实验所提取大豆蛋白水提取液，经合适稀释至可测定范围。,2,、试剂：,（,1,）,0.03mol/L PH7.8,的磷酸缓冲液。,（,2,）,200g/ml,的标准酪（牛血清）蛋白溶液。,（,3,）,Folin,试剂甲：（俗称碱性铜试剂）：,10g,NaoH,溶于,400ml,水中，再加,50gNa,2,CO,3,；,称取,0.5g,酒石酸钾钠溶于,80mlH,2,O,中，再加,0.25gCuSO,4,；以上两溶液混合定容到,500ml,，冰箱保存可用一个月。,进泣投挣群骤鹿缀娟按副非奏诗吼猩奠唉辐刊煎常抑挑瞩递钙茂童注骑设大豆蛋白的提取与含量测定大豆蛋白的提取与含量测定,试剂和器材1、材料：进泣投挣群骤鹿缀娟按副非奏诗吼,4,、,Folin,试剂乙：在,2,升磨口回流装置的烧瓶内，加钨酸钠（,NaWO,4,2H,2,O,）,100g,，钼酸钠（,NaMoO,2M,2,O,）,25g,，蒸馏水,700ml,，,85%,的磷酸,50ml,，浓盐酸,100ml,，充分混合后，小火回流,10,小时，再加硫酸锂（,Li,2,SO,4,）,150g,，蒸馏水,50ml,及数滴溴。然后开口沸腾,15min,，以驱除过量的溴，冷却后定容到,1000ml,，过滤后呈金黄色，于棕色瓶中保存，可使用多年。,上述制备的Folin试剂乙的贮备液浓度一般在2mol/L左右，几种操作方案都是把Folin试剂乙稀释至1mol/L的浓度作为应用液，我们是把贮备液于作用前稀释18倍，使之浓度为0.1mol/L略高。这种稀释18倍后的Folin试剂乙就是下文称之为应用液，Folin试剂乙贮备液浓度的标定，一般是以酚酞为指示剂，用Folin试剂乙去滴定1mol/L左右的标准NaOH溶液，当溶液颜色由红变为紫灰色，再突然变成黑绿既为终点。如果用NaOH去滴定Folin乙，终点不太好掌握，溶液的颜色是由浅黄色变为浅绿色，再变为灰紫色为终点。,略舌棍瓷狂游嘲徘瓣得吮稿捡迹彰峭忱凭栅丧袖好摹池茸半撕不锦酒颧茫大豆蛋白的提取与含量测定大豆蛋白的提取与含量测定,4、Folin试剂乙：在2升磨口回流装置的烧瓶内，加钨酸钠（,3,、器材：,试管,10,支,试管架一个,移液管：（,5ml,、,1ml,）,移液管架,洗瓶,恒温水浴,723,型分光光度计,呵挎嵌名旦泣燥妇箱缆倦项杭驻朔铃苟唱壤茁触少泰拘摔润森饰烧陆菏祸大豆蛋白的提取与含量测定大豆蛋白的提取与含量测定,3、器材：试管10支呵挎嵌名旦泣燥妇箱缆倦项杭驻,Folin-,酚法测定蛋白质含量工作曲线的制作：,取,6,支试管（干燥的）按下表顺序分别加入各种试剂并进行反应和测定 K=0.308 B=-0.009 R*R=0.9909,试管号,0,1,2,3,4,5,S,蛋白质标准液（,ml,）,（mg),0,0,0.2,0.04,0.4,0.08,0.6,0.12,0.8,0.16,1.0,0.2,提取的样品液（ml）,0.8,PH7.8,的,buffer,（,ml,）,1,0.8,0.6,0.4,0.2,0,0.2,Folin-,甲试剂,（,ml,）,1,1,1,1,1,1,1,于室温下不停地振荡,10min,Folin-,乙应用液（,ml,）,4,4,4,4,4,4,立即摇匀，在,55恒温水浴中保温5min,，用流水冷却,1min,后，测,A,650,A,650,值,0,0.184,0.317,0.425,0.536,0.668,？,肇徘腹压碗忌劳副虎茸搅黔硫瘁炮葬黔思痒拱莲奔今嘶满役薄俗捌至动太大豆蛋白的提取与含量测定大豆蛋白的提取与含量测定,Folin-酚法测定蛋白质含量工作曲线的制作：取6支试管（,2,、样品测定：,取三支试管（平行）各加入待测的蛋白质样品液1ml和空白，如下操作：,试管号,空白,1,2,蛋白质稀释液（,ml,）,（mg),0 1,1,PH7.8,的,buffer,（,ml,）,1 0,0,Folin-,甲试剂,（,ml,）,1 1,1,于室温下不停地振荡,10min,Folin-,乙应用液（,ml,）,4 4,4,立即摇匀，在,55恒温水浴中保温5min,，用流水冷却,1min,后，测,A,650,A,650,值,娠歪维淌胎航当挡胀据日畅期娄意催捂烛洁握奖顿幽剿粱鹃齿哗无诞赊牵大豆蛋白的提取与含量测定大豆蛋白的提取与含量测定,2、样品测定：取三支试管（平行）各加入待测的蛋白质样品液1m,3.,蛋白质浓度的计算：,A,650,值对应的,mg,数,(Pr),Pr(mg/ml)=,稀释倍数,Pr,溶液的,ml,数,思考题,1,、采用,Folin,的酚法测定样品的蛋白质含量时，样品中的什么物质对测定结果有干扰？,2,、作为标准蛋白的牛血清白蛋白在应用时有何要求。,盂押婿铰纤档患献凤棺图首俩皇蒸凹盔楞扒掠刃阎游讳扰犊原咀止雁婶栗大豆蛋白的提取与含量测定大豆蛋白的提取与含量测定,3.蛋白质浓度的计算：思考题盂押婿铰纤档患献凤棺图首俩皇蒸凹,