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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,课题1 微生物的实验室培养,专题2 :微生物的培养与应用,微生物包括哪五类：,病毒,细菌,放线菌,真菌,原生动物,特点：构造都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞构造.且体内一般不含有叶绿素.不能进展光合作用.,原核生物界,原生生物界,真菌界,病毒界,微生物根底知识,细菌的外形与大小,细菌：,单细胞不分枝的原核微生物,。,细菌细胞,微小而透明,，通常用适当染料,染色,后显微镜观察,图1-1 常见的三种细菌典型形态,A.,球菌,B,.杆菌,C.,弧菌,细菌细胞由外向里依次有鞭毛、菌纤毛、荚膜、细胞壁、细胞膜、细胞质，细胞质中又有液泡、储存性颗粒、核质等。,细菌的构造,图1-3 细菌的构造,*细胞壁,构造特点：坚韧且有弹性,细胞壁有哪些功能？,固定细胞外形；,保护细胞免受外力的损伤；,阻拦大分子物质进人细胞,；,使细胞具有致病性及对,噬菌体的敏感性。,伤寒杆菌细胞壁中含毒素,芽孢,有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜如温度、水分适宜的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.,菌落：,单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态构造的子细胞群体，叫做菌落。,菌落是鉴定菌种的重要依据。,菌落,细菌的菌落特征因种而异,放线菌,1、构造：,单细胞原核,分支状的菌丝基内菌丝、气生菌丝,链霉素、土霉素、四环素、,氯霉素、红霉素、庆大霉素,微生物中发现了几千种抗生素，其中2/3是,由放线菌产生的,应用:,病毒的构造,病毒,SARS病毒、 禽流感病毒,朊病毒蛋白质病毒,2、病毒的增殖：,真菌,如图是酵母菌电子显微镜下的形态构造,酵母菌和霉菌,青霉,生殖,直立菌丝 营养菌丝,腐生生活,孢子生殖,细菌的营养类型,根据细菌所利用的能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。,自养菌autotroph,异养菌heterotroph,腐生菌,寄生菌 大局部病原菌,了解有关培养基的根底知识，进展无菌技术的操作，进展微生物的培养。,一、课题目标：,掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌和平板划线法等根本操作技术，熟练、标准地进展无菌操作，成功地培养微生物。,无菌技术的操作。,二、课题重点和难点：,三、技能目标：,一、根底知识：,一培养基,培养基培养液是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。,1按物理状态来分：培养基可分为固体培养基和液体培养基。其中固体培养基用于菌种别离、鉴定菌落等。,2按功能来分，可分为选择培养基和鉴别培养基。,3按成分来分，可分为天然培养基和合成培养基。,1.培养基的类型和用途,2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方,(参考教材附录内容),3.不管哪种培养基，一般都含有,水,、,碳源,、和,氮源,、,无机盐,、,等,营养物质，另外还需要满足微生物生长对,pH,、,特殊营养物质,例如:,生长因子(,即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶,),以及,氧气,、,二氧化碳,、,渗透压,等,的要求。,选择培养基,参加青霉素的培养基:,别离酵母菌、霉菌等真菌,参加高浓度食盐的培养基:,别离金黄色葡萄球菌,不加氮源的无氮培养基:,别离固氮菌,不加含碳有机物的无碳培养基:,别离自养型微生物,参加青霉素等抗生素的培养基:,别离导入了目的基因的受体细胞参加氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基:,别离杂交瘤细胞,根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。,合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。,优点：标准化生产，组分和含量相对固定;本钱低,缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。,合成培养基:,天然培养基有血清、血浆、和组织提取液如鸡胚和牛胚浸液。,优点：营养成分丰富，培养效果好,缺点：来源受限;成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析;易发生支原体污染;,天然培养基：,血清中含有：,多种蛋白质白蛋白、球蛋白、铁蛋白等,多种金属离子；,激素；,促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。,各种生长因子,转移蛋白,不明成分,人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基如血清。,液体培养基：,外表生长,均匀混浊生长,沉淀生长,固体培养基：菌落，菌苔,半固体培养基：,无动力 有动力(弥散),(是否运动),4.培养基的用途,液体培养基：增菌,固体培养基：纯化，增菌,半固体培养基：动力检测，保种,二无菌技术,1.无菌技术的概念,无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。无论是随后将要学到的倒平板、平板划线操作，还是平板稀释涂布法，其操作中的每一步都需要做到“无菌，即防止杂菌污染。只有熟练、标准地进展无菌操作，才可能成功地培养微生物。,消毒定义：,利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。区分为高程度消毒High-level Disinfection、中程度消毒Intermediate-level Disinfection、低程度消毒Low-level Disinfection三种方式。,2.消毒与灭菌的概念及两者的区别,2灭菌的定义：,以化学剂或物理方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而到达完全无菌之过程。 灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。,1、煮沸消毒法:100煮沸5-6min,2、巴氏消毒法：70-75 下煮30min或 80 下煮15min,3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进展皮肤消毒;氯气消毒水源,4、紫外线消毒,(1)消毒的方法：,3.常用的消毒与灭菌的方法,1、灼烧灭菌,2、干热灭菌：160-170 下加热1-2h。,3、高压蒸气灭菌：100kPa、121 下维持15-30min.,(2)灭菌的方法：,最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以根本保持培养基的营养成分不被破坏。,有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。,而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。,分类,定义,方法,灭菌法,杀灭一切微生物,物理法：热力、辐射、微波、等离子体,化学法：醛类、烷化剂,高效消毒法,杀灭一切致病微生物,紫外线、含氯剂、臭氧、复配剂等,中效消毒法,杀灭除芽孢外的致病微生物,超声波、碘类、醇类、酚类,低效消毒法,杀灭细菌繁殖体、亲脂病毒,单链季胺盐、双胍类、中草药、金属离子,无菌技术,3.微生物实验室培养的根本操作程序,1、器具的灭菌,2、培养基的配制,3、培养基的灭菌,4、倒平板,5、微生物接种,6、恒温箱中培养,7、菌种的保存,1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？,2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择适宜的方法。,1 培养细菌用的培养基与培养皿,2 玻棒、试管、烧瓶和吸管,3 实验操作者的双手,答：无菌技术还能有效防止操作者自身被微生物感染。,答：1、2需要灭菌；3需要消毒。,旁栏思考,三、实验操作,1.制备牛肉膏蛋白胨培养基用于培养细菌,1计算,、,称量,2溶化,3调pH：pH76,4过滤：这一步可以省去。,5分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。,6加塞,7包扎,操作步骤,8灭菌:,将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121，灭菌1530min。将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160170 下灭菌2h。,9倒平板:,待培养基冷却到50 左右时，在酒精灯附近倒平板。倒平板操作见课本2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种.,10无菌检查：,将灭菌的培养基放入37的温室中培养2448小时，以检查灭菌是否彻底。,倒平板技术,1.培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么方法来估计培养基的温度？,问题讨论,答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进展倒平板了。,2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？,答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。,3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？,4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？,答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基外表的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基外表的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。,答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。,2、纯化大肠杆菌,接种方法有：,平板划线法和稀释涂布平板法,平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基外表连续画线的操作,将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的外表.,在数次画线后,可以别离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落.,微生物的接种技术,问题讨论,1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作完毕时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？,答：操作的第一步灼烧接种环是为了防止接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线完毕后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线完毕后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，防止细菌污染环境和感染操作者。,2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进展划线？,答：以免接种环温度太高，杀死菌种。,3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开场划线？,答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开场，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。,问题讨论,涂布平板的所有操作都应在火焰附近进展。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进展无菌操作？,应从操作的各个细节保证“无菌。例如，酒精灯与培养皿的距离要适宜、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。,微生物的恒温培养,微生物的恒温培养,微生物的恒温培养,菌种的保存,1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4冰箱保存。,2、长期保存：甘油冷冻管藏法,四、课题成果评价,一培养基的制作是否合格,如果未接种的培养基在恒温箱中保温12 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否那么需要重新制备。,二接种操作是否符合无菌要求,如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小根本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，那么说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，那么说明接种过程中，无菌操作还未到达要求，需要分析原因，再次练习。,三是否进展了及时细致的观察与记录,培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。,本课题知识小结:,【典例解析】,例1关微生物营养物质的表达中，正确的选项是,A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量,C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量,解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差异，要针对微生物的具体情况分析。对于A、B选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于C选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；NaHCO3，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而NaCl那么只能提供无机盐。对于D选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。,答案：D,例2下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的选项是,A.防止杂菌污染 B.消灭杂菌,C.培养基和发酵设备都必须灭菌,D.灭菌必须在接种前,B,解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物杂菌，所以是正确的；B是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。,编号,成分,含量,粉状硫,10g,（NH,4,）,2,SO,4,0.4g,K,2,HPO,4,4.0g,MgSO,4,9.25g,FeSO,4,0.5g,CaCl,2,0.5g,H,2,O,100ml,例3右表是某微生物培养基成分，请据此答复：,1右表培养基可培养的微生物类型是 。,2假设不慎将过量NaCl参加培养基中。,如不想浪费此培养基，可再参加 .,自养型微生物,含碳有机物,3假设除去成分，参加CH2O，该培养基可用于培养 。,4表中营养成分共有 类。,5不管何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进展的是 。,6右表中各成分重量确定的原那么是 。,7假设右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是 。,固氮微生物,3,调整pH,依微生物的生长需要确定,琼脂或凝固剂,
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