莨菪烷类抗胆碱药物分析

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,莨菪烷类抗胆碱药物分析,第一节 结构与性质,莨菪烷类抗胆碱药物：是由,莨菪烷,衍生物的,氨基醇,与,不同有机酸,缩合成,酯,的生物碱。如：颠茄生物碱，古柯生物碱。,第一节 结构与性质,一、典型药物,第一节 结构与性质,第一节 结构与性质,二、主要理化性质,本类药物分子结构中具有酯的结构，易水解。,以阿托品为例，水解生成莨菪醇和莨菪,酸。,第一节 结构与性质,2. 碱性,阿托品和东莨菪碱的结构中，五元脂环上含有,叔胺氮原子,具有较强的,碱性,易与酸成盐。如,阿托品的pK,b1,。,硫酸阿托品 氢溴酸东莨菪碱,第一节 结构与性质,3. 旋光性,氢溴酸东莨菪碱结构中含有,不对称碳原子,，呈左旋体，比旋度为-24至-27，而阿托品结构中虽然也含有不对称碳原子，但因,外消旋化而为消旋体,，无旋光性利用此性质可区别阿托品与东莨菪碱。,硫酸阿托品 氢溴酸东莨菪碱,第二节 鉴别试验,一、托烷生物碱类的Vital鉴别反应,二、与硫酸-重铬酸钾的反应,三、与生物碱显色剂或沉淀剂的反应,四、光谱鉴别法,五、色谱法,六、硫酸盐与溴化物的反应,第二节 鉴别试验,一、托烷生物碱类的Vital鉴别反应,【,原理,】,托烷生物碱,水解,莨菪酸,发烟硝酸,三硝基衍生物,KOH（C,2,H,5,OH,）,固体,KOH,有色的醌型产物,深紫色,第二节 鉴别试验,【反应过程】,第二节 鉴别试验,【示例】,ChP氢溴酸山莨菪碱的鉴别 取供试品10mg，加发烟硝酸5滴，置水浴上蒸干，黄色的残渣，放冷，加乙醇23滴，加固体氢氧化粒，即显,深紫色,。,第二节 鉴别试验,二、与硫酸-重铬酸钾的反应,【原理】,本类药物水解后，生成的,莨菪酸,，可与硫酸和重铬 酸钾在加热的条件下，发生氧化反应，生成,苯甲醛,，而逸出,类似苦杏仁的臭味,。,其反应式为：,苦杏仁的臭味,第二节 鉴别试验,三、与生物碱显色剂或沉淀剂的反应,【原理】,生物碱在,酸性（碱性条件下试剂本身会出现沉淀现象）,水溶液中可与重金属盐类或大分子酸类等沉淀试剂反应，生产难溶性的盐、复盐、或配合物沉淀。但不同的沉淀试剂与生物碱反应的灵敏度不同。,【示例】,阿托品 + 氯化汞醇试液,黄色沉淀,东莨菪碱+氯化汞醇试液 白色复盐沉淀,第二节 鉴别试验,四、光谱鉴别法（UV、IR）,UV:,一般通过比较药物的,max、min,或,吸收 光谱,的一致性来进行鉴别以及,吸光度,或,吸收系数的比值,来鉴别。,IR:,鉴别该类药物的原料药。,五、色谱法（TLC、HPLC、GC ）,一般用于已知生物碱的鉴别 。TCL法最常用，但应注意，若用硅胶吸附剂，需在流动相或固定性中,加碱,，使生物碱游离或中和硅胶表面的弱酸性，以,防止拖尾,。,第二节 鉴别试验,【示例】,Ch.P氢溴酸山莨菪碱注射液TLC鉴别,取本品1ml，置水浴上蒸干。取残渣与消旋山莨菪,碱对照品，分别加甲醇制成10mg /ml的溶液。照薄层,色谱法试验，吸取上述两种溶液各10l，分别点于同,一氧化铝（中性，活度-级）薄层板上，以三氯,甲烷-无水乙醇（955）为展开剂，展开，晾干，喷,以稀碘化铋钾试液-碘化钾碘试液（11）。供试品溶,液所显主斑点位置和颜色，应与对照品溶液的主斑点,相同。,第二节 鉴别试验,六、硫酸盐与溴化物的反应,【原理】,通过加沉淀试剂如硝酸银等生成溴化银沉淀或加入氯试剂生成溴溶于三氯甲烷而显色。,【示例】,氢溴酸东莨菪碱+硝酸银溶液 AgBr ( 白色沉淀),氢溴酸东莨菪碱+氯试液 Br,2,黄色,或,棕红色,第三节 特殊杂志与检查,一、氢溴酸东莨菪碱中有关物质的检查,根据其制备工艺，本品在生产和贮藏过程中可能引入的有关物质可通过酸度、其他生物碱和易氧化物检查进行控制,第三节 特殊杂志与检查,一、氢溴酸东莨菪碱中有关物质的检查,1. 酸度,东莨菪碱碱性很弱，对石蕊试纸几乎不显碱性反应。,氢溴酸东莨菪碱为,强酸弱碱,形成的盐，通过其5%水溶,液的pH值为4.05.5，来控制本品中的酸性杂质。,2. 易氧化物,可能杂质为阿扑东莨菪碱、及其它含有,不饱和双键,的有机物，他们的紫外吸收波长会红移、可使高锰酸钾溶液褪色,第三节 特殊杂志与检查,一、氢溴酸东莨菪碱中有关物质的检查,.,因东莨菪碱在碱性条件下可以水解，生成东莨菪醇和莨菪酸，前者在水中溶解，后者生成钾盐在水中也能溶解，故可使瞬即发生的混浊消失。,第三节 特殊杂志与检查,一、氢溴酸东莨菪碱中有关物质的检查,其他类生物碱还常有TLC和HPLC法检查。期杂质限量判断主要有标准品对照法、自身稀释对照法等方法。,【示例】,BP采用TLC自身稀释对照法检查氢溴酸东莨菪碱中其他生物碱和分解产物：取本品0.2g，加甲醇溶解并稀释至10ml，为供试品溶液；精密量取1ml，加甲醇稀释至100ml，为对照液（a）；取对照液（a）5ml，加甲醇稀释至10ml，为对照液（b）。照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以浓氨水-甲醇-丙酮-三氯甲烷（2：10:30:50）为展开剂，展开，晾干，于105干燥15分钟，冷却后，喷碘化铋钾试液显色。供试品溶液除主斑点及起点处的黄色斑点外，其他杂质斑点的颜色与对照液（a）的主斑点比较不得更深（1.0），比对照液（b）主斑点颜色更深的杂质斑点数不得多于1个（0.5%）。,第三节 特殊杂志与检查,二、硫酸阿托品中有关物质的检查,硫酸阿托品为,消旋体,，,无旋光性,，而莨菪碱为,左旋体,，可以利用旋光性对莨菪碱杂质进行检查 。 ChP用HPLC法检查其中有关物质，通过峰面积的比值及保留时间来控制杂质限度。,第四节 含量测定,一、酸性染料比色法,（,一）基本原理,（二）影响因素,（三）应用示例,二、非水溶液滴定法,三、高效液相色谱法,第四节 含量测定,一、酸性染料比色法,（,一）基本原理,该法是利用碱性药物，在一定,pH,条件下，可与某些酸性染料结合显色，随后用分光光度法测定药物含量的方法。,该法样品用量少，灵敏度高,适用于少量供试品、尤其是小剂量药物制剂的定量分析,具有一定的专属性和准确度,第四节 含量测定,一、酸性染料比色法,HIn、In,-,不溶于有机相,显色,第四节 含量测定,一、酸性染料比色法,（二）影响因素,如果水相pH值,过低,，酸性染料几乎仍以分子状态存在，而不能离解成In-；,如果水相pH值,过高,，则生物碱几乎全部以游离碱的形式（即B）存在，（BH,+,In）浓度减小，有机溶剂萃取的不是离子对，而是生物碱本身。,故应选择一个水相的最适pH值。一般根据药物和酸性染料的pK值以及两相中的分配系数而定。,第四节 含量测定,一、酸性染料比色法,（,二）影响因素,常用：溴甲酚绿(BCG)、溴麝香草酚蓝（BTB）、溴甲酚紫 （BCP）、溴酚兰(BPB)、甲基橙等。,中国药典中托烷类药物采用溴甲酚绿作酸性染料。,酸性染料的浓度对测定结果影响不大,，只要有足够的量即可。,第四节 含量测定,一、酸性染料比色法,（二）影响因素,对离子对的萃取效率高、能与离子对形成氢键、不与或极少与水混溶的试剂。,常用的有机溶剂有：,CHCl3,、,CH2Cl2,、苯、甲苯等,第四节 含量测定,一、酸性染料比色法,（二）影响因素,水相有中有过量色酸性染料，酸性染料可引入，有色，影响比色测定；且水分会使有机层浑浊，也影响比色测定。所以应严防水分的混入。 有机层可加入无水硫酸钠等脱水或经干燥滤纸、脱脂棉滤过。,在加入供试品前，将缓冲液与酸性染料的混合液先用所选 的有机溶剂萃取，弃去有色杂质。,第四节 含量测定,一、酸性染料比色法,（三）应用示例,利用本法可对紫外吸收弱、标示量低的有机碱性（生物碱）药物制剂的含量或含量均匀度进行测量。 如：硫酸阿托品片、氢溴酸东莨菪碱片、中药材和中成药中的生物碱成分等。,第四节 含量测定,一、酸性染料比色法,【示例】,硫酸阿托品片的含量测定精密量取对照品溶液和供试品溶液各2ml，分别置预先精密加入三氯甲烷10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚绿溶液4ml，振摇提取后，静置使分层；分取三氯甲烷液，照紫外-可见分光光度法，在420nm波长处分别测定吸光度，计算，即得。,第四节 含量测定,二、非水溶液滴定法,硫酸是二元酸，在水溶液中能完成二级解离，生成SO42-,但在非水介质中，只显示一元酸解离为HSO4-，即只供给个,H+，所以硫酸盐类药物在冰醋酸中，只能滴定至硫酸氢盐，,因此可以用高氯酸滴定液直接滴定。,【示例】,硫酸阿托品测定,直接滴定，反应摩尔比为,11,溶剂：冰醋酸、醋酐,指示剂：结晶紫,反应式：,(BH+)2SO42- + HClO4 ,(BH+)ClO4-,+,(BH+)HSO4,第四节 含量测定,三、高效液相色谱法,离子对色谱Ion-Pair HPLC,【应用范围】,在反相液相色谱条件下呈离子状态的药物，如有机碱类、有机酸类等,色谱保留常常较弱，从而影响到它们的含量或有关物质HPLC测定的专属性和准确度。,调整流动相的pH，抑制它们的解离，以改变色谱保留行为，但并不都能获得满意的结果。,采用离子对高效液相色谱法，可以改善它们的色谱保留行为，并实现准确测定 。,第四节 含量测定,三、高效液相色谱法,【原理】,将待测组份的反离子加入流动相中，与呈离解状态的药物作用，生成可逆的离子对化合物,【范围】,测定在反相色谱条件下呈离子状态的药物，如有机碱、有机酸类药物,【离子对试剂的选择】,分析有机碱，主要采用烷基磺酸盐阴离子对试剂（如戊烷磺酸钠、庚烷磺酸钠）或其他盐类,分析有机酸，主要采用季铵盐阳离子对试剂（四丁基氢氧化铵、四丁基溴化铵等）,第四节 含量测定,三、高效液相色谱法,【影响离子对形成的条件】,离子对的种类、性质和浓度,例：阴离子对试剂的非极性部分越大，形成的离子对分配 系数越大，保留时间越长（十二烷基磺酸钠庚烷磺酸钠 戊烷磺酸钠）,流动相的组成、pH及离子强度,流动相一般呈酸性，以利于有机碱药物的离解；水相为具有适宜pH的缓冲溶液,离子对试剂的浓度大约为：3 10 mmol/L,第四节 含量测定,三、高效液相色谱法,离子对色谱Ion-Pair HPLC,【应用范围】,在反相液相色谱条件下呈离子状态的药物，如有机碱类、有机酸类等,色谱保留常常较弱，从而影响到它们的含量或有关物质HPLC测定的专属性和准确度。,调整流动相的pH，抑制它们的解离，以改变色谱保留行为，但并不都能获得满意的结果。,采用离子对高效液相色谱法，可以改善它们的色谱保留行为，并实现准确测定,Thank you for watching,谢谢,