项目四 发酵工业的无菌操作

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2014/11/11,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2014/11/11,#,项目四发酵工业的无菌操作,发酵工业污染的防治策略,发酵工业无菌操作的基本概念,发酵工业的无菌操作技术,发酵培养基及设备管道灭菌,空气除菌,一、发酵工业污染的防治策略,什,么是染菌？,即,“,杂菌污染,”，是,指在发酵培养中侵入了除菌种外，有碍生产的其他微生物。,（一）污染的,危害,杂菌大量消耗培养基中的营养物质，使生产菌的生产能力下降,杂,菌产生的代谢产物，增加了发酵液中杂质类型或改变了发酵液理化性质，从而导致增加了下游产物分离纯化的难度，造成产物收率降低或产品质量下降。（降低发酵,产率,、提取,得率,、产品,质量,）,杂,菌代谢会改变培养体系的,pH,，使发酵过程异常。,杂,菌的代谢可能会降解产物，使产物得率降低。,若细菌的培养过程中被噬菌体污染，细菌细胞会破裂，造成发酵失败。,1.,染菌对不同发酵过程的影响,A,细菌,谷氨酸：发酵周期短，培养基不太丰富，较少染杂菌，但噬菌体威胁大。,肌苷：缺陷型生产菌，培养基丰富，易染菌，营养成分迅速被消耗，严重抑制菌生长和合成代谢产物。,（,1）染菌对不同菌种发酵的影响,B.霉菌,PenG：青霉素水解酶上升，PenG迅速破坏，发酵一无所获。柠檬酸：pH2.0，不易染菌，主要防止前期染菌。,C. 酵母菌,:,易污染细菌以及野生酵母菌,D. 疫苗,：,无论污染的是活菌、死菌或内外毒素，都应全部废弃。,2024/9/28,（2）染菌种类对发酵的影响,2024/9/28,青霉素,：怕染细短产气杆菌,链霉素：,怕染细短杆菌、假单孢杆菌和产气杆菌,四环素：,怕染双球菌、芽孢杆菌和荚膜杆菌,柠檬酸：,怕染青霉菌,肌苷（酸）：,怕染芽孢杆菌,谷氨酸：,怕染噬菌体，易造成连续污染,2.,染菌发生的不同时期对发酵的影响,种子,培养,期,发酵,前期,发酵,中期,发酵,后期,（,1,）种子培养期染菌,菌体浓度低、培养基营养丰富，,较易染菌,，应严格控制。,若将污染的种子带入发酵罐，则损失更大，因此一经发现，应,立即灭菌丢弃,，并对种子罐、管道等进行,仔细检查和彻底灭菌,。,采用,备用菌种,或以无污染的适当菌龄的发酵罐内的,发酵液作为种子,，接入新鲜培养基中进行发酵。,2.,染菌发生的不同时期对发酵的影响,（,2,）发酵前期染菌,发酵前期,易染菌,，且危害很大，需特别注意防止,一旦发现染菌，如原料营养还比较丰富，则进行,重新灭菌,、,接种发酵,；如已消耗较多营养物质，则放掉部分料液、,补充新鲜培养基,，重新灭菌、接种发,酵。,2.,染菌发生的不同时期对发酵的影响,（,3,）发酵中期染菌,中期染菌会造成,发酵异常,，产物,产量下降,，应尽力做到,早发现、快处理,。,可通过,加入,一部分,发酵旺盛,的,培养料,，调节通风、温度、,pH,等措施挽救，如发酵单位到达一定水平则可,提前放罐,。,2.,染菌发生的不同时期对发酵的影响,（,4,）发酵后期染菌,后期染菌对抗生素、柠檬酸发酵影响不大，但对氨基酸、核苷酸等破坏较大。,发酵后期如,染菌量不多,，可,继续发酵,。如,染菌严重,，破坏性较大，可,提前放罐,。,2.,染菌发生的不同时期对发酵的影响,3.,染,菌程度对发酵的影响,发酵罐中的,杂菌数量越多,，即染菌程度越大，则对发酵的,危害越大,。,如生产菌大量繁殖后，发酵物中含少量杂菌，如每升发酵液中有,1-2,个杂菌，一般对发酵没有什么影响。,4.,染菌对产物提取和产品质量的影响,对过滤的影响,染菌后特别是污染细菌后，发酵液一般发粘，导致,过滤困难,。,可采取加热、添加助滤剂等措施，或加絮凝剂使蛋白质沉淀，有利于过滤。,4.,染菌对产物提取和产品质量的影响,对提炼与产品质量的影响,染菌发酵液中含有较多水溶性蛋白和其它杂质。,增加提炼难度,，增加产物提取成本，,降低产物纯度,。,4.,染菌对产物提取和产品质量的影响,二、杂菌污染的防治,某药厂链霉素发酵染菌原因分析,1.,污染杂菌的检测,检,查杂菌的方法，要求准确可靠和快速，这样才能在短时间内获得效果，主要方法有,：,显微镜检查,平板划线检查,肉汤培养检查,发酵过程异常观察,前,3,种检查法未发现染菌，还不能肯定未被染菌；,原因是以上检查法只能检查杂菌浓度较大的染菌情况（,1,个,/ml,）,发,酵过程的异常现象,菌体生长差；,pH,值过高或过低；,溶解氧水平异常；,泡沫过多；,菌体浓度过高或过低；,CO,2,排放异常,溶,解氧水平异常变化显示染菌,发酵时间,溶氧浓度,正常发酵,污染噬菌体,发酵时间,溶氧浓度,正常发酵,污染好气性杂菌,污染嫌气性杂菌,CO,2,异常显示染菌,工艺一定，尾气中,CO,2,量变化有一定规律,污染杂菌,，糖耗加快，尾气中,CO,2,量增加,污染噬菌体,，糖耗减慢，尾气中,CO,2,量减少,2.,污染噬菌体的检测,噬菌体是什么？,噬菌体是病毒的一种，是一种极微小的生物，体积是细菌的,1/1000,左右，它可以通过细菌过滤器，只有在电子显微镜下才能看到。,26,消除潜在的污染隐患,-1,涉及菌体相关的操作要尽可能在生物安全柜中进行；,在菌体培养过程中，尽量不要打开瓶口。如果实在需要打开瓶口的话，必需在无菌的环境下操作。,生物安全柜和超净台应注意清洁和消毒；每年更换,HEPA,过滤膜。,27,使用胶头、移液器、电动移液器吸取溶液后，不能水平放置，以防液体进入。,一旦液体进入要及时更换滤膜，并做好消毒措施。,消除潜在的污染隐患,-2,28,消除潜在的污染隐患,-3,普通大肠杆菌的转化及划线后平板建议用石蜡膜完全密封后培养和放置。,29,消除潜在的污染隐患,-4,菌液培养时将盖拧紧,30,消除潜在的污染隐患,-5,菌体相关垃圾处理：,生物安全柜或处理菌体的超净台应配备密封垃圾桶，以防止污染源外泄；,带有菌体的垃圾要做到当日灭菌；,如果当日不能灭菌，应使用垃圾袋密封后放置。,31,消除潜在的污染隐患,-6,分光光度计周围：,菌体相关的废液建议收集到专门密闭容器，每日灭菌；,盛放过菌液的比色皿应注意清洗，清洗液同上处理。,32,消除潜在的污染隐患,-7,高压灭菌后的枪头，务必烘干使用,33,消除潜在的污染隐患,-8,玻璃器皿特别是菌体培养用器具使用前用铝箔包裹后，在,180,干热灭菌。,34,消除潜在的污染隐患,-9,培养装置应经常清洗消毒；,水浴摇床中的水要经常更换，长时间不用要将水排空，擦拭干净放置。,35,消除潜在的污染隐患,-10,在培养时最好使用无菌的棉塞（不要使用铝箔覆盖培养瓶）；不要使用潮湿或脏的瓶塞。,灭菌时,培养时,36,消除潜在的污染隐患,-11,接触菌体频率高，空隙多容易隐匿菌体的器具要经常清洗消毒。,Stands,Centrifuge & its rotor,37,消除潜在的污染隐患,-12,脏的移液器,反复使用的电击槽,与噬菌体污染的培养液接触过的电极或,buffer,3.,污染原因的分析,染菌原因分析就是总结染菌的教训，防范于未然。,主要染菌原因：,种子带菌, 无菌空气带菌, 设备渗漏, 灭菌不彻底,操作失误,技术管理不善,（,1,）,染菌的时间分析,种子培养阶段：种子，灭菌，操作；,发酵前期：种子，灭菌，操作；,发酵后期：空气，补料，设备渗漏，泡沫,（,2,）,染菌的杂菌种类分析：,污染耐热芽孢杆菌,：培养基或设备灭菌不彻底；,污染不耐热杂菌：,种子带菌、空气除菌不彻底、设备渗漏或操作问题；,污染浅绿色菌落杂菌：,冷却盘管渗漏引起；,污染霉菌：,无菌室灭菌不彻底，或操作问题；,污染酵母菌：,糖液灭菌不彻底。,（,3,）,染菌的规模分析,大批量发酵罐染菌：种子、空气；,前期：种子带菌，灭菌问题；,中,后期：空气带菌；,部分发酵罐染菌：,个别发酵罐连续染菌：设备渗漏,（,1,）种子带菌及其防止,原,因,：,菌,种培养或保藏过程染菌、培养基及用具灭菌不彻底、菌种移接过程污,染,措施：,严格控制无菌室污染，严格,无菌操作,；,种子保存管的,棉花塞,应有一定的紧密度，且有一定的长度；,培养和保存,温度,不宜有太大变化；,菌种培养基或器具进行严格的,灭菌,处理 ；,每一级种子培养物均应经严格,检查,，确保未受污染后才能使,用,4.,杂菌污染途径及预防,（,2,）空气带菌及其防止,空气的净化,工艺和设备,的设计,过滤介质,的选用和装填,过滤介质的,灭菌和管理,等,（,3,）培养基和设备灭菌不彻底染菌及防止,原料,含较多菌,未充分排除罐内,空气,灭菌,温度、时间,未控制好,设备、管道存在,死角,原料性状：淀粉质原料，升温过快或混合不均匀，易结块，团块中包埋的活菌不易杀灭；可升温前搅拌和加淀粉酶。,实罐灭菌时未充分排除罐内空气：造成假压，升温时，应打开排气等阀门放气。,连续灭菌时，蒸汽压力波动大，培养基未达到灭 菌温度，导致灭菌不彻底。,D.,设备和管道存在“死角”,死角：由于操作、设备结构、安装或人为造成的屏障等原因，引起蒸汽不能有效到达或不能充分到达预定应该到达的局部灭菌部位，从而不能达到彻底灭菌的要求。,常见的设备、管道“死角”,发酵罐的“死角”：不锈钢衬里破裂造成死角，发酵罐罐底脓疱状积垢,。,2024/9/28,法兰连接不当造成的“死角”,2024/9/28,灭菌时蒸汽不易通达的“死角”及其消除方法,（,4,）设备渗漏染菌及防止,原因,发酵罐、补糖罐、冷却盘管、管道阀门等，因加工制作不良或遭受腐蚀等原因而形成,微小漏孔,后发生,渗漏染菌,。,措施,选用优质材料、科学合理加工、经常检查。,（,5,）操作失误染菌及防止,淀粉原料采用实罐灭菌，,大颗粒,应先,筛去,，再搅拌均匀，加入一定量淀粉酶,液化或糖化后灭菌,。,在灭菌升温时，要打开排气阀门，,排尽罐内冷空气,。,严防泡沫升顶,，可添加消泡剂防止泡沫的大量产生。,严格,控制灭菌温度,，避免蒸汽压力的波动过大。,发酵过程越来越多采用自动控制，,控制仪器,如用化学试剂,灭菌,，一定要,彻底,。,（,6,）噬菌体污染及其防治,染噬菌体对发酵的影响,发酵过程如受噬菌体侵染，一般发生溶菌，随之出现发酵迟缓或停止，而且往往会反复连续感染，使生产无法进行，甚至使种子全部丧失，对发酵威胁很大。,噬菌体污染根本原因,生产中把,活菌体排放到环境中,，造成了自然界中相应噬菌体大量增殖。,这些噬菌体随风沙尘土和空气流动到处传播，有可能潜入生产的各个环节，尤其是通过空气系统进入种子室、种子罐、发酵罐。,噬菌体的防治,严禁活菌体排放,，切断噬菌体的“根源”；,净化生产环境,，消灭污染源；,保证纯种培养,，严防种子本身带噬菌体，特别是溶源性,噬菌体；,轮换使用菌种,或,使用抗性菌株,。,2,、染菌的处理,染菌后处理,染菌后必须对所有相关原料、仪器设备、管道等进行,彻底灭菌,。,尽量,查明染菌原因,，以免重复污染。,3.,污染原因分析,主要原因：,种子带菌, 无菌空气带菌, 设备渗漏, 灭菌不彻底,操作失误,技术管理不善,从污染时间看：早期污染可能与接种操作不当有关；后期污染可能与及中间补料有关。,从杂菌种类看：,耐热芽孢杆菌：与有关,球菌、无芽孢杆菌：与 有关,浅绿色菌落的杂菌：与水有关，即冷却盘管渗漏,霉菌：与有关，即无菌室灭菌不彻底或操作问题,酵母菌：糖液灭菌不彻底或放置时间较长,2024/9/28,从染菌幅度看：各个发酵罐或多数发酵罐染菌，且所污染的是同一种杂菌，一般是空气系统问题，若个别罐连续染菌，一般是设备问题。,2024/9/28,1,）从污染杂菌的种类分析,污染耐热芽孢杆菌：培养基或设备灭菌不彻底；,污染不耐热杂菌：种子带菌、空气除菌不彻底、设备渗漏或操作问题；,污染浅绿色菌落杂菌：冷却盘管渗漏引起；,污染霉菌：无菌室灭菌不彻底，或操作问题；,污染酵母菌：糖液灭菌不彻底。,2,）从污染时间分析,发酵前期染菌：种子带菌、培养基或设备灭菌不彻底、操作不当或空气带菌；,发酵后期染菌：中间补料污染、设备渗漏或操作问题。,3,）从染菌程度分析,多个罐染菌：种子带菌、空气系统问题；,个别罐染菌：设备问题、操作不当。,采取哪些措施能够保持无菌发酵？,物料、培养基、中间补料要灭菌；,发酵设备及辅助设备（空气过滤装置、各种发酵罐进出口连接装置）和管道要灭菌；,好气发酵通入的空气要除菌；,种子无污染；接种无菌操作过关；,为了保持发酵的长期无菌状态，需维持正压。,2024/9/28,三、发酵工业的无菌操作技术,加热灭菌法,1,辐射灭菌法,2,化学药品灭菌法,3,过滤除菌法,4,二、发酵工业无菌操作的基本概念,灭菌：,用物理或化学的方法杀死物料或设备中所有的微生物。,消毒：,用物理或化学的方法杀死空气、地表以及容器和器具表面的微生物。,防腐,:,用物理或化学方法杀死或抑制微生物的生长和繁殖,。,二、发酵工业无菌操作的基本概念,消毒与灭菌的区别,消毒概念来自于卫生工作，仅仅是杀灭生物体或非生物体表面的微生物，而灭菌则是杀灭所有的生命体。因此，,消毒一般只能杀死营养细胞，不能杀死细胞芽孢及真菌孢子，适合于发酵车间的环境和设备、器具的无菌处理。灭菌则适合培养基等物料的无菌处理。,（一）加热灭菌法,1.,干热空气灭菌法,在干燥环境（干热空气）进行灭菌的技术。,灭菌温度,/C,170,160,150,140,121,灭菌时间,/min,60,120,150,180,过夜,表,1,干热空气灭菌需要的温度和时间,适用于玻璃、陶瓷、金属等制品。,2.,湿热灭菌法,湿热灭菌法是指用饱和水蒸气、沸水或流通蒸汽进行灭菌的方法，以高温高压水蒸气为介质，由于蒸汽潜热大，穿透力强，容易使蛋白质变性或凝固，最终导致微生物的死亡，所以该法的灭菌效率比干热灭菌法高，,是药物制剂生产过程中最常用的灭菌方法,。,湿热灭菌法的类型,煮沸灭菌法,巴氏消毒法,间歇灭菌法,高压蒸气法,（,1,）煮沸灭菌法,营养细胞,水中煮沸,1520min,；,芽孢,水中煮沸,12h,。,适用于一般食品及器材的灭菌。,（,2,）巴氏消毒法,亦称低温消毒法，冷杀菌法，是一种利用较低的温度既可杀死病菌又能保持物品中营养物质风味不变的消毒法。,70,，保持,1530min,，杀死病原菌和部分微生物营养体。,巴氏杀菌机,（,3,）间歇灭菌法,利用反复多次的流通蒸汽加热，杀灭所有微生物，包括芽胞。方法同流通蒸汽灭菌法，但要重复,3,次以上，每次间歇是将要灭菌的物体放到,37,孵箱过夜，目的是使芽胞发育成繁殖体。若被灭菌物不耐,100,高温，可将温度降至,75,80,，加热延长为,30,60,分钟，并增加次数。适用于不耐高热的含糖或牛奶的培养基。,4.,高压蒸汽法,适用行业：,发酵工业、医疗保健、食品检测、微生物实验室等。,适用范围：,培养基、发酵罐以及附属设备和管道、玻璃器皿、工作服等的灭菌。,方法：,121,，,103.42kPa,，,1520min,生产中使用高压蒸汽灭菌锅的型号很多：,手提式压力灭菌器,立式压力灭菌器,卧式蒸气高压灭菌锅,注意事项,灭菌包不宜过大过紧，灭菌器内物品的放置总量不应超过灭菌器柜室容积的,85%,。各包之间留有空隙，以便于蒸汽流通、渗入包裹中央，排气时蒸汽迅速排出，保持物品干燥。,盛装物品的容器应有孔，若无孔，应将容器盖打开。,布类物品放在金属、搪瓷类物品之上。,灭菌锅密闭前，应将冷空气充分排空。,随时观察压力及温度情况。,注意安全操作，每次灭菌前，应检查灭菌器是否处于良好的工作状态。,灭菌完毕后减压不要过猛，压力表回归“,0”,位后才可打开盖或门。,3.,火焰灭菌法,采用火焰直接灼烧灭菌。,适用范围：接种针、试管口、三角瓶口等。,（二）射线灭菌,射线灭菌是利用高能量的电磁辐射和微粒辐射来杀死微生物。,常用的射线是,紫外线,和,电离辐射,。,1.紫外线（,ultraviolet,，,UV,）：,波长136,nm,3,9,0nm,的紫外线（包括日光中的紫外线）具有杀菌作用，以,260nm,左右的最强，与嘌呤和嘧啶的吸收光谱高峰一致。紫外线可使,DNA,链上相邻的两个胸腺嘧啶共价结合而形成二聚体，阻碍,DNA,正常转录，导致微生物的变异或死亡。,紫外线穿透力较弱，普通玻璃、纸张、尘埃、水蒸汽等均能阻档紫外线，一般用于,手术室、病房、实验室的空气消毒,。紫外线可损伤皮肤和角膜，应注意防护。,2024/9/28,2024/9/28,2.电离辐射：,包括,射线、,X,射线和加速电子等，对各种微生物均有致死作用，细菌繁殖体对射线比芽胞要敏感。其机制是直接或者通过产生游离基，破坏,DNA,分子的共价键。辐射源常用同位素钴,60,，用于,一次性医用塑料制品批量灭菌,。,2024/9/28,（三）化学药品灭菌法,常用试剂有,过氧化氢、过氧乙酸、环氧乙烷、卤素、甲醛、高锰酸钾、季铵盐（如新洁尔灭）、臭氧,等。,些物质易与微生物细胞中的一些成分产生化学反应，如使蛋白质变性、酶类失活、破坏细胞膜通透性而杀灭微生物。,2024/9/28,由于化学试剂也会与培养基中的一些成分作用，而且加入培养基后不易去除，它,不能用于培养基的灭菌,，但染菌后的培养基可用化学药剂处理。,常见的化学灭菌剂（见表,4-4,）,2024/9/28,来苏尔（Lysol）为甲酚、植物油、氢氧化钠的皂化液（含甲酚50%）。无色或黄色液体。,使用方法和范围：,12%溶液用于手消毒（也可用于处理染菌桌面），,35%溶液用于器械物品消毒，,510%溶液用于环境、排泄物的消毒。,对一般致病菌包括抗酸菌杀菌效果确实，对芽孢则需高浓度长时间才有杀菌作用。,2024/9/28,新洁尔灭，别名为苯扎溴铵，为溴化二甲基苄基烃铵的混合物。创面消毒用0.01%溶液，皮肤及粘膜消毒用0.1%溶液，手术前洗手用0.05%0.1%溶液浸泡5分钟；手术器械消毒用0.1%溶液(内加0.5%亚硝酸钠以防生锈)煮沸15分钟,再浸泡30分钟。,2024/9/28,（四）过滤除菌,过滤除菌法是利用过滤方法阻截微生物以达到除菌的目的。,适用于,热敏性物质和空气,的除菌。,是将液体或气体用微孔薄膜过滤，使大于孔径的细菌等微生物颗粒阻留，从而达到除菌目的。用于遇热容易变性而失效的试剂或培养液。,2024/9/28,四、发酵培养基及设备管道灭菌,工业上对培养基、发酵设备、管道、阀门、流加物料等都采用,蒸汽灭菌,。,（一）湿热灭菌,湿热灭菌是指利用饱和蒸汽灭菌的方法。,原理,：借助蒸汽释放的热能，尤其是饱和蒸汽冷凝时瞬间内释放的大量潜热，可使微生物菌体细胞温度迅速升高，促使蛋白质、酶和核酸分子内部的化学键（尤其是氢键）受到破坏二引起不可逆变性，造成微生物死亡。,适用范围,：培养基、设备、管路及阀门的灭菌。,优点,：灭菌效果可靠、彻底；蒸汽来源容易，本身无毒，操作方便、费用低，易管理等。,缺点,：对营养成分的破坏较强。,葡萄糖灭菌温度过高会产生糠醛，培养基颜色变深，糠醛对菌体生长不利。如果培养基中的葡萄糖浓度很低，就不用单独灭菌，如果葡萄糖很高，培养条件又很严格，就单独灭菌。量少的话过滤，量多的话，实验室一般115度灭菌15min足够了，工厂一般115度2030min。,影响灭菌的因素：,灭菌时间；,灭菌温度；,其他因素（如培养基成分、培养基的物理状态、pH值、搅拌、泡沫等）,发酵工业上最,常,用的灭菌条件：,121C,，,30min,。,相关概念：,致死温度：,杀死微生物的极限温度称为致死温度。,致死时间：,在致死温度下，杀死全部微生物所需要的时间称为致死时间。,一般认为灭菌彻底与否的是以,能否杀死芽孢细菌,为标准。,（二）分批灭菌,定义,：培养基的分批发酵是指将配制好的,培养基,放在,发酵罐,或其他贮存容器中，通入,蒸汽,，将培养基及所用设备一起灭菌的操作过程，也称为,间歇灭菌或实罐灭菌（实消）,。,适用范围,：中小型发酵罐,优点：,设备要求简单，无需另外设置加热冷却装置；操作要求低，适合手动操作；适合于小规模生产；适合于固体物质含量大的培养基灭菌。,缺点：,升温降温较慢，培养基营养物质损失较多，灭菌后培养基质量会下降；灭菌过程需反复进行加热和冷却，能耗较高；间歇式操作，发酵罐利用率较低；不适合于大规模生产的培养基灭菌。,丰原生化,操作步骤,配料罐,空气分过滤器灭菌；,配制培养基，准备灭菌；,通入蒸汽，,升温,；,灭菌：121C，0.1MPa，,保温,30min左右；,保温结束，,降温,。,条件的确定,分批灭菌包括,升温,、,保温,和,降温,三个阶段。灭菌主要是在,保温,过程中实现的。,注意事项,培养基的配置应注意计量准确，所配置的培养基体积应扣除种子液的体积和灭菌过程冷凝水的预留体积；,实消前，先空消，并校正pH、DO等传感电极。,加热和保温过程中，要做到均一灭菌；,冷却时，注意保压。,（三）连续灭菌,定义,：连续灭菌是指将配制好的培养基在向发酵罐,输送,的,同时进行加热、保温和冷却,而进行灭菌的方法，也称为连消。,优点,：高温（,130160C,），快速（,58min,），发酵设备利用率高。,缺点：,设备投入多、要求高，对蒸汽要求高；操作烦琐；染菌机会多；不适合大量固体物料的灭菌。,连消塔加热连续灭菌,喷射加热器加热连续灭菌,薄板换热器加热连续灭菌,操作流程,操作流程,速度0.1m/min，,温度：132C,时间：2030s,保温维持825min,连消塔加热连续灭菌流程图,板式杀菌机,条件的确定,罐式保温设备：,管式保温设备：根据实际情况计算。,灭菌温度（,C,）,130,140,灭菌时间（,min,）,10,34,注意事项,加热器、维持器、冷却器等应先清洗和灭菌；发酵罐空消；,培养基要先预热；,热敏性物料和非热敏性物料分消。,连续灭菌和分批灭菌的比较,大规模生产中连续灭菌更具优势；但当培养基中含有固体颗粒或培养基有较多泡沫时，采用连续灭菌易灭菌不彻底，古采用分批灭菌较好。对于容积小的发酵罐，分批发酵比较方便。,（四）发酵工业培养基及设备管道灭菌技术,1.培养基及其他物料的灭菌条件,温度（,C,）,压力（,MPa,）,时长（,min,）,实验室培养基,固体,0.098,2030,液体,0.098,1520,种子培养基实罐灭菌,121,30,发酵培养基实罐灭菌,121,30,发酵培养基连续灭菌,130,5,消泡剂灭菌,121,30,补料实罐灭菌,淀粉,121,5,糖液,121,30,尿素溶液灭菌,105,5,2.设备和管道的灭菌,压力（,MPa,）,时长,种子罐、发酵罐、计量罐、补料罐等的空消,0.147,45min,空气过滤器,0.147,2h,补料管路、消泡剂管路,0.147,1h,接种管路,0.30.45,1h,玻璃器皿及用具,0.098,3060min,五、空气的除菌,无菌空气：,是指自然界的空气通过除菌处理使其含菌量降低到一个极限百分数的净化空气。,空气除菌：,是指除去或杀死空气中的微生物，使其达到发酵时对无菌空气要求的过程。,工业空气除菌的方法,加热灭菌,辐射灭菌,静电除菌,介质过滤除菌,