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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/11/4,*,请核对导学案答案,绪,1.,差异性,2.,来源和性质,3. 20,、 、,4,、,2,个,、,2,个、亚铁、一分子,氧、,一分子二氧化碳,4.,血红蛋白含量丰富，容易获取。,课前准备 提前5分钟,2020/11/4,1,（一）样品处理及粗提取,1.,样品处理 、粗分离、纯化 和纯度鉴定。,2.,血浆、杂蛋白、柠檬酸钠、五、生理盐,水、缓慢、低速短时、上清液没有黄色,3.,红细胞、等、蒸馏水、甲苯、磁力搅拌器,4.,血红蛋白、高速离心、无 、甲苯、白、脂溶,性沉淀、红 、血红蛋白溶液、暗红、破碎物沉,淀、滤纸、脂溶性沉淀、分液漏斗、血红蛋白,溶液,5.,无机盐离子、有机小分子、透析袋、磷酸缓冲,液,2020/11/4,2,（二）凝胶色谱操作,2.,交联程度、膨胀程度和分离范围、得水值、,7.5,、蒸馏水、均匀 、气泡、磷酸缓冲液 、,紧密 。,3.,管壁、凝胶面、色谱柱底部、,5,（三）操作提示,1.,白细胞,2.,洗脱液、沸水浴、微生物、空气,3.,扰乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序,2020/11/4,3,请,拿出,课本、双色笔、导学案,让我们准备好进行思维的碰撞,回顾：,1.,凝胶色谱法和电泳的基本原理？,2.,缓冲溶液的作用？,请,3,组,A1,阐述,请,5,组,A2,阐述,2020/11/4,4,知识回顾,凝胶色谱法分离蛋白质的原理（根据,分子量的大小,）,相对分子质量较,小,的蛋白质,容易进入,凝胶,内部,通道，路程,较长,移动速度,较慢,；,相对分子质量较,大,的蛋白质,无法进入,凝胶,内部,通道，路程,较短,移动速度,较快,；,相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。,凝胶电泳的原理,带电粒子,在,电场,的作用下发生,定向迁移,，在加入,SDS,排除,电荷多少,的影响后，使电泳迁移率完全取决于,分子大小,，从而达到分离的目的。,2020/11/4,5,课题,3,血红蛋白的提取和分离,实验操作要领,知识目标：,（,1,）,描述,凝胶色谱分离蛋白质的,步骤,；,（,2,）理解,进行样品的,预处理的目的,；,（,3,）,运用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离纯化。,重、难点：,（,1,）,描述,凝胶色谱分离蛋白质,步骤,；,（,2,）,运用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离纯化。,全班同学一起朗读,2020/11/4,6,蛋白质提取和分离步骤,具体操作,步骤,（一）,（二）,（三）,（四）,2020/11/4,7,哺乳,血液,血 浆,水 分,固体物质,血浆蛋白,无机盐,磷 脂,葡萄糖等,血细胞,白细胞,血小板,红细胞,（,最多,）,血红蛋白,（ ）,90,有没有，多不多，易不易,2020/11/4,8,1.,洗涤红细胞,1.1,洗涤的目的：,洗去血液中血浆及血小板等中的,杂蛋白,1.2,洗涤过程：,血液,100mL,3g,柠檬酸钠,低速离心,2 min,红细胞,血 浆,吸出血浆,红细胞,5,倍体积,生理盐水,缓慢搅拌,10min,重复洗涤,3,次，直至上清液没有,防止破坏红细胞，使血红蛋白流失,（一）样品处理,黄色,2020/11/4,9,2.,血红蛋白的释放,原理：红细胞渗透作用吸水涨破，释放血红蛋白,2020/11/4,10,3.,分离血红蛋白溶液,分离过程：,红细胞,混合液,离心管,甲苯层,脂类物质,血红蛋白层,破碎物沉淀层,高速离心,10min,滤纸,过滤,脂类物质,沉淀物,烧杯,分液,漏斗,2020/11/4,11,20mmol/L,磷酸缓冲液,透析的目的是什么？,1mL,1mL,1mL,去除血红蛋白中的小分子杂质,（二）粗分离,透析血红蛋白,2020/11/4,12,注意事项,（,1,）生理盐水作用？,（,3,）两次离心的差异？,（,4,）透析袋的作用机理？,模拟红细胞生存环境，保持红细胞结构完整。,破碎红细胞；溶解细胞膜,释放血红蛋白。,前慢后快，前短后长。,渗透作用,（,2,）蒸馏水和甲苯的作用？,2020/11/4,13,（三）纯化,1.,凝胶色谱柱的制作,（,2,）规格：玻璃管,长,40cm,，内径,1.6cm,，两端磨平；,橡皮塞,能塞入玻璃管，上平小凹；,移液管,0.5mL,，长,5cm,；,尼龙网,100,目；,打孔器,移液管能塞入。,（,1,）材料：玻璃管，橡皮塞、移液管、尼龙网,尼龙管、打孔器、小刀、螺旋夹,2020/11/4,14,2.,凝胶色谱柱的填装,（,1,）认识凝胶,Sephadex G,75,G :,交联程度、膨胀程度、分离范围,75,：凝胶得水值，即每克凝胶膨胀得水,7.5,克,（,3,）填装：缓慢一次填装，均匀，紧密、不能有气泡，迅速,连接缓冲液,（,2,）认识缓冲液：,300mL,、,20mmol/L,、,PH=7.0,磷酸缓冲液,2020/11/4,15,3.,样品的加入和洗脱,开下端,关下端,开下端,加样,样品完全渗入,缓冲液面,=,凝胶面,关下端,加缓冲液,接洗脱瓶,开下端,注意：待红色的蛋白质接近柱底是，开始收集，,连续收集，每管,5ml,疑问：,连续收集得到的,每一管,中是否为,同一分子质量,的蛋白质？,2020/11/4,16,（四）纯度鉴定,电泳,1.,原理：带电粒子在电场中发生定向迁移，从而把不同质量,和电量的粒子分离开。加入电量远大于比粒子自身带电量的,SDS,，排除电荷对粒子迁移大小的影响，据此将,不同分子质,量,的粒子分开。,2.,电泳结果分析,如果出现一个条带：样品中含有,一个分子质量级别,多肽；,如果出现两个条带：样品中含有,两个分子质量级别,多肽。,2020/11/4,17,2020/11/4,18,2020/11/4,19,合作探究 6分钟,题目：,（,1）,探究,问题,1,、,2,、,3,（,2,）自己存在的其他疑问,要求：,（1）小组长搞好组织调控：先,一对一,讨论，再组内跨层,交流；重点讨论答,案,的,科学性；,（2）讨论形成的答案要条,理清晰、要点化、序号化,。帮,助展示同学做好展示准备。,A层,解决全部疑难，并帮助B层完善答案,帮助其他同学解决疑难点。,B层,解决疑难后，负责展示。,C层,解决疑难,，,狂记,导学案自主学习部分,。,2020/11/4,20,展示点评安排,题目,展示小组,点评小组,非展示同学,探究1,讨论完后,B,、,C,层,落实基本原理的理解和记忆,（,3,分钟记住）,A,层,及时补充点评,探究,2,探究,3,点评、拓展、升华 约,10,分钟,点评答题规范、答案的正误或全面否，进行答案的补充修正，或知识拓展，或规律方法的总结。,其他同学注意倾听、积极思考,重点内容记好笔记。有不明白或有补充的同学要大胆提出。,其它小组可进行补充点评或拓展,我的舞台我做主 20分钟,1B2,4B2,、,5B1,2B1,、,3B1,6B1,7B2,8B2,要求：,展示人及时到位，规范快速、脱稿,。,答案要,序号化、要点化,。,组长搞好调控，可分工展示。,准备,质疑、补充,，高效科研小组成员发挥带头作用,。,2020/11/4,21,巩固反刍,要求：,1.B,层、,C,层结合学习目标，巩固落实本课的基础知,识；,A,层达成目标后，整理合作探究答案。,2.,组长抽查本组基础知识的掌握情况。,（,1,）,记忆,凝胶色谱分离蛋白质的步骤；,（,2,）,理解,进行样品的预处理的目的,；,2020/11/4,22,本堂小结,本节内容目标：获取血红蛋白溶液,获 取,红细胞,（离心）,破碎红细胞，释放血红蛋白,从各,红细胞的成分,中获取血红蛋白 （离心）,初步纯化血红蛋白（透析）,2020/11/4,23,1.,下列有关提取和分离血红蛋白的程度叙述正确的是（ ）,多选,A.,样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液,B.,通过透析可以去除样品中分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取,C.,可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化,D.,可通过,SDS,聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度,ACD,2.,下列是有关血红蛋白提取和分离的相关操作，其中正确的是（ ）,A.,可采集猪血作为实验材料,B.,用蒸馏水重复洗涤红细胞,C.,血红蛋白释放后应低速短时间离心,D.,洗脱液接近色谱柱底端时开始收集流出液,A,2,组,A1,1,组,A2,当堂反馈,2020/11/4,24,3.,样品的加入和洗脱的操作不正确的是（ ）,A.,加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓,冲液缓慢下降到凝胶面的下面,B.,加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内,C.,等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口,D.,用吸管小心的将,1ml,透析后的样品加到色谱柱的顶端，不要,破坏凝胶面,4.,在装填凝胶柱时，不能有气泡存在的原因是（ ）,A.,气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果,B.,气泡阻碍蛋白质的运动,C.,气泡与蛋白质发生化学反应,D.,气泡在装填凝胶的时候，使凝胶不紧密,A,A,5,组,A2,3,组,A1,2020/11/4,25,6.,下列操作正确的是（,）,A.,分离红细胞时采用低速长时间离心,B.,红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可,C.,分离血红蛋白溶液是低速短时间离心,D.,透析时要用,20mmol/l,的磷酸缓冲液，透析,12h,5.,选用红细胞作分离蛋白质的实验材料，下列是其优点的是,( ),多,A.,血红蛋白是有色蛋白,B.,红细胞无细胞核,C.,红细胞蛋白质含量高,D.,红细胞,DNA,含量高,ABC,D,4,组,A1,6,组,A2,2020/11/4,26,7.,下面关于对血红蛋白提取和分离的样品的处理措施中，正确的是,( ),多,A.,采集血样后要高速短时问离心获得血细胞,B.,洗涤三次后如上清液仍有黄色，可增加洗涤次数，否则血,浆蛋白无法除净。,C.,在蒸馏水和甲苯的作用下，细胞破裂，释放出血红蛋白,D.,释放血红蛋白后再经过离心，就可以使血红蛋白和其他杂,质分离开来,BCD,8,组,A2,2020/11/4,27,8.,在蛋白质的提取和分离中，关于对样品处理过程中，分析无误的是,( ),A,洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐,B,洗涤时离心速度过小，时间过短，白细胞等会沉淀，达不到分离的效果,C,洗涤过程选用,0.1%,的生理盐水,D,透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质下,D,7,组,A1,2020/11/4,28,课堂评价,学科助理：,1.,回扣目标 总结收获,2.,评出优秀小组和个人,谢谢！,2020/11/4,29,
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