肠道致病菌检验

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,肠道致病菌检测,1,肠杆菌的共同特点,1、相似的形态染色：G,杆状,2、简单的培养条件,3、活泼的生化反应,乳糖发酵试验：初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌,肠道致病菌多数不发酵乳糖；肠道非致病菌多数发酵乳糖,葡萄糖发酵试验：G-杆菌发酵菌和非发酵菌,氧化酶试验：鉴别肠菌科和弧菌科,肠菌科氧化酶：；弧菌科氧化酶：+,2,4、抗原构造复杂：O、H、K、Vi抗原,5、抵抗力不强,6、易变,耐药性变易,毒力性变易,生化反应性变易,3,第一节 志贺菌属（,Shigella,）,可引起人类痢疾及急性胃肠炎。,本属细菌多侵犯人肠道粘膜，很少侵入血流。,临床上通常以粪便及直肠拭子作分离培养。,4,一、培养特性,液体培养基呈均匀混浊生长，不形成菌膜及沉淀。,血平板：灰白色、半透明、表面光滑湿润、边缘整齐、中等大小、不溶血。,MAC、XLD等选择性分离平板：无色透明、中等大小、表面光滑湿润（宋内氏志贺菌易形成粗糙型菌落）。,5,二、生化初筛,TSI或KIA：K/A,（福氏志贺菌6型可产少量气体）,半固体上动力：,6,三、血清学分型,表1 志贺菌属血清学分型,7,注,1、四种志贺菌多价血清仅包括A1、A2、B群多价和D群血清。,2、四种志贺菌多价血清不凝集时，应考虑有K抗原的存在，将培养物制成浓菌液，10030min水浴后再进行凝集。若仍不凝集，用C群多价血清和A群3型12型血清进行凝集。,3、四种志贺菌多价血清凝集，而相应的群、型血清均不凝集，且菌落较粗糙，可用宋内氏志贺菌相（粗糙型）血清做凝集。,8,四、系统生化鉴定,选用下列之一进行：,1、选用符合国家或国际质量认可的市售商品化鉴定系统,2、葡萄糖铵、西蒙枸橼酸盐、V.P、苯丙氨酸脱氨酶、赖氨酸脱羧酶、KCN、水杨苷，志贺菌属均为阴性反应。,9,五、结果报告,根据生化试验和血清学鉴定结果，符合志贺菌的，可报告“检出XX志贺菌”；如不符合则报告“未检出志贺菌”。,10,第二节 沙门菌属（,Salmonella,）,无荚膜,大多数血清型以周生鞭毛运动，但有发生不运动的突变型。,鸡沙门菌、雏沙门菌通常不运动。,11,一、培养特性,液体培养基内均匀混浊生长；,血平板、SS和MAC平板：中等大小、无色半透明、表面光滑、边缘整齐。产H,2,S菌株在SS平板上可形成中心黑色的菌落。,大多数甲型副伤寒沙门菌和部分猪霍乱沙门菌不产生H,2,S。,伤寒沙门菌、丙型副伤寒沙门菌和都柏林沙门菌具有Vi抗原。,12,二、生化初筛,TSI或KIA、赖氨酸脱羧酶试验,在TSI或KIA上斜面产酸、底层产酸，同时赖氨酸脱羧酶试验阴性的菌株可排除。,符合以上生化反应加做：靛基质、尿素、KCN,13,表2 沙门菌属生化反应初步鉴别表,序号,H,2,S,靛基质,尿素,KCN,赖氨酸,A1,+,-,-,-,+,A2,+,+,-,-,+,A3,-,-,-,-,+/-,注：+阳性；-阴性；+/-阳性或阴性。,A2：补做甘露醇和山梨醇，沙门菌均为阳性。,A3：补做ONPG，沙门菌为阴性。,14,三、系统生化鉴定,选用符合国家或国际质量认可的商品化生化鉴定系统,15,四、血清学试验,Vi抗原能阻碍O抗原与相应O抗血清凝集。,破坏Vi抗原方法：挑取菌苔于1mL生理盐水中做成浓菌液，于酒精灯火焰上煮沸即可。,16,五、结果报告,综合生化试验和血清学试验的结果，报告“检出XX沙门菌”或“未检出沙门菌”。,17,第三节 副溶血性弧菌（,Vibrio parahaemolyticus,）,VP是一种嗜盐性细菌，可污染食品，特别是海产品。,在我省，VP是引起的食物中毒的主要病原菌之一，占60%左右。,形态：具有多形性，运动活泼。,18,一、培养特性,生长条件类似霍乱弧菌，不同之处是VP的嗜盐性。,无盐培养基上不生长，最适盐浓度是3.5%。,TCBS：圆形、光滑湿润、中心颜色较深的绿色菌落。,氯化钠蔗糖琼脂平板：圆形、光滑湿润、中心颜色较深的蓝绿色菌落。,19,科玛嘉弧菌显色平板：圆形、光滑湿润、中心颜色较深的紫红色菌落。,MAC：不生长或菌落扁平、半透明。,SS：不生长或小、扁平粘韧性菌落，不易挑起，或能拉丝。,EMB：一般不生长,神奈川试验：在我妻氏琼脂上产生溶血。,20,二、初步鉴定,氧化酶试验：+,涂片镜检：G,，呈棒状、弧状等多形态，无芽胞。,3%氯化钠TSI：K/A,嗜盐性试验：0%盐胨水：，3 %盐胨水：+， 6%盐胨水：+， 8%盐胨水：+，10%盐胨水：,21,三、确定鉴定,选用符合国家或国际质量认可的市售商品化鉴定系统,隔夜培养物进行ONPG试验，VP为阴性,22,四、结果报告,检出副溶血性弧菌或未检出副溶血性弧菌,23,谢谢,24,