剖析中药的检查知识

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,剖析中药的检查知识,中药的检查,药材和饮片通常都检查什么？,中药制剂通常都检查什么？,中药的检查与化药的检查有何区别？,中药材及其炮制品的检查,普遍检查杂质、水分、总灰分、酸不溶性灰分,一些检查重金属、砷盐、干燥失重、炽灼残渣、溶剂残留、树脂残留,农药残留、黄曲霉素、二氧化硫、有害元素,特殊检查：西洋参-人参、大黄-土大黄苷、乌头-双酯型生物碱,比较中药的检查与化药的检查有何异同？,杂质限量计算,一般杂质检查,特殊杂质检查,重金属,砷盐,铁盐,有害元素,干燥失重,水分,炽灼残渣,灰分,农药残留,黄曲霉素,二氧化硫,杂质的来源,一是由中药材原料中带入；,二是在生产制备过程中引入；,三是贮存过程中受外界条件的影响，制,剂的理化性质改变而产生。,一般杂质检查方法,杂质检查法,水分,灰分测定法,铁盐,干燥失重,炽灼残渣,重金属,砷盐,树脂残留,农药残留,黄曲霉素,S0,2,有害元素,杂质检查法,药材中混存的杂质系指下列各类物质：,一、来源与规定相同，但其性状或部位与规定不符；,二、来源与规定不同的物质；,三、无机杂质，如砂石、泥块、尘土等。,杂质检查法,检查方法,1. 取规定量的供试品，摊开，用肉眼或放大镜（510倍）观察，将杂质拣出；如其中有可以筛分的杂质，则通过适当的筛，将杂质分出。,2. 将各类杂质分别称重，计算其在供试品中的含量（%）。,杂质检查法,【注意】,1.药材中混存的杂质如与正品相似，难以从外观鉴别时，可称取适量，进行显微、化学或物理鉴别试验，证明其为杂质后，计入杂质重量中。,2.个体大的药材，必要时可破开，检查有无虫蛀、霉烂或变质情况。,3.杂质检查所用的供试品量，除另有规定外，按药材取样法称取。,水分测定法,第一法(烘干法) 适用于不含或少含挥发性成分的药品。,第二法(甲苯法) 适用于含挥发性成分的药品。,第三法(减压干燥法) 适用于含有挥发性成分的贵重药品。,第四法（气相色谱法） 适用于中药制剂中微量水分的测定。,甲苯法测定水分,A 为500mL的短颈圆底烧瓶，,B 为水分测定管；,C 为直形冷凝管，外管长40cm。,使用前，全部仪器应清洁，并置烘箱中烘干。,甲苯法测定水分,取供试品适量（约相当于含水量14ml），精密称定，置A瓶中,加甲苯约200ml，必要时加入干燥、洁净的沸石或玻璃珠数粒，将仪器各部分连接，自冷凝管顶端加入甲苯，至充满B管的狭细部分。将A瓶置电热套中或用其他适宜方法缓缓加热,待甲苯开始沸腾时，调节温度，使每秒钟馏出2滴。待水分完全馏出，即测定管刻度部分的水量不再增加时,将冷凝管内部先用甲苯冲洗, 再用饱蘸甲苯的长刷或其他适宜的方法，将管壁上附着的甲苯推下，继续蒸馏5分钟，放冷至室温，拆卸装置，如有水黏附在B管的管壁上，可用蘸甲苯的铜丝推下，放置，使水分与甲苯完全分离（可加亚甲蓝粉末少量，使水染成蓝色，以便分离观察）。检读水量，并计算供试品中的含水量（%）。,灰分测定法,总灰分,：中药经粉碎后加热，高温炽灼至灰化，总灰分,=,生理灰分,+,酸不溶性灰分,细胞组织及其内含物成为灰烬而残留，由此所得灰分为“,生理灰分,”。,酸不溶性灰分,：中药经高温炽灼得到的总灰分加盐酸处理，得到不溶于盐酸的灰分，称为酸不溶性灰分。,总灰分测定法,称取供试品,2,3g,（如需测定酸不溶性灰分，可取供试品,3,5g,），置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量（准确至,0.01 g,），缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至,500,600,，使完全炭化并至恒重，根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量（,%,）。,酸不溶性灰分测定法,供试品先按总灰分测定的方法测定其总灰分，然后取所得的灰分，在坩埚中注意加入稀盐酸约10ml，用表面皿覆盖坩埚，置水浴上加热10分钟，表面皿用热水5ml冲洗，洗液并入坩埚中，用无灰滤纸滤过，坩埚内的残渣用水洗于滤纸上，并洗涤至洗液不显氯化物反应为止。滤渣连同滤纸移至同一坩埚中，干燥，炽灼至恒重。根据残渣重量，计算供试品中含酸不溶性灰分的含量（%）。,灰分测定的注意事项,1. 测定前先将供试品称取适量粉碎，使其能通过2号筛，将粉末混合均匀后再取样。,2. 如供试品不易灰化，可将坩埚放冷，加热水或10%硝酸铵溶液2ml；使残渣湿润，然后置水浴上蒸干，得到的残渣再按上面所说的方法炽灼至坩埚内容物完全灰化。,重金属,第一法,第二法,第三法,第四法,化药常用哪个方法？,中药常用哪个方法？,砷盐,古蔡氏法,Ag-DDC法,原理、方法、注意事项,样品前处理,化药常用哪个方法？,中药常用哪个方法？,有机破坏测砷盐,中药材、中药制剂和一些有机药物砷盐的检出通常应先行有机破坏，因砷在分子中可能以有机状态结合，如不经破坏，则砷不易析出。,常用的破坏方法有,酸破坏法（溴,-,稀硫酸破坏法、硫酸,-,过氧化氢破坏法）、,碱破坏法（氢氧化钙破坏法、无水碳酸钠破坏法、硝酸钠,-,无水碳酸钠破坏法）,直接炭化法等，以,氢氧化钙破坏法,较为常用。,砷盐的样品前处理,一般有机药物的处理方法：,取一定量的供试品，加入等量的无砷,氢氧化钙,混匀后，加水湿润，烘干，在小火上小心炽灼（注意不使内容物溅出）至烟雾除尽，移入高温炉中，在500-600 炽灼至灰化，砷成为非挥发性的亚砷酸钙，取出放冷，加蒸馏水5ml，再缓缓加入盐酸及浓溴液数滴（不含硫的检品可不加浓溴液），置水浴上加热至溶液中的红色溴驱尽，滴加氯化亚锡试液数滴，再全部转入测砷瓶中，依法测定，做空白试验校正。,注意炽灼温度以600 左右为宜，温度过高，As,2,O,3,损失大，给检查带来误差；一定要灰化完全，若不完全，有游离碳存在，能使所显砷斑颜色较浅，且不规律。,溶剂残留,树脂残留,农药残留,方法,色谱柱,检测器,限量,树脂残留物,苯的限量为2ppm，正己烷、甲基环己烷、甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯的限量为20ppm。,GC法；方法学验证：同溶剂残留,图1 对照品溶液色谱图,1-正己烷；2-苯；3-甲基环己烷；4-甲苯；5-二甲苯；6-苯乙烯；7-二乙烯苯,检查农药残留量的必要性？,中药材有相当数量为人工栽培，为提高药材产量，减少昆虫、真菌和霉菌的危害，在生产过程中常喷洒农药。此外，土壤中残留的农药也可能引入药材中，致使中药材农药残留问题较为严重，而农药对人体危害极大，所以需对中药材及中药制剂进行农药残留量检查。,农药残留量的检查,常见农药的种类,按化学结构分类：,有机氯类：,DDT,、六六六等；,有机磷类：,敌敌畏、乐果等；,苯氧羧酸类除草剂：,2,，,4D,；,2,，,4,，,5T,等；,氨基甲酸酯类：西维因（甲萘威）等；,二硫代氨基甲酸酯类：福美铁、福美锌等；,无机农药：磷化铝、砷酸钙等；,植物性农药：烟叶和尼古丁等；,其他：溴螨酯、氯化苦等。,其中有机氯和有机磷类农药是,长期残留,的，故应测定其含量。,农药残留量的检查,1、残留农药的提取,提取溶剂：,有机氯类农药：常用正已烷（或石油醚）、,乙腈、丙酮,、苯等，混合溶剂常用正已烷,-,丙酮、乙腈,-,水等。,有机磷类农药：根据其极性采用相应极性的溶剂进行提取。,提取方法：,索氏提取法；,振荡提取法。,农药残留量的检查,2、样品纯化：,液,液分配,（,LLP,）：常用溶剂体系有二氯甲烷,丙酮,/,水、二氯甲烷,甲醇,/,水、乙腈,石油醚、乙腈,石油醚,/,水、二氯甲烷,乙腈,/,水等。,柱层析分离：常用吸附剂有弗罗里硅土（,Florisil,）、,Celite-Nuchar,、硅胶、氧化铝、活性炭等。,农药残留量的检查,3、检测方法：气相色谱法。,层析柱：毛细管柱。,检测器：常用电子捕获检测器。,固定液及其配比,有机氯农药：常用DC-200、OV-17、QF-1、SE-30、OV-210等。,有机磷农药：常用10%DC-200、10%-200+15%QF-1、2%DEGS等。,柱温：有机氯农药：一般使用180-220，视农药而异，其中以200最常用；,有机磷农药：测定对象不同，柱温变化较大。,载气：氮气。,农药残留量的检查,难点提示：,对中药进行农药残留量检查已成为必然，尤其是出口中药材及中药制剂必须进行该项检查。,农药残留量分析属微量分析，在对样品进行前处理时需特别注意待测成分的损失。,农药残留量的检查,黄曲霉毒素测定法,为什么要测定？,方法,注意事项,检查黄曲霉素的必要性,中药材采集后干燥或贮存不当，或在制备和加工过程中处理不善，可能污染在自然界普遍存在的黄曲霉而产生黄曲霉毒素，黄曲霉毒素具有极强的毒性和致癌性，故需对中药材及中药制剂中黄曲霉毒素含量进行控制。,黄曲霉的基本结构：,黄曲霉毒素是一类结构相似的化合物，其基本结构都有二呋喃和香豆素。黄曲霉毒素在紫外线照射下，都能了出荧光，根据荧光颜色、,Rf,值及结构等不同，分别命名为,B1,、,B2,、,G1,、,G2,、,M1,、,M2,、,P1,、,Q,等。,B1,B2,G1,黄曲霉毒素测定法（2010）,本法系用高效液相色谱法（附录D）测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒素（以黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2总量计），除另有规定外，按下列方法测定。,规定：B15g/kg，G2+G1+B2+B1的总量 10g/kg。,陈皮、僵蚕、桃仁、胖大海、酸枣仁,黄曲霉毒素测定法（2010）,色谱条件与系统适用性试验,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水（40：18：42）为流动相，流速每分钟0.8ml；采用柱后衍生法检测，衍生溶液为0.05%的碘溶液（取碘0.5g，加入甲醇100ml使溶解，用水稀释至1000ml制成），衍生化泵流速每分钟0.3ml，衍生化温度70；以荧光检测器检测，激发波长ex=360nm（或365nm），发射波长em=450nm。两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。,黄曲霉毒素测定法（2010）,混合对照品溶液的制备,精密量取黄曲霉毒素混合标准品（黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标示浓度分别为1.0g/ml、0.3g/ml、1.0g/ml、0.3g/ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。精密量取储备液1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。,黄曲霉毒素测定法（2010）,供试品溶液的制备,取供试品粉末约15g（过二号筛），精密称定，加入氯化钠3g，置于均质瓶中，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11000转/分钟），离心5分钟（离心速度2500转/分钟），精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45m）滤过，量取续滤液20.0ml，通过免疫亲合柱（AflaT-estP）,流速每分钟3ml，用水20ml洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2ml量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。,黄曲霉毒素测定法（2010）,测定法,分别精密吸取上述混合对照品溶液5l、10l、15l、20l、25l，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线。另精密吸取上述供试品溶液20-25l，注入液相色谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2的量，计算，即得。,黄曲霉毒素测定法（2010）,附注：,（1）本实验应用相应的安全、防护措施，并不得污染环境。（2）残留有黄曲霉毒素的废液或废渣的玻璃器皿，应置于专用贮存容器（装有10%次氯酸钠溶液）内，浸泡24小时以上，再用清水将玻璃器皿冲洗干净。,二氧化硫残留量测定法,为什么要测定？,方法,硫磺具有漂白、增艳、防虫等作用，某些中药材在加工过程中有用硫磺熏蒸的习惯，残留的,S0,2,可能影响人体健康。,2005,版药典规定，中药材,不再允许使用,硫磺熏蒸，并要对其进行检测。,二氧化硫残留量测定法（2010）,A 为1000ml两颈圆底烧瓶；,B 为竖式回流冷凝管；,C 为（带刻度）分液漏斗；,D 为连接氮气流入口；,E 为二氧化硫气体导出口。,另配磁力搅拌器及电热套。,取药材或饮片细粉约10g，精密称定，置两颈圆底烧瓶中，加水300-400ml和6mol/L盐酸溶液10ml，连接刻度分液漏斗，并导入氮气至瓶底，连接回流冷凝管，在冷凝管的上端E口处连接导气管，将导气管插入250ml锥形瓶底部。锥形瓶内加水125ml和淀粉指示液1ml作为吸收液，置于磁力搅拌器上不断搅拌。加热两颈圆底烧瓶内的溶液至沸，并保持微沸约3分钟后开始用碘滴定液（0.01mol/L）滴定，至蓝色或蓝紫色持续20秒钟不褪，并将滴定的结果用空白试验校正。,A为供试品消耗碘滴定液的体积，ml；,B为空白消耗碘滴定液的体积，ml；,C为碘滴定液浓度，0.01mol/L；,W为供试品的重量，g；,0.032为每1ml碘滴定液（1mol/L）相当的二氧化硫的质量，g。,供试品中二氧化硫残留量（mg/g）=,重金属及有害元素测定法,（2010）,铅、镉、砷、汞是目前世界公认的对人体有害的元素，国际上对此十分重视，很多国家对进口中药、中药制剂均有明确的限度规定。某些国家对铜也有明确限定。,2005年版中国药典对上述5种有害元素建立了测定方法，规定铅5ppm、镉0.3ppm 、砷2ppm 、汞0.2ppm，铜20ppm,重金属及有害元素测定法,（2010）,6种药材中需测定：甘草、黄芪、西洋参、丹参、白芍、金银花、,测定方法：原子吸收分光光度法，电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）,ICP-MS,特点,仪器构造,ICP,工作原理,样品前处理,分析方法,应用前景,ICP-MS,电感耦合等离子体质谱：是以电感耦合等离子体（ICP）作为离子源，产生的样品离子经质量分析器和检测器按质荷比（m/z）分离后，得到质谱图，用于元素和同位素分析的一种新方法。,ICP-MS的特点,更低的检出限：0.020.1ng/ml,非常宽的线性范围：89个数量级,谱线简单、干扰少、精密度高,多元素同时定性、定量分析等特点,速度快：通常的分析时间15 min,可分析地球上几乎所有的元素（C、O）。,ICP-MS的,仪器构造,等离子体离子源通常，液体样品通过蠕动泵引入到一个雾化器产生气溶胶。双通路雾室确保将气溶胶传输到等离子体。在一套形成等离子体的同心石英管中通入氩气（Ar）。炬管安置在射频(RF)线圈的中心位置，RF能量在线圈上通过。强射频场使氩原子之间发生碰撞，产生一个高能等离子体。样品气溶胶瞬间在等离子体中被解离（等离子体温度大约为6000 - 10000 K），形成被分析原子，同时被电离。将等离子体中产生的离子提取到高真空（一般为10-4 Pa）的质谱仪部分。真空由差式抽真空系统维持：被分析离子通过一对接口（称作采样锥和截取锥）被提取。,雾化系统,等离子炬管,取样锥,离子透镜,河水的,ICP-MS,质谱图,ICP-MS的样品前处理：微波消解、干法,分析方法：内标法、外标法,应用：,中药的元素分析：有益微量元素、有害元素,元素形态分析：,西洋参中人参的检查,取人参对照药材1g，依法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取西洋参供试品溶液和上述对照药材溶液各2,m,l,分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(1372)510放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中不得显与对照药材一致的斑点。,大黄流浸膏中土大黄苷的检查,取本品适量，加甲醇2 ml，温浸10分钟，放冷，取上清液10l，点于滤纸上，以45%乙醇展开，取出，晾干，放置10分钟，置紫外灯（365nm）下检视，不得显持久的亮紫色荧光。,乌头酯型生物碱的检查,（1）制川乌中酯型生物碱的检查比色法（2005）,双酯型生物碱在碱性条件下与盐酸羟胺反应，生成异羟肟酸，再与三价铁离子反应，生成红色的异羟肟酸铁，在520nm波长处有特征吸收，因此在此波长处测定其吸收，从而算出浓度而控制制川乌的毒性成分含量。,2010？,乌头酯型生物碱的检查,（2）附子理中丸中乌头碱的检查薄层层析法（2005）,以乌头碱为对照品，采用薄层层析法对含乌头制剂进行薄层层析，通过比较样品中与乌头碱对照品色谱相应位置上出现的斑点大小及有无进行检查。,2010？,