实验四 食品中细菌总数及大肠菌群的检测完成版1

,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,Page,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,单击此处编辑母版标题样式,Page,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,Page,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,Page,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,单击此处编辑母版标题样式,Page,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验,四,食品中细菌总数及大肠菌群的检测,食品微生物学基础实验,普通微生物学实验,1,一、目的要求,1,、掌握食品中微生物学基本指标的检测方法。了解食品质量与细菌和大肠菌群数量的重要关系,2,、通过实验，初步掌握食品中污染的活细菌计数方法，以判别食品的卫生质量,2,1,、菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。,2,、大肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。,由,肠杆菌科,中四个菌属内的一些细菌所组成，即,艾希氏菌属、枸橼酸杆菌属、产气克雷伯氏菌属和肠杆菌属,。,该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义。,二、实验原理,3,一、待测样品： 奶粉还原液、豆腐等。,二、培养基平板计数琼脂培养基、月桂基磺酸盐胰蛋白胨肉汤（,LST,）、煌绿乳糖胆盐肉汤（,BGLB,）, 225m1,无菌生理盐水、,9m1,无菌生理盐水、,1mol/L,氢氧化钠、,1mol/L,盐酸。,三、无菌培养皿、革兰氏染色液、移液器、枪头、培养箱、水浴锅、电子天平、电炉、玻璃珠（直径为,5mm,）、试管架、酒精灯、灭菌镊子、,75%,酒精棉球、玻璃蜡笔、不锈钢勺等。,三、实验材料,4,四、操作方法,一、细菌总数,：,(1),以无菌操作将检样,25,克,(,或,25ml),放于装有,225ml,灭菌生理盐水和玻璃珠的三角瓶中，充分振荡制作成,1:10,的均匀稀释液，样品,PH,值应在,6.5-7.5,之间，必要时用,1mol/L,氢氧化钠或,1mol/L,盐酸调节,(,固体食品需先用无菌均质器均质后再稀释,),。,(2),用移液器，吸取,1:10,稀释液,1ml,，注入含有,9ml,灭菌生理盐水的试管内，振摇均匀，制成,1:100,的稀释液。,(3),另取枪头，按上述操作进行,10,系列稀释成不同浓度的稀释液，如此每递增稀释一次，即换用,1,支无菌枪头。,(4),根据对标本污染情况的估计，选择,2-3,个稀释度，分别在作,10,倍递增稀释的同时，即吸取该稀释度的稀释液,1ml,于灭菌培养平皿内，每个稀释度作两个平皿。,(5),稀释液吸入平皿后，将融化并冷却至,45,的平板计数琼脂培养基注入平皿约,15ml,，并转动平皿使其混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有,1ml,灭菌生理盐水的灭菌平皿作空白对照。,(6),待琼脂凝固后，翻转平板，置,36+1,恒温箱内培养,48,2,小时后取出，计算平板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每克样品所含菌落总数。,5,菌落总数的检验程序,检样,25g(,或,25ml),样品,225ml,稀释液，均质,10,倍系列稀释,选择,2-3,个样品匀液各取,1ml,分别加入无菌培养皿内,每皿加入,15-20ml,培养基摇匀,36,1,培养,482h,计算菌落数，报告,6,梯度稀释,7,操作方法,二、大肠菌群检验,：,取样品及稀释方法与菌落总数检验方法相同，做成,1:10,的均匀稀释液为检样，取样量为,1ml,及,0.1ml(,相当于,1,克及,0.1,克奶粉样品,),各,3,管。,1,初发酵试验,选择待测样品,3,个适宜稀释度接种于,LST,发酵管内，接种量在,1ml,以上者，用双料,LST,发酵管；每一稀释度接种,3,管，置,36,1,温箱内，培养,24,2,小时，如所有发酵管都不产气，继续培养,24,2,小时，观察倒管内是否产气，如未产气可报告为大肠菌群阴性；如有产气者，则进行复发酵试验。,2,复发酵试验,将所有产气的,LST,发酵管分别转接在,BGLB,肉汤管中，置,36,1,温箱内，培养,48h,2,小时,然后取出，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管,3,报告,根据复发酵试验的阳性管数，查大肠菌群最可能数,(MPN),检索表。得出每,1m1(g),食品中存在的大肠菌群数的近似值。,8,检样,25g,或,25ml,225ml,稀释液，均质,10,倍系列稀释，选三个适宜稀释度接种,LST,肉汤管,36,1,培养,482h,不产气,产气,接种,BGLB,肉汤,36,1,培养,482h,不产气,产气,大肠菌群阴性,大肠菌群阳性,查,MPN,表，报告,LST,发酵管现象,9,1,影响杂菌总数准确性的因素有哪些？,2,在食品卫生检验中为什么要选用大肠菌群作为食品被污染的指标之一,?,3,在细菌总数检测中做空白对照实验的目的是什么？,五、思考题,10,谢 谢,11,