总糖的测定

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验一 总糖的测定,1.,实验原理,斐林试剂法是利用斐林试剂的甲、乙液混合后，甲液的硫酸铜与乙液的氢氧化钠作用生成天蓝色的氢氧化铜沉淀，该沉淀在碱性溶液中与乙液的酒石酸钾钠反应生成复杂的化合物（酒石酸钾钠铜）。酒石酸钾钠铜是一种氧化剂，糖类的水解物都含有具还原性的醛基或是酮基，在碱性条件下煮沸能使斐林试剂中的二价铜离子还原为一价的氧化亚铜。根据斐林试剂完全还原所需的糖量，计算出样品的总糖含量。,2.,操作方法,2.1,样品处理：将样品在组织捣碎机中捣成匀浆，称取约,10-20g,样品，溶解后置于,250mL,容量瓶中，加蒸馏水至刻度，混匀，静置,过滤,60-70mL,。,2.2,样品转化：,吸取处理好的样液,50mL,于,100mL,容量瓶中，加盐酸,5mL,，摇匀,。置水浴中加热，使溶液在,22.5min,内升温至,70,，保持,7.58min,，使全部加热时间为,10min,。取出迅速冷却至室温。用,20%NaOH,溶液中和（加入酚酞指示剂,12,滴），,样液至微红色为止，,加蒸馏水至刻度,，摇匀，注入滴定管中。,2.3,样液测定,2.3.1,样品溶液预测：,吸取,5.0mL,斐林氏甲液及,5.0mL,乙液（先加乙液再加甲液），,置于三角瓶中，加蒸馏水,25mL,，加入玻璃珠,3,5,粒，,控制在,2min,内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样品溶液，并保持溶液沸腾状态，,待溶液颜色变浅时，以每秒,1,滴的速度滴定，直至溶液蓝色褪去，出现粉红色,(,或,浅黄色,),为终点。,2.3.2,样品溶液正式测定：,吸取,5.0mL,斐林氏甲液及,5.0mL,乙液,(,先加乙液再加甲液,),，置于,150mL,锥形瓶中，加蒸馏水,25mL,，,从滴定管中滴加比预测体积少,12mL,的样品溶液,，加入玻璃珠,35,粒，控制在,2min,内加热至沸，然后趁沸继续以每,2,秒,1,滴的速度滴定，直至溶液蓝色褪去，出现粉红色,(,或,浅黄色,),终点，记录消耗样液的总体积。同法平行操作,23,份，得出平均消耗体积。,3.,计算,式中,X ,样品中还原糖的含量（以葡萄糖计），,%,；,m 10mL,斐林试剂相当于还原糖（以葡萄糖计）,的质量，,g,；,V ,测定时平均消耗样品溶液的体积，,mL,；,M ,样品质量，,g,。,4.,变色过程：,样液由深蓝色蓝紫色紫红色红色,或由深蓝色蓝紫色黄绿色黄红色,如果滴定后样品液的,颜色变浅后又再变深,，说明滴定过量，需重新滴定。,5.,滴定时反应液不变色的原因及处理,：,可能是样液含糖量过少或斐林试剂太浓；,应加大称样量；,或减少稀释倍数；,或减少斐林试剂的用量，可各取,1,3mL,，,计算时按比例折算。,