微生物的实验室培养降解尿素和纤维素(用)

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,专题,微生物专题,微生物概念及分类,微生物培养,微生物分离和计数,微生物应用,1,一、微生物概念及分类,1,、概念：是指自然界中那些形态微小、结构简单，,通常,要用光学显微镜或电子显微镜才能看清楚的生物。,第,1,节 微生物的实验培养,2,生物分类,动物界：,植物界：,真菌界：,原生生物：,原核生物：,病毒,大型真菌、霉菌酵母菌,细,菌、放,线,菌、,支,原体、,蓝,藻、,衣,原体,变形虫、草履虫,DNA,型病毒、,RNA,型病毒,真核生物,原核生物,非细胞生物,细胞生物,3,小资料：,乳酸菌每小时产生乳酸能达到自身重量的成千上万倍；大肠杆菌每小时分解的糖是自身重量的两千倍，每,20,分钟可分裂一次，如保持这一速度，则两天即可超过地球的重量。,微生物的代谢为什么如此旺盛呢？,微生物表面积和体积的比很大，约是同等重量成年人的,30,万倍，使它们能迅速与外界环境进行物质交换。,4,二、微生物培养,：,1,）概念：,按照微生物对营养物质的不同需要，,配制出供其生长繁殖的,营养基质,。,1,、培养基：,2,）营养成分：,5,概念,分类,作用,为微生物的生长和繁殖提供所需碳元素的营养物质,无机碳源：二氧化碳,、,碳酸氢钠；,有机碳源：葡萄糖,、脂肪酸、石油等,葡萄糖是最主要的碳源,合成微生物的细胞物质和代谢产物，有些碳源是异养微生物主要能源,碳源,：,6,概念,分类,作用,为微生物的生长和繁殖提供所需氮元素的营养物质,无机氮源：,N2,、,NH3,铵盐、硝酸盐；,有机氮源：尿素、,牛肉膏、蛋白胨等,铵盐、硝酸盐是最主要的氮源。,合成蛋白质、核酸和含氮代谢产物,氮源：,温度、,PH,、渗透压、,O2,及特殊营养物质等。,7,1,、科学家们用脉胞霉（一种真菌）为材料，进行科学研究，用基本培养基来培养脉胞霉。基本培养基中所含的营养要素一般包括：,_,2,、酵母菌可用于食品工业的废水处理，废水中的淀粉或废糖可与为酵母菌的生长提供,_,类营养物质。,3,、用乳酸菌制酸奶，加入的蔗糖是作为,_,类营养物质加入到牛奶中的。,4,、硝化细菌的碳源、氮源、能源依次为,_,。,碳源、氮源、水、无机盐,碳源,碳源,CO,2,、,NH,3,、,NH,3,氧化释放的化学能,8,微生物所需的营养要素,碳源,氮源,水,无机盐,无机碳源：,CO,2,等,自养型,有机碳源：,葡萄糖等,异养型,N,2,：固氮菌（根瘤菌等）,NH,3,：硝化细菌,其他：铵盐、硝酸盐、尿素、,蛋白胨,特殊营养物质（维生素、氨基酸和碱基等）、,PH,、温度、氧气等,9,3,）培养基的种类,物理性质,培养基特点,作 用,固体培养基,半固体培养基,液体培养基,加大量琼脂,加少量琼脂,不加琼脂,用于微生物的分离和计数,观察微生物的运动和鉴定菌种,用于工业生产,10,3,）培养基的种类,化学成分,培养基特点,作 用,合成培养 基,天然培养 基,化学成分、含量已知,含有天然物质，化学成分、含量未知,用于微生物的分类和鉴定,用于工业生产,11,3,）培养基的种类,用 途,培养基成分,原理,作用,实例,选择培养基,鉴别培养基,基本培养基,+,某种物质,基本培养基,+,指示剂或化学物质,抑制不需要；促进需要微,生物生长,发生特定颜色反应等，证明微生物的存在,分离菌种,鉴别菌种,青霉素选择出霉菌和酵母菌,伊红,-,美蓝遇大肠杆菌落呈深紫色带金属光泽,12,选择培养基,1,）不加碳源的培养基,分离自养型微生物,2,）不加氮源的培养基,分离固氮菌,3,）加入青霉素的培养基,分离酵母菌、霉菌等真菌,4,）加入高浓度食盐的培养基,分离金黄色葡萄球菌,13,练习：,（,10,全国）,某细菌固体培养基的组成成分是,KH,2,PO,4,、,Na,2,HPO,4,、,MgSO,4,、葡萄糖、尿素、琼脂和蒸馏水，其中凝固剂是,，碳源是，氮源是。已知只有能合成脲酶的细菌才能在该培养基上生长，故该培养基属于培养基。按照化学成分分类，该培养基属于培养基。从同化作用类型上看，用该培养基培养的细菌属于,。,葡萄糖,尿素,琼脂,选择,合成,异养型,14,思考：,自然界中微生物是混杂的生活在一起的，如何分离出某种微生物（如纯化大肠杆菌）？,2,、实验操作,大肠杆菌的纯化培养,1,）制备培养基：,计算,称量,溶化,调,PH,值,灭菌,倒平板,？,15,无菌技术,1,、获取纯化培养物的关键是,防止外来杂菌 的入侵。,2,、无菌措施：,1),对实验操作空间、操作者衣着和手进行清洁和,消毒,；对将培养用的器皿、接种工具和培养基进行,灭菌,2),实验操作时已灭菌材料等应避免与周围物品接触；实验操作应在酒精灯火焰附近进行；接种工具等应在酒精等火焰上灼烧后使用,16,1),概念：用,温和的,物理方法和化学方法杀 死物体表面或内部,一部分,对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）,消毒与灭菌,消毒：,2),常用消毒方法：,煮沸消毒法,:100,煮沸,5-6min,；,巴氏消毒法,:70-75 ,下煮,30min,或,80 ,下煮,15min,；,化学药剂消毒法,:,用,75%,酒精等进行皮肤消毒,;,氯气消毒水源；,紫外线消毒等,17,灭菌,1),概念：用,强烈的,物理方法和化学方法杀死物体表面或内部,所有的,微生物（包括芽孢和孢子）,18,灼烧灭菌,干热灭菌：,160-170 ,下加热,1-2h,。,高压蒸,汽,灭菌：,100kPa,、,121 ,下维持,15-30min.,2),灭菌方法：,19,无菌技术,1,、获得纯净培养物的关键是？,防止外来杂菌的入侵,2,、消毒与灭菌的区别？,消毒是杀死部分对人体有害的微生物；灭菌,是杀死所有微生物。,3,、对培养基灭菌的方法是,_,，对接种针灭菌的方法是,_,，对玻璃器皿灭菌的方法是,_,，对实验操作者的手用酒精,_,处理，实验操作结束需不需要灭菌？,_,高压蒸汽灭菌法,灼烧灭菌,干热灭菌,消毒,需要,20,倒平板：,待培养基冷却到,50,O,C,左右时倒平板。,平板倒置原因：防止培养基冷却产生水滴滴落培养基上，造成污染。,21,2,、实验操作,大肠杆菌的纯化培养,1,）制备培养基：,计算,称量,溶化,调,PH,值,灭菌,倒平板,原则：,目的明确、营养协调、,PH,值适宜,22,2,）纯化大肠杆菌：,微生物接种方法,平板划线法,稀释涂布平板法,23,平板划线法,：,通过接种环在琼脂,固体培养基表面连续划线,的操作，,将聚集的菌种逐步稀释分散,到培养基的表面，在数次划线后培养，可以,分离到由一个细胞,繁殖而来的细胞群体，即得到,单一菌落,。,24,平板划线法,25,26,稀释涂布平板法：,将菌液进行,一系列的,梯度稀释,，然后将不同稀释梯度菌液,分别涂布在固体培养基,的表面，进行培养。在,稀释度足够高的菌液,里，聚集在一起的微生物将被,分散成单个细胞,，进而,形成单个菌落,。,27,系列稀释操作,1,2,3,4,5,6,(1),将分别盛有,9mL,水的试管灭菌并编号。,(2),用移液管吸取,1mL,培养的菌液，注入第二支试管中，轻压橡皮头，吹吸三次使之充分混匀。,(3),从,10,1,倍稀释的试管中吸取,1mL,稀释液，注入第三支试管中，重复步骤,2,，直至到第六支试管。,28,29,10,-1,10,-4,10,-5,10,-6,30,平板划线法,稀释涂布平板法,相同点：分散出,单细菌形成单菌落,来分离菌种,不同点：分别通过,划线,和,稀释,分散出单细菌，,稀释涂布平板法,除分离菌种外,还可以对微生物计数,31,三、微生物的分离和计数,32,思考：如何寻找和分离某种微生物？,实例,1,：,启示：,寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。,多聚酶链式反应是一种在体外将少量,DNA,大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（,93,0,C,）的,DNA,聚合酶。,如果让你寻找这种耐高温的酶，你会去哪找？,33,启示：,分离菌种要人为提供有利于目的菌株生长的条件,(,包括营养、温度、,pH,等,),，同时抑制或阻止其他微生物生长，即用,选择培养基,来分离菌种。,原因：,因为热泉温度,70,80,0,C,，淘汰了绝大多数微生物，只有耐热菌被筛选出来。,思考：为什么耐热菌能从热泉中被筛选出来？,（一）分离微生物原理：选择培养基分离,34,1,、活菌计数法（通过统计菌落估算活菌数）,原理：,在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。,常用方法：稀释涂布平板法。,每克样品中的菌落数,(CV)M,其中，,C,代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，,V,代表涂布平板时所用的稀释液的体积,(ml),，,M,代表稀释倍数。,（二）微生物计数方法 ：,35,注意事项,统计的菌落往往比活菌的实际数目低。原因是,_,_,。,为了保证结果准确，一般选择菌落数在,30300,的平板上进行计数。,(,细菌：稀释度,10,4,-10,6,；放线菌：稀释度,10,3,-10,5,；霉菌：稀释度,10,2,-10,4,),为使结果接近真实值可将,同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中,，经涂布，培养计算出菌落平均数。,当两个或多个细胞连着一起时，平板上观察到的菌落只有一个。,36,2,、显微镜直接计数法：,利用特定,细菌计数板,或,血细胞计数板,，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。,不能区分死菌与活菌；,不适于对运动细菌的计数；,需要相对高的细菌浓度；,个体小的细菌在显微镜下难以观察,缺点,37,1,、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,（三）实例：,课题背景,1,）尿素的利用,尿素,是一种重要的,农业氮肥。,尿素,不能直接,被农作物,吸收。,土壤中的细菌将尿素,分解成氨,之后才能被植物利用。,2,）细菌利用尿素的原因,土壤中的细菌分解尿素是因为它们,能合成脲酶,CO(NH,2,),脲酶,+ H,2,O,+ CO,2,NH,3,38,3,）常见的分解尿素的微生物,芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。,4,）课题目的,从土壤中分离出能够分解尿素的细菌,统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌,39,15.0g,琼脂,1.0g,尿素,10.0g,葡萄糖,0.2g,MgSO,4,7H,2,O,2.1g,NaH,2,PO,4,1.4g,KH,2,PO,4,土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：,从物理性质看此培养基属于哪类？,固体培养基,40,在此培养基中哪些作为碳源、氮源？,碳源：,葡萄糖,氮源：,尿素,培养基的,唯一氮源为尿素,，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。,4),培养基选择分解尿素的微生物的原理,41,实验的具体操作,.,土壤取样,从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土,3cm,左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。,取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。,.,制备培养基：,制备以尿素为唯一氮源的,选择培养基,。,42,应在火焰旁称取土壤,10g,。,在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行,分离不同的微生物采用不同的稀释度,原因：不同微生物在土壤中含量不同,目的：保证获得菌落数在,30,300,之间、适于计数的平板,三,样品的稀释,43,.,取样涂布,如果得到了,2,个或,2,个以上菌落数目在,30300,的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果,同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确,，需要重新实验。,44,实例,2,：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，,A,同学从对应的,10,6,倍稀释的培养基中筛选出大约,150,个菌落，但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约,50,个菌落。分析其原因。,原因：土样不同 培养基污染或操作失误,(,或者是混入了其他的含氮物质,),45,小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。,方案一：,由其他同学用与,A,同学相同土样进行实验,方案二：,将,A,同学配制的培养基在不加土样,(,或加等量无菌水,),的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。,结果预测：,如果结果与,A,同学一致，则证明,A,无误；如果结果不同，则证明,A,同学存在操作失误或培养基的配制有问题。,46,设置对照：,设置对照的主要目的,是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。,47,纤维素分解菌的筛选（教材,P28,）,选择,_,的环境，采集土样制成样品。将样品接种在以,_,为唯一碳源的选择培养基上培养，目的是增加纤维素分解菌的浓度。采用,_,法,将样品接种到含有,刚果红,的固体的培养基上，挑选产生,_,的菌落来筛选纤维素分解菌。,纤维素丰富,纤维素,稀释涂布平板,透明圈,2,、分解纤维素微生物的分离：,48,实验操作,土壤取样,梯度稀释,将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上（含刚果红）,挑选产生透明圈的菌落,选择培养,(,液体培养基,),49,50,筛选并增大菌种浓度,稀释菌种,51,.,微生物的培养与观察,在菌落计数时，每隔,24h,统计一次菌落数目。,选取菌落数目稳定时的记录作为结果，,以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。,培养不同微生物往往需要不同培养温度。,细菌：,30,37,培养,1,2d,放线菌：,25,28,培养,5,7d,霉菌：,25,28,的温度下培养,3,4d,。,52,微生物的培养与观察,53,三,.,结果分析与评价,1.,通过对照实验，若培养物有杂菌污染，菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。,2.,提示：选择每个平板上长有,30300,个菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适。同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。,54,2,、微生物分离原理：,人为提供有利于,目的菌株,生长的条件,(,包括营养、温度、,pH,等,),，同时抑制或阻止其他微生物生长。,（用选择培养基）,55,（二）纯化大肠杆菌,1,、将准备培养的菌种放到培养基中的过程叫做,_,。,2,、微生物接种的最常用方法是,_,和,_,3,、能够获得单一菌落的接种方法有,_,和,_,4,、能够测定样品中活菌数的接种方法是,_,平板划线法,稀释涂布平板法,接种,平板划线法,稀释涂布平板法,稀释涂布平板法,56,生物,细胞生物,动物 植物 真菌 原生生物,非细胞生物,真核生物,原核生物,细菌 放线菌支原体衣原体蓝藻,病毒,微生物,酵母菌、 霉,菌、蘑菇,57,微生物的实验室培养一、基础知识（一）培养基,1,、,配制培养基的基本原则（确定培养基配,方的依据）,_,2,、多数培养基都含有,_,等四类营养物质，少数微生物还需要加入特殊的营养物质即,_.,3,、,最常用的碳源是,_,；蛋白胨或牛肉膏可以为细菌提供,_,类营养物质,4,、微生物的培养条件主要包括,_,根据微生物的营养需要配制,水、无机盐、碳源、氮源,生长因子,葡萄糖,氮源和碳源,温度、,PH,、渗透压、,O,2,等,笔记,58,例题：下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案,B,体外培养,骨髓瘤细胞,杂交瘤细胞,足够数量的细胞群,注射到,小鼠腹腔,A,C,1,、该实验方案的目的是,_,2,、,A,是从小鼠的脾脏中取得,_,该细胞能够产生,_,3,、取,A,细胞前，必须给小鼠,_,4,、图中,B,为,_,过程，常用,_,作为诱导剂，,制备单克隆抗体,B,细胞 抗体,注射抗原,细胞融合 灭活的病毒,59,例题：下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案,B,体外培养,骨髓瘤细胞,杂交瘤细胞,足够数量的细胞群,注射到,小鼠腹腔,A,C,5,、杂交瘤细胞继承,_,的,遗传特性，既能,_,又能,_,。,6,、,C,过程指细胞培养，该过程包括,_,培养和,_,培养两个阶段。,7,、单克隆抗体的特点是,_,8,、将单克隆抗体与抗癌药物相结合，制成,_,双亲细胞,无限增殖 分泌特异性抗体,原代 传代,特异性强、灵敏度高，并可大量制备,生物导弹,60,5,、选择培养基（笔记）,选择培养基,筛选、分离的细胞,加入青霉素,酵母菌、霉菌,等真菌,加入高浓度食盐,金黄色葡萄球菌,无氮培养基,固氮菌,无碳培养基,自养型,细菌,依标记基因，加入某种等抗生素,导入了,重组,DNA,的受体细胞,加入次黄嘌呤、氨基嘌呤等,杂交瘤细胞,61,培养基成分,含量,NH4Cl,4.6g,K2HPO4,2.0g,MgSO4,1.6g,琼脂,15g,蒸馏水,1000ml,乳糖,5.0g,62,培养基成分,含量,K2HPO4,2.0g,MgSO4,1.6g,琼脂,15g,蒸馏水,1000ml,乳糖,5.0g,NH4Cl,4.6g,蛋白胨,10.0g,63,培养基成分,含量,K2HPO4,2.0g,MgSO4,1.6g,琼脂,15g,蒸馏水,1000ml,乳糖,5.0g,NH4Cl,4.6g,64,培养基成分,含量,K2HPO4,2.0g,MgSO4,1.6g,琼脂,15g,蒸馏水,1000ml,乳糖,5.0g,NH4Cl,4.6g,蛋白胨,10.0g,65,培养基成分,含量,K2HPO4,2.0g,MgSO4,1.6g,琼脂,15g,蒸馏水,1000ml,乳糖,5.0g,NH4Cl,4.6g,66,微生物的分离：科赫的平板划线法,自然界中的微生物都是混杂生活在一起的，给研究和应用带来了很大困难。,19,世纪后期，德国细菌学家科赫发明了,固体培养基,，尤其是用琼脂做凝固剂的固体培养基，成功解决这一问题，科赫,将微生物样品稀释后，用针尖沾取少量稀释菌液在固体培养基上连续划线,，,由于微生物在固体培养基上,生长部位固定,，不久就会在培养基表面长出,多种菌落,，科赫推断相同的菌落来自同一个种，于是挑选某一种菌落的微生物，经过几次相同的培养过程后，就得到了纯种。应用固体培养基，科赫分离出了炭疽芽孢杆菌、霍乱弧菌、结核杆菌等。,1905,年科赫因结核杆菌的研究成果而获诺贝尔生理学奖。,67,68,单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见、具有一定形态结构子细胞群体，叫做,菌落,。菌落是鉴定菌种的重要依据。,69,摸底考试复习安排,阅读笔记,复习学案（重点是自己,不会的、做错的,习题）,作业,2011,高考总复习,-,学生用书,-,生物,P151,161,要求：填写基础知识、例题、考点训练,2011,高考总复习,-,学生卷,-,生物,P107,112,；,P114,116,（去掉,12,、,13,、,19,、,23,、,25,、,30,）,70,1,）,制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,物质,牛肉膏,蛋白胨,NaCl,琼脂,水,重量,5g,10g,5g,20g,定溶至,100mL,称量,按比例称取各种物质，注意事项：牛肉膏要放在称量纸上称量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖,。,计算,71,溶化：,先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加少量水，加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌使之溶解，再加入琼脂，搅拌，待溶解后，加自来水定溶至,100mL,。,灭菌：,将配制好的培养基放到锥形瓶中（瓶口加棉塞，包上牛皮纸），连同培养皿（,3,5,套，用几层报纸包好）一起放到高压锅内灭菌。,72,2,、制备培养基的操作排序,溶化（使各种原料、琼脂等加热溶化）,灭菌 调,PH,值,计算（各成分用量） 称量,倒平板,(,培养基冷却至,50,倒入培养皿,),正确的操作顺序：,_, ,73,为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？,原因：,土壤中各类微生物的数量（单位：株,/kg,）是不同的。例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为,2 185,万，放线菌数约为,477,万，霉菌数约为,23.1,万。,结论：,为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。,74,75,接种环,接种针,结果：,培养一定时间后，该菌数量上升，再通过平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。,76,基因工程,基本工具,操作步骤,基本原理,细胞工程,植物细胞工程,动物细胞工程,植物组织培养,植物体细胞杂交,动物细胞培养,动物细胞融合,单克隆抗体,核移植,原理、过程、条件及应用,77,同化作用与异化作用,新陈代谢,同化作用,异化作用,概念：,摄取转变,自身物质，储存能量,外界环的营养物质,概念：,部分自身物质,分解,终产物，释放能量,排出,体外,类型：,自养型：,异养型：,无机物,有机物,光合作用 化能合成作用,利用,现成,的,有机物,维持生命,类型,需氧型：,厌氧型：,需要,氧气,来分解体有机物,必须生活在,无氧,的环境中,新陈代新类型：自养需氧型,（如：蓝藻、硝化细菌）；,异养需氧型,（如：人）,；自养厌氧型；异养厌氧型,（乳酸菌）,（碳）,78,专题,5,微生物专题,微生物概念及种类,微生物培养,微生物分离和计数,微生物应用,79,增殖方式：二分裂,增殖方式：复制式增殖,增殖方式：出芽生殖,80,思考：,1,、所有的培养基都必须含碳源、氮源、水、,无机盐吗？,2,、培养基中的营养要素，除了水以外的无机,物只能是无机盐？,3,、,CO,2,既自养型生物的碳源也是能源物质？,4,、利用动物细胞培养液培养病毒，行吗？,否；可以无碳源，也可无氮源,否；碳源和氮源也可能是无机物,否；光能或化学能,病毒无细胞结构，只能寄生在活细胞中生存。所以，要利用,活细胞,培养病毒。,81,一、微生物概念及种类,1,、概念：是指自然界中那些形态微小、 结构简单，,通常,要用光学显微镜或电子显微镜才能看清楚的生物。,2,、种类：无细胞结构,病毒,、,原核生物界,（细线支蓝衣）,、,真菌界,（酵母菌、霉菌、蘑菇等）,、,原生生物界,（,草履虫、变形虫等）,3,、代谢特点：异常旺盛,82,微生物所需的营养要素,碳源,氮源,水,无机盐,无机碳源：,CO,2,等,自养型,有机碳源：,葡萄糖等,异养型,N,2,：固氮菌（根瘤菌等）,NH,3,：硝化细菌,其他：铵盐、硝酸盐、尿素、,蛋白胨,特殊营养物质（维生素、氨基酸和碱基等）、,PH,、温度、氧气等,83,