生猪重要疫病样品采集要求与实验室检测意义

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,生猪重要疫病样品采集要求与实验室检测意义,生猪重要疫病样品采集要求与实验室检测意义生猪重要疫病样品采集要求与实验室检测意义,分享内容,实验室检测的重要意义,实验室检测的主要内容,生猪主要疫病样品采集要求与注意事项,其他样品采集要求,实验室检测的重要意义,明确所发生的疾病种类：,传染性因素：细菌、病毒、支原体、其它微生物；,非传染性因素,单纯感染,/,混合感染,是否为人兽共患病,病原分子生物学检测分析,区域优势毒株基因型分析,病原分子进化与演变,病原分子序列与疫苗比对,细菌培养与药物敏感性试验,细菌初步鉴定：毒力、血清型,药物敏感性试验：解决合理用药问题,自家疫苗试制：技术储备,开展抗体检测,疫苗免疫抗体监测与评价,野毒感染状况调查与评价：,PRV,、传胸,免疫程序调整与优化：母源抗体检测,疫病净化评价,类别,免疫场,非免疫场,合计,30头,30头,30头,30头,场 数,18,17,2,6,43,阳性场数,10,6,1,3,20,阳性场占比,%,55.56,35.29,50.0,50.0,46.51,样品数,187,66,22,28,303,阳性数,43,17,7,10,77,样品阳性率,%,22.99,25.76,31.82,35.71,25.41,猪伪狂犬,gE,抗体检测情况统计,实验室检测的主要内容,细菌的染色,形态学观察,培养基的制备,细菌分离培养,纯化,细菌的生化试验,药物敏感试验,病猪的剖检,病猪病料的采集、保存,总,RNA,的提取,反转录,聚合酶链式反应（,PCR,）,猪瘟病毒抗体,猪伪狂犬病病毒,gPI,抗体,(,野毒,),猪流感血凝抑制试验,猪细小病毒病乳胶凝集试验（,LAT,）,猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体,DNA,提取,PCR,血清学检测,分子诊断,细菌分离,结果分析,生猪主要疫病样品采集要求,采样原则,1、,适时采集,：尽可能采集到新鲜样品。用于分离病原体的，须在病初发热期或出现典型临诊症状时采集；若制备血清，空腹时采血。尸体上采样，应在动物死后立即采集。,2、典型采样,：样品具有代表性。选择典型动物，即未经药物治疗、病状典型的动物；选择典型材料，病原体含量最高的材料；尸体采样，采集有病变组织、器官或病变最明显、最典型的部位。,3、合理采样,：群体发病时，至少采,5头动物的病料。每一种样品应有足够的数量。,4、无菌采样,：无菌操作，尤其是供微生物学检查和血清学检查的样品,5、安全采样,：注意人员安全，防止感染，防止病原扩散造成环境污染。,病理剖检,腹部朝上平放,切开四肢,颈部淋巴结,股内则淋巴结,剖检颌、颈部,皮下组织、颌下淋巴结观察,横切胸骨柄，暴露胸腹腔,观察胸腹腔器官变化,纵切胸骨柄,取出胸腔器官,剖开颅腔,暴露脑部,器官,症状,/,病变,疑似疾病,体表,耳尖、屁股、腹部发紫,微循环障碍：猪瘟、弓形体,背部发紫，规则菱形，边缘整体,猪丹毒,全身通红,链球菌,鼻子流血和,/,泡沫,胸膜肺炎,背部点状出血、毛孔出血、皮肤发白,附红细胞体、蓝耳病,会阴、臀部、四肢出现周边紫色，中间白色圆形、边缘紫褐色纽扣状坏死,圆环病毒,依据剖检病变推导可能发生疫病,淋巴结,颌下淋巴结肿大，出血性坏死,全身淋巴结有大理石样出血变化,腹股沟浅淋巴结水肿、切口外翻，表面苍白，渗出透明液体,咽、颈及肠系膜淋巴结黄白色干酪样坏死灶,淋巴结充血、水肿、小点状出血,支气管淋巴结、肠系膜淋巴结髓样肿胀,猪炭疽、链球菌病,猪瘟、蓝耳、猪肺疫,圆环病毒,2,型,猪结核,急性猪肺疫、猪丹毒、链球菌病,猪气喘病、猪肺疫、传染性胸膜肺炎、副伤寒,血液,血液黑或发紫，不凝固,中毒，内源性毒素：弓形体、胸膜肺炎、链球菌、猪丹毒,血液不凝固、稀薄,贫血，蓝耳、附红细胞体,呼吸道,喉头出血,猪瘟,扁桃体化脓、出血,猪瘟、伪狂犬,喉头有泡沫,蓝耳、副猪、传胸,气管有很多粘液,细菌性疾病,肺,出血斑点,纤维素性肺炎,心叶、尖叶、中间叶肝样变,水肿，小点状坏死,粟粒性、干酪样结节,表面零星、边界清楚、湿润肉样变,猪瘟,猪肺疫、传染性胸膜肺炎,气喘病,弓形体病,结核病,流感,心脏,心包积液,心包炎、心外膜炎（绒毛心）,心外膜斑点状出血,心肌条纹状坏死带,心内膜出血,心瓣膜呈菜花样,心肌内有米粒大灰白色包囊泡,副猪、传胸,副猪、传胸、气喘病,猪瘟、猪肺疫、链球菌病,口蹄疫,败血症,链球菌、慢性猪丹毒,猪囊尾蚴病,肝,淤血肿大,沙门氏菌,表面灰白色或灰黄色纤维素,沙门氏菌病、副猪、大肠杆菌,白色坏死点，,弥漫性坏死,沙门氏菌、伪狂犬、,霉菌毒素、中毒,脂肪肝,传染性胃肠炎、流行性腹泻、仔猪大肠杆菌,胆囊肿大、胆汁粘稠,沙门氏菌,胆囊肿大，胆汁呈黄色泥状,圆环病毒,脾,脾边缘有锯齿状出血、,梗死,弥漫性出血,淤血肿大，坏死,脾边缘有小点状出血,猪瘟,、仔猪副伤寒,猪瘟、猪丹毒、弓形体、猪肺疫,弓形体病，,霉菌毒素中毒（全）,仔猪红痢,胃,胃粘膜斑点状出血，溃疡,胃粘膜充血、卡他性炎症，呈大红布样,/,麦麸状假膜,粘膜下水肿,胃壁增厚,猪瘟、胃溃疡,猪丹毒、食物中毒,副伤寒,水肿病,水肿、大肠杆菌、魏氏梭菌,肠,乳糜管内无脂肪、出血,病毒性腹泻,乳糜管内有脂肪,细菌、球虫或营养性腹泻,肠壁有白色绿豆大肉芽肿、淋巴滤泡增生,沙门氏菌、食道线虫（大肠）、球虫（结肠、盲肠）,浆膜出血,猪瘟,回盲瓣出血、坏死，盲肠扣状肿,猪瘟,肠粘膜出血,流感、梭菌性肠炎、增生性肠炎,肾,苍白，针尖状出血,猪瘟、伪狂犬,淤血、肿大,猪丹毒、梭菌、链球菌（,紫红色、红棕色,）；蓝耳（,紫黑色,）；增生性肠炎,（灰黑色，肾乳头淡黑色）,灰白色、表面隆突不平,圆环病毒,膀胱,粘膜层有出血斑点,猪瘟,睾丸,1,个或,2,个睾丸肿大、发炎、坏死或萎缩,乙型脑炎、布氏杆菌病,关节,肿大、积液,副猪、链球菌,依据病种确定主要采集病料,病名,病原,主要临床症状,特征病理变化,主要病料采集,实验室诊断,猪瘟,HCV,体温,41,左右，脓性结膜炎， 皮肤红斑点，指压不退色，先 便秘后腹泻，公猪包皮囊积尿， 小猪多有神经症状。,实质器官多发性出血性为特 征的败血症病变，肾脏有出 血点或斑，尿道、膀胱、喉 头均有出血点，脾脏边缘梗死。,扁桃体、淋巴结、脾脏、,肾脏和血清,接种,PK15,细胞、分离病毒；,ELISA,、,RT-PCR,、,GIA,检测病原,猪繁殖与呼吸障碍综合征（蓝耳病）,PRRSV,母猪流产，早产，死胎，木乃伊胎。胎儿大小比较一致，少数病猪双耳、尾部等发生短暂性皮肤紫绀。哺乳仔猪呈结膜炎，呼吸障碍及流鼻涕。青年 猪见呼吸道症状。,间质性肺炎；肺水肿；淋巴 结肿大呈褐色。,病猪的肺、流产胎儿的肠和腹水、母猪血清、鼻拭子、粪便、扁桃体、脾、淋 巴结,接种,Marc-145,细胞,分离鉴定；,ELISA,方法检测抗体；分子生物学,RT-PCR,病名,病原,主要临床症状,特征病理变化,主要病料采集,实验室诊断,猪伪狂 犬病,PRV,引起怀孕母猪流产，以死胎为主。仔猪也可出现体温升高，呼吸困难，下痢和特征性神经症状，,15,日龄以内仔猪易感， 病死率可达,100%,。,木乃伊胎或死胎重吸收。扁桃体白色溃疡或坏死灶，肝脏表面白色坏死点，脾脏白色坏死灶。脑部水肿等。,扁桃体、脊髓、淋巴结、 脑组织,动物试验；接种,vero,细胞分离病毒；,PCR,检测病原。,猪圆环病毒病,PCV2,被毛粗乱，喜挤堆，精神沉郁， 呼吸急促，皮肤苍白，腹泻，消瘦。,淋巴结异常肿大、切面为白色。脾脏肿大，肾脏肿大呈土黄 色，并有散在的红色坏死斑 点，肺脏质地较硬似橡皮。,肺脏、淋巴结、肾脏,分子生物学,PCR,病名,病原,主要临床症状,特征病理变化,主要病料采集,实验室诊断,流行性腹泻,PEDV,水样腹泻，或者在腹泻之间有呕吐。呕吐多发生于吃食或吃奶后。一周龄内新生,仔猪,发生腹泻后,34,天，呈现严重脱水而死亡，死亡率可达,50%,，最高的死亡率达,100%,。,小肠扩张，内充满黄色液体，肠系膜充血，肠系膜淋巴结水肿。,粪便、肠内容物,接种,Vero,细胞，分离病原，,RT-PCR,检测。,传染性胃肠炎,TGEV,一般,2,周龄以内的仔猪感染后,12-24,小时会出现呕吐，继而出现严重的水样或糊状腹泻，粪便呈黄色，常夹有未消化的凝乳块，恶臭，仔猪明显脱水，发病,2-7,天死亡，死亡率达,100%,；在,2-3,周龄的仔猪，死亡率在,0-10%,。,主要病变在胃和小肠，呈现充血、出血并含有未消化的小凝乳块，肠壁变薄。,肠、肠内容物,接种,PK15,细胞分离病毒，分子生物学,RT-PCR,病名,病原,主要临床症状,特征病理变化,主要病料采集,实验室诊断,口蹄疫,FMDV,猪口腔粘膜、鼻吻部、蹄部以及乳房皮肤发生水疱和溃烂为特征。不同年龄的猪易感程度不完全相同，一般是越年幼的仔猪发病率越高，病情越重，死亡率越高。,仔猪心肌炎。,水泡皮、水泡液、心脏、血清,ELISA,检测抗体,猪流感,SIV,发病初期病猪体温突然升高至,40.3,41.5,，厌食或食欲废绝，极度虚弱，常卧地。呼吸急促、腹式呼吸、阵发性咳嗽。从眼和鼻流出粘液，鼻分泌物有时带血。病猪挤卧在一起，难以移动，触摸肌肉僵硬、疼痛，打嗝。,剖检可见喉、气管充满含有气泡的黏液，黏膜充血，肺间质增宽，淋巴结肿大、充血，脾肿大，胃肠黏膜有卡他出血性炎症，胸腹腔、心包积液。,肺、脾、淋巴结、血清、鼻拭子,接种,vero,细胞、鸡胚分离病毒，分子生物学,RT-PCR,供病原学检查材料的采集、处理,1,、血液。前腔静脉或耳静脉采血。,2,、分泌物和渗出液：采集口腔、鼻腔、喉气管、泄殖腔和阴道分泌物时，通常是将棉棒插入天然孔反复旋转后蘸上分泌物，然后将样品端剪下。,3,、淋巴结、内脏器官、肌肉：淋巴结连带周围脂肪整体采集；内脏器官和肌肉，通常取病变最明显的部位。,4,、水疱皮：将病变部位清水清洗，剪取新鲜水疱皮,3,5g,放入灭菌小瓶内,5,、肠管：选取至少,6cm,肠管，两端结扎，从结扎线外端稍远端剪断。,以上病料采集后，立即放入灭菌的玻璃容器，密封，外贴标签。做细菌学检查的，尽快冷藏。做病毒学检查的，尽快冷冻或加入病毒保护液。常用的病毒保护液：含抗生素的磷酸盐缓冲液、,50%,甘油磷酸盐缓冲液。,供血清学检查材料的采集、处理,（,1,）采血。用于制备血清的血液采出后不加抗凝剂，不进行脱纤处理。大中动物每头不少于,5ml,。,（,2,）制备血清。采血时使血液直接流入试管，加塞，立即摆成斜面，待血液凝固后竖起试管，使血清自然析出。也可将血液离心分离血清。,作血清学检测的血液，在采集、运送、制备血清过程中，均应避免震动和冻结，防止溶血，影响检测结果。,（,3,）血清保存。制备的血清若能在一周内检测，,4,冷藏，若需保存较长时间，应于,30 ,冻结。,猪的前腔静脉采血方法,猪只的固定。公母猪用保定绳固定，要求尽可能吊得高一点，使猪的头颈与水平面呈,30,度以上角度,(,如图,1),，这样，即方便采血人员察看采血部位，又使前腔静脉向外突出，静脉血充胀。,20kg,以上的中大猪，由,1-2,个饲养员用捉猪器,(,或保定绳,),拉住，头昂起，偏向右侧,(,如图,2,、,3),；,20kg,以下的小猪，可由,1-2,个饲养员抓起，倒立，后背紧靠在栏架上,(,如图,4),。,图,1,公母猪保定,图,2,中猪固定和采血,图,3,大猪固定和采血,图,4,小猪的保定与采血,选取合适的针筒和针头。,根据经验，公母猪宜选用,16#,50mm,针头,(,这种针头猪场不常用，但很多针头生产厂家都有生产，可以找兽医药械销售店联系购买,),；,30kg,以上的中大猪，宜选用,12#,38mm,针头；,10-30kg,小猪，可选用,9#,25mm(,一次性注射器常配的针头,),；,10kg,以下乳猪，应选择,9#,20mm,针头,(,一次性注射器所配的另一种规格的针头,),找准下针部位。,猪的前腔静脉，越往头部越浅，但也越细；越靠胸部越粗，但越深。所以，采血应选择适当的部位。小猪取血的部位太靠前，血管太小，很难扎中，而且扎中了也很难抽到血液，所以，小猪的采血部位应稍靠后。中大猪和公母猪血管比较大，往后太深，针头够不到血管，所以，应略靠前。根据我们的经验，,20kg,以下的小猪应采两前肢与气管交汇处,(,如图,4),，公母猪和,20kg,以上中大猪可选颈部最低凹处,(,如图,2,、,3,）。,下针和抽血。,小猪：,对准以上描述的部位，用针垂直刺入。拉紧针筒活塞，若针头扎中前腔静脉，可见到血液自血管源源流出，抽取所需的血量即可。,公母猪和中大猪：,对准下针部位，使针头偏向气管约,15,o,方向下针，拉紧针筒活塞，若扎中，可见血液流出。如果见不至血液流出，说明没有扎中，有可能是前腔静脉较深，可用手顶紧针筒，使针头扎深一点。,处理好所采的血液。,采到血液后，应立即将注射器内的血液沿着贮藏血液的容器（试管或青霉素空瓶）徐徐注入，不能有气泡，也不能振荡，同时倾斜放置好。也可放在注射器内倾斜放置好后送检。若要送检血清，夏天在常温下放置一段时间，冬天要放置在,25,37,温水中一段时间，以利血清析出。若需抗凝全血，在注射器或试管内需预先加入抗凝剂。,耳静脉采血方法,1),将猪站立或横卧保定，或用保定器具保定。,2),耳静脉局部按常规消毒处理。,3)1,人用手指捏压耳根部静脉血管处，使静脉充盈、怒张（或用酒精棉反复局部涂擦以引起其充血）。,4),术者用左手把持耳朵，将其托平并使采血部位稍高。,5),右手持连接针头的采血器，沿静脉管使针头与皮肤呈,300,450,角，刺入皮肤及血管内，轻轻回抽针芯，如有回血即证明已刺入血管，再将针管放平并沿血管稍向前伸入，抽取血液。,实验室检测策略,以前：,我们的误区,猪群发病了，采发病猪的血，化验。,结果：无所适从。,结论：化验无用，没有帮助。,缺乏,有效,的实验室支持，是造成盲目用药、,用苗的原因之一,服务承诺,服务口号：,快速、高效、及时,服务承诺：,对于已有检验方法的检验项目，,48,小时,内给出准确检验结果；,对于尚无检验方法的项目，,5,个工作日,内给予相关疫病的分子检测检测结果；,对使用过我公司研发的试剂盒的客户，,第一时间,安排专职的研究人员，提供全程技术支持服务；,人有了知识，就会具备各种分析能力，,明辨是非的能力。,所以我们要勤恳读书，广泛阅读，,古人说“书中自有黄金屋。,”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识，,培养逻辑思维能力；,通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平，,培养文学情趣；,通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。,有许多书籍还能培养我们的道德情操，,给我们巨大的精神力量，,鼓舞我们前进,。,