圆环、蓝耳 概述

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,圆环、蓝耳,付应舟,QQ1163659782,E-mail fu.,1,一、PCV2病原学,90年代 PK-15细胞培养污染面的PCV成为PCV1（非致病性病毒）,99年 新出现的PCV命名为PCV2（致病性病毒）,PCV2属于圆环病毒科 圆环病毒属,病毒粒子直径为14-17nm，为已知最小的动物病毒之一,2,一、PCV2病原学,呈20面体对称结构，无囊膜,含有共价闭合的单股环状负链DNA,基因大小为176kb,核苷酸数为1767-1768个,全球这种病毒的抗原决定簇核苷酸序列的同源性高达93%,3,一、PCV2病原学,对外界理化因子抵抗力相当强,病毒耐酸，在PH为3的环境下仍可存活,耐氯仿，70的环境下可存活15分钟,市售消毒剂如：双氯苯双胍己烷、福尔马林、碘酒、酒精等作用下10分钟，病毒滴度有所下降，但不能完全灭活,可使动物红细胞凝集，无血凝活性,4,二、PCV2流行病学,在自然界广泛存在,猪科动物是自然宿主，猪科外动物不易感,口鼻接触是PCV2的主要自然传播途径，经鼻内接种妊娠母猪或人工授精方式尝试使胎儿感染PCV2，结果感染效果不确切,PCR法可检测到PMWS感染猪粪便和分泌物及田间28周龄猪血清中的PCV2核苷酸,去势后的公猪教母猪易感PMWS,PMWS虽由多种原因引起的疫病，但与PCV2感染分不开,不同品种的遗传性有影响，长白猪较杜洛克、大白猪更易感,5,三、PCV2致病机理,目前尚未得知体内支持PCV2复制的细胞,但在猪巨噬细胞和树突状细胞中发现大量的PCV2抗原，据推测是聚集场所而不不能确认为复制场所,PCV2对免疫系统的影响具有重要的作用,实验表明：一些病毒或非感染因子刺激或激活PCV2感染猪体内免疫系统后，PCV2的复制水平提高，同时血清组织中的抗体滴度升高，淋巴组织病变显著提高，导致PMWS,发病后，淋巴组织细胞动力学改变，发生免疫抑制状态,6,三、PCV2致病机理,感染PMWS后，PCV2与猪天然干扰素分泌细胞（NIPC）相互作用，使干扰素分泌持续减少，体内干扰素含量持续下降，导致非正常的免疫应答,目前认为，高滴度的PCV2会发生PDNS,7,四、PMWS临床症状与病理变化,PMWS较易侵袭1-4月龄的猪，发病率一般为5-30%（有时达50-60%）发病猪死亡率5-30%,症状：消瘦、皮肤苍白、呼吸困难、有时腹泻、黄疸、在早期出现皮下淋巴结肿大，更早期呈现淋巴结大小正常或萎缩，胸腺也常常发生萎缩,淋巴结组织病理学变化特征：淋巴细胞减少、大量组织细胞及多核巨噬细胞浸润、胸腺皮质萎缩、组织细胞及树突状细胞内通过显微观察可见胞内病毒包涵体,8,四、PMWS临床症状与病理变化,间质性肺炎、支气管周围纤维化、肝脏肿大或萎缩、变白变硬、表面有颗粒状物覆盖、显微下可见大面积细胞病变及炎症,疫病后期无明显特征的黄疸,9,四、PDNS病理变化,猪肾皮质表面出现白点（非化脓性间质性肺炎）,表现为坏死性脉管炎,死于PDNS的猪病理变化一般为双侧肾肿大，肾盂水肿，肾小球肾炎，脾脏梗死,10,11,12,13,五、PCV2免疫学特征,猪群感染PCV2后，血清转化一般发生在感染后14-28天,14,六、PCV2诊断要点,PMWS,生长缓慢、消瘦、持续呼吸困难、腹股沟淋巴结肿大、有时发生黄疸,淋巴结组织呈现病变,病变淋巴结组织或其他组织有中等以上PCV2抗原,15,六、PCV2诊断要点,PDNS,皮肤出血或坏死、主要出现在后肢及会阴区域；肾肿大、发白及皮质大面积出血,全身有坏死性脉管炎，坏死性及纤维素性肾小球肾炎,16,六、PCV2诊断要点,繁殖障碍性疾病,怀孕后期的流产或死胎，有时可见明显的心肌肥大,心肌损伤，表现为大面积的纤维组织增生或坏死性心肌炎,心肌损伤及其它死胎组织检测到PCV2,17,七、PCV2检测方法,原位杂交法（ISH）,免疫组织化学（IHC）,血清学检测法存在的问题：因为感染PMWS猪和非感染猪的血清转化形式非常相似,18,八、PCV2主要危害,PMWS；,PDNS；,CT；,繁殖障碍,19,九、PCV2的预防和控制,控制环境和其它细菌及病毒感染可降低PMWS发生率,研究证明，免疫激活在引发PMWS中是一个重要因素,实际生产中，停止使用有效疫苗的风险比导致较低比例的PMWS的风险大得多，免疫激活的因素不能消除,研究结果表明增加母源抗体可使PMWS的发生率下降，饲料中增加亚油酸、VE、Se也有效,某些猪场哺乳仔猪皮下注射成年猪血清也有效，但带来严重的生物安全问题,疫苗的免疫接种（最有效、也切实可行）,20,十、PCV2 疫苗类型,全病毒灭活疫苗,重组疫苗,DNA疫苗,嵌合感染性DNA克隆疫苗,基因工程Cap亚单位疫苗,21,PRRSV概述,PRRSV属套病毒目成员，动脉炎病毒科,有囊膜正链小RNA病毒,直径50-65nm,表面相对平滑,立方体核衣壳核心直径25-35nm,22,一、病毒基本生物学特征,基因多样性：RNA序列差异,对肺泡巨噬细胞(PAM)有强亲嗜性,抗体依赖性增强作用(ADE),在PH6.5-7.5条件下稳定,具有高度的宿主依赖性,母体病毒穿透胎盘垂直传播,持续感染且与猪只年龄无关,23,二、PRRSV的基因测序研究,一个农场可能存在多种基因型的PRRSV,不同基因型的蓝耳病毒重组的可能性较大,研究表明全病毒弱毒疫苗毒力可能返强,使人们更好地理解了PRRSV毒力减弱或毒力返强的分子基础,研究发现毒力基因，基因反向遗传技术进行PRRSV基因功能研究，确立毒力基因,24,三、PRRSV致病机理,主要在肺泡巨噬细胞及其它组织的巨噬细胞中生长繁殖，也能在公猪的睾丸生殖细胞（精细胞、精母细胞、多核巨细胞）中生长繁殖,主要通过内吞作用进入宿主细胞：PRRSV通过核衣壳以出芽方式进入滑面内质网、高尔基体或者两者的管腔而完成装配过程，装配完成后，病毒粒子在囊膜内聚集并迁移到细胞膜，经过膜融合后释放，在一步生长条件下培养10-20小时，滴度可达10,7.3,25,四、PRRSV基因组结构,基因组长为15Kb，含有8个开放性阅读框（ORFS）,ORF1a和1b占整个基因组的80%，并编码所必需的RNA复制酶,NSPS为ORF1a和1b的翻译产物，在PRRSV的复制中发挥作用外，在该病的诊断和宿主的免疫反应中有一定作用,NSP2含有大量的抗原决定簇，可以被感染宿主的免疫系统所识别,26,四、PRRSV基因组结构,1996年-2006年在我国流行毒株为经典美洲毒株,NSP2,27,2006年以来流行毒株为高致病性毒株,NSP2缺少90个核甘酸,四、PRRSV基因组结构,28,四、PRRSV基因组结构,NSP2缺失360个核甘酸（包含主要毒力基因）,NSP2缺少90个核甘酸,易蓝净采用的高致病性基因缺失毒株,29,五、PRRSV结构蛋白,PRRSV有6-7个结构蛋白，其中三个主要的结构蛋白分别为GP5，M，N,N蛋白较小，但在感染细胞中N蛋白的表达水平最高，占病毒粒子总蛋白的20-40%，影响rRNA前体形成，进而影响核的复制,N蛋白在免疫遗传和免疫保护方面作用不大，但由于表达水平较高，故抗原性较好，因此可作为诊断分析的理想靶位,30,六、PRRSV基因的多样性,临床表现,证实肺毒力或复制毒力的不同,通过检测多克隆和单克隆抗体而确定抗原差异,RNA序列的差异,同一个猪场可能存在多种基因型的PRRSV,欧洲以1型为主、美洲以2型为主,1型和2型的基因重组可能性较小，反之较大,31,七、PRRSV流行病学,普通弱毒疫苗的应用使人们难以评价其流行性，因为很难区分检测到的抗体是疫苗抗体还是野毒抗体,普通弱毒疫苗使用后病毒排出体外并在环境中传播，使得与野毒的区分更加困难,猪科动物均为易感动物,排毒途径：唾液、鼻涕、尿液、粪便、精液、乳汁等,传播途径：鼻腔、肌肉、口腔、子宫、阴道，肌肉感染只需20个病毒粒子可使猪感染发病，肌肉感染包括剪耳、断尾、剪牙、打烙印、注射等标准操作程序，也包括猪只之间撕咬、刮擦、咬耳、咬尾等,32,七、PRRSV流行病学,研究表明，节肢动物对PRRSV的传播有一定作用，在野生苍蝇和蚊子的体内或体表检测到了PRRSV，可发生机械传播,垂直传播，病毒对胎盘的穿透力与病毒的毒力无关,持续感染，动物感染后，能在敏感细胞内复制几个月而不表现出症状，这是最为重要的流行病学特征,33,七、PRRSV流行病学,持续感染与猪的年龄无关,PRRSV对热和干燥敏感，遇热或干燥病毒迅速失活,PRRSV在PH6.5-7.5的条件下稳定，当PH6或7.5时迅速丧失感染力,猪场内传播：一旦感染PRRSV往往在一个猪场内无休止地循环传播，不断感染易感猪初生猪、购入猪、免疫抑制猪群,34,35,36,37,38,39,40,蓝耳病疫苗的类型,第一代 经典毒株灭活疫苗,第二代 经典毒株弱毒疫苗,第三代 高致病性毒株灭活疫苗,第四代 高致病性毒株弱毒疫苗,第五代 高致病性毒株基因缺失弱毒疫苗,41,易蓝净 基因组结构图,NSP2缺失360个核甘酸（包含主要毒力基因）,NSP2缺少90个核甘酸,易蓝净采用的高致病性基因缺失毒株,42,