资源描述
*,*,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,LightCycler,480,实时荧光定量,PCR,系统及其应用,精准源于设计，极速出自创新,罗氏应用科学部,实时定量,PCR,仪发展简史,198,5 Kary Mullis,发明了,PCR,技术,1991,Hoffmann-La Roche,公司获得全球,PCR,专利权,1993,罗氏分子系统公司,Russell Higuchi,发明实时定量,PCR,仪,1993,Kary Mullis,因发明,PCR,技术而获得诺贝尔化学奖,199,5,罗氏诊断公司推出后来成为,PCR,诊断行业金标准的,COBAS Amplicor,分,析仪,1999,罗氏诊断,公司应用科学部推出,LightCycler,全自动实时定量,PCR,系统,2005 LightCycler,全自动实时定量,PCR,系统全球销量突破,5000,台，成为全球,销量最大的单型号实时定量,PCR,系统,2005 LightCycler,480,实时定量,PCR,仪器上市,2007,目前至今，罗氏诊断公司拥有,PCR,相关专利上千项，占全球,PCR,专利的,90%,以上。,2,LightCycler,1.0Instrument,32,3,20,Sample number,Detection channels,Sample volume l,LightCycler,1.5Instrument,32,3,20,LightCycler,480 Instruments (I, II),96 / 384,5 / 6,10 - 100 / 5 - 20,1998,2003,2005 / 2008,2004,LightCycler,2.0 Instruments,32,6,20 / 100,Breakthrough to higher Throughput,LightCycler,系统发展回顾,A Decade of Real-Time PCR Speed and Performance,3,仪,器,试,剂盒,预,制探针,可,更换温控模块,多,孔板,模,块化软件,LightCycler,480,荧光定量,PCR,系统：,系,统构成,4,LightCycler,480,荧光定量,PCR,系统,独有的,Therma-Base,TM,技术,提升导热效率，提高,孔间温度均一性,银质散热块,加快降温速度,加长光路系统,改进光学检测的边缘效应,快速，高效，均一，无需内参,创新的技术改良以获得业内最好的性能,5,微孔板模块（银制）,Peltier,半导体加热单位,冷却装置（银制）,热盖,温度高度均一性，孔间温度的精确度,0.1,快速冷却和加热速度,(,H,eating:,(4.8) ,C/s,- Cooling:,(2.5)C/s,),整个板的精确,PCR,结果,96孔模,式, 1 hour,384孔,模式, 40 min,Therma-Base,TM,温控系统构成,6,多,孔板座,Therma-Base,层,散,热鳍,封闭的真空夹层，内壁为灯芯式结构，,存贮工作液,通,过蒸发和凝结过程快速传热, 使,得,PCR,循环快速而精确,!,Peltier元,件,LightCycler,480,荧光定量,PCR,仪,散,热元件：,Therma-Base,7,LightCycler,480,普通实时定量,PCR,仪,热均一性,不同仪器比较,8,LightCycler,480,荧光定量,PCR,仪温控系统,无,Therma-Base,有,Therma-Base,mdr1-e26*,cyp2C9-e3*,cyp2C9-e7*,热均一性对实验结果的影响,温控的均一性保证了各个反应样品扩增的均一性，极大降低了检测误差率！,9,快速循环模式,更快地升降温，提高反应速度，缩短反应进行的时间,单位时间内检测的工作量增大，实现更加快速的结果检测！,10,快速循环模式,更快地升降温，缩短了可能的非特异性结合，提高,PCR,的特异性,Amplification of a 536 bp,-globin fragment,from genomic DNA,Time (hr),Sample Temperature (C),Gel,Analysis,Time for 30,Cycles (hr),Temperature Profiles,536 bp,利于,PCR,体系的优化！,11,典型的,96,孔板式的顶部光路系统,CCD,相机,光源,由于光程差,激发光从顶部发出到达每孔的强度不一样，中心强度高于边缘，需要加入内参照来校正,光密度不一样,光学系统,顶部照射产生的边缘效应,12,滤,镜轮,CCD,相,机,多,孔板,物,镜,利用优化的光学检测元件,（,液态光导元件，光通路元件,滤光片和,冷CCD,光通路元件）将激发光源通过液态光导元件后变成均一的适合微孔板形状的光线,均一的激发和检测，无光程差,无需内参照,荧光校正（,ROX,）,采用折叠光路增加光程，降低激发高度,LightCycler,480,光路系统,氙,灯,CCD相,机,5,个激发通道,6,个检测通道,优化光学组件排列设计,均,一的激发及检测过程,13,LightCycler,480,一大特色就是：,从来无需内参染料,数,据生成,(热,循环模块,),数,据检测,(光,学系统,),数,据分析,(软,件系统,),每一个步骤都足够准确,！,内参染料,14,UPL probes,10,10, 10,0,copies,LightCycler,480,与临床检测,定量：动态范围,无论是强阳性样品还是弱阳性样品均能轻松同时检测！,15,LightCycler,480,与基因表达调控,微量样品的区分,精确区分,1000,拷贝与,2000,拷贝,置信度达到,99.8%,是同类仪器的,5,倍以上,（其他,5000,拷贝和,10000,拷贝）,高分辨率有助于对于样品的精细分析！,16,LightCycler,480,与基因表达调控,微量样品的定量检测性能,微量样品基因表达调控分析,干细胞研究、激光显微切割,以,micro RNA,的,qPCR,检测性能为例：,在,LightCycler,480,上检测,1,、,5,、,10,、,50,个细胞的,microRNA,表达差异，实验结果与预期结果很好地吻合,即使是微量样品的检测分析也是轻松自如！,17,96 Samples,R/R: wild type,CGG/CGG,R/W: wt/mut2,(CGG)/(,T,GG),R/Q: wt/mut1,(CGG)/(C,A,G),Q/Q: mutant 1,(C,A,G)/(C,A,G),W/W: mutant 2,(,T,GG)/(,T,GG),LightCycler,480 性,能,两,个邻近,SNP,的,区分,18,可互换的热循环模块,自己动手,DIY,，快速方便,随机附送装载箱，便于更换模块,无需厂家工程师在场,无需重新校准,更换完毕后仪器自动检测并确认模块型号,LightCycler,480,荧光定量,PCR,仪,96,孔,模块与,384,孔,模块互换,19,结合,MagNA,Pure 2.0,全自动核酸提取系统，实现更短的实验转换时间,优化的实验和数据处理流程,2,小时内完成从核酸纯化到,PCR,鉴定的所有工作，而传统流程需要,6,小时甚至一个工作日,LightCycler,480,荧光定量,PCR,系统,和全自动核酸提取系统联用,20,LightCycler,480,荧光定量,PCR,系统,结合自动机械臂实现,自动装板,E.g., Twister II Plate Handler (Caliper Life Science),21,可配机械臂，自动化分液装置,可配备读码器,可配备,LIMS,可配备全自动的,PCR workflow,系统,试剂选择范围广,LightCycler,480,荧光定量,PCR,仪：,与自动化流程整合,22,LightCycler,480,荧光定量,PCR,系统,全,能,可,更换热循环模块：,96 384,可,采用多种样品数及体积：,96,（,10-100 l,）；,384,（,5-20 l,）,用,不同光学滤镜组合可检测多种荧光染料：,6,个检测通道,可,选多种检测模式：,适用目前所有的检测模式,方,便强大的软件工具,模,块化软件,高,速,快,速热循环：,H,eating:,(4.8) C/s,- Cooling:,(2.5)C/s,高,性能试剂,定,制耗材,23,LightCycler,480,荧光定量,PCR,系统,准确,数据生成,:,全新的均一温控循环系统,数据捕获,:,优化的均一检测光学系统,数据分析,:,智能、可靠的算法,与仪器完美配合的耗材,自,动化,预,装软硬件随时整合自动化设备,LIMS/条,码模块,带,条码的多孔板,24,We Innovate Healthcare,25,
展开阅读全文