《细胞生物学技术》课件复苏冻存细胞

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,原代肾细胞培养,(,二,),-,观察细胞,结果观察,有无污染（是否浑浊，或有颗粒样物质）,常见污染病原体,:,细菌,支原体,真菌,常见污染原因,:,取材,环境,操作,是否形成单层,细胞形态,如果有杂质看不清细胞，先换,维持液（上次课配制的）,后观察。,(1),从液氮中取出冻存的细胞，夹住上端，立即放入,37,水浴中快速解冻。,（,2,）,1000rp/10,离心,5,分钟。,（,3,）无菌操作下开瓶，弃上清液。加生长液（在大离心管中）约,1ml,轻轻悬浮细胞团,（洗）,，移入离心管中，混匀。,1000rp/10,离心,5,分钟。,（,4,）无菌操作下开瓶，弃上清液。,加,1ml PBS,液悬浮，,0.9ml,移入含,0.4%,台盼兰,100ul,管中（做死细胞鉴定）。染,10-15,分，细胞计数。,加生长液（在培养瓶中）约,1ml,轻轻悬浮细胞团，移入到培养瓶中， 轻轻混匀。加,10ml,生长液，培养。,（这一步不做）,解冻冷冻保存细胞,(,细胞复苏）,（,1,）解冻时务必注意安全，预防冷冻管爆裂。要带手套，用镊子将细胞冷冻管从液氮中取出，放入,37,水浴中。切不可直接用手，以免冻伤。（,2,）快速解冻。冻存细胞从液氮中取出后，应立即放入,37,水浴中，轻轻摇动冷冻管，使其在,1,分钟内全部融化（不要超过,3,分钟）。,（,3,）冷冻管在水浴中解冻时，液面不可超过冻存管盖面，否则，易发生污染。,（,4,）解冻操作过程动作要轻。由于冷冻保存过的细胞变得非常脆弱，不仅解冻速度要快，而且动作要轻。,冷冻保存细胞的解冻与复苏要点,