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,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,二、动物细胞工程,动物细胞培养,动物细胞核移植,动物细胞融合,生产单克隆抗体,动物细胞工程常用的,技术手段,其中，,动物细胞培养,技术是其它动物细胞工程技术的基础。,(,一,),动物细胞培养和核移植技术,1,、,动物细胞培养,概念,:,就是从动物机体中,取出相关的组织,将它分散成单个细胞，然后,放在适宜的,培养基,中,让这些细胞,生长和增殖,。,在无菌和人工控制的条件下,将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工控制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。,植物组织培养,2,、动物细胞培养的过程,:,（,1,）选材：,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,（,2,）分散成单个细胞,它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养。,成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养。,动物,组织细胞间隙,中含有一定量的弹性纤维等,蛋白质,，它们与细胞一起，形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。,（,3,）在动物细胞培养过程中，为什么要用胰蛋白酶对取出的动物组织进行处理？,（,4,）动物细胞生长特性,细胞的接触抑制：,当贴壁细胞分裂生,长到表面相互接触时，细胞就会停,止分裂增殖，这种现象称为细胞的,接触抑制。,细胞贴壁：,悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称细胞贴壁。,要求：,培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。,培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？,当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞分裂就会停止分裂增殖，这种现象叫接触抑制。,如此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？,将贴满细胞壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后继续增殖。,原代培养：,从机体取出组织用胰蛋白酶消化后进行的初次培养。,(5),培养阶段：,传代培养：,将,原代细胞,从培养瓶中,取出,，重新用胰蛋白酶处理，配制成细胞悬浮液，然后，,分瓶继续培养,，让细胞继续增殖，称为传代培养。,传代培养的细胞能一直传代下去吗？,不都能,传代培养的细胞一般传至,10,代后就不易传下去,了，一般来说，细胞在传至,10,50,代左右,时，增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，这时,部分细胞的细胞核型可能发生变化,，当继续传代培养时，少部分细胞会克服细胞寿命的自然极限，获得不死性。,所以，目前,使用的或冷冻保存,的正常细胞通常为,10,代以内,，以保持细胞正常的二倍体核型。,培养过程：,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,细胞悬浮液,胰蛋白酶,10,代细胞,原代培养,50,代细胞,传代培养,细胞株,无限传代,细胞系,单个细胞,加,培养液,遗传物质,未改变,遗传物质,改变,动物细胞培养不能,最终培养成生物体,3,、动物细胞培养条件,（,2,）营养,（葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、维生素、,促生长因子,等。,合成培养基,）,（,1,）无菌、无毒的环境,（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）,血清、血浆,独特之处：,（,1,）液体培养基,（动物体细胞大都生活在,液体,的环境）,（,2,）成分中有动物血清等,（,3,）温度和,pH,36.5+,（,-,）,0.5,度, 7.2-7.4,（,4,）气体环境：,O,2,和,CO,2,（,95%,空气和,5%,CO,2,）,二氧化碳培养箱,细胞的全能性,大量细胞,植物体,培养结果,获得细胞,或细胞产物,快速繁殖植株,培养目的,葡萄糖、血清、血浆,蔗糖、植物激素,培养基特有成分,液体培养基,固体培养基,培养基性质,细胞增殖,原理,动物细胞培养,植物组织培养,比较项目,植物细胞和动物细胞培养的比较,4,、动物细胞培养技术的应用,（,1,）生产蛋白质生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。,（,2,）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。,（,3,）用于检测有毒物质,（,4,）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据,(,二,),动物体细胞核移植技术和克隆动物,1,、概念：,将动物的一个细胞的,细胞核,，,移入,一个已经,去掉细胞核的卵母细胞,中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。,用核移植的方法得到的动物,-,克隆动物,（难度高）,受体细胞：,M,期的卵母细胞,胚胎细胞核移植：,体细胞核移植：,核移植,细胞分化程度低，恢复全能性容易,供体细胞（供核）,细胞培养,体细胞,卵巢卵母细胞（,M,中期：供质）,去核,无核卵母细胞,注入,细胞,融合,重组细胞,构建重组胚胎,胚胎,移植,代孕母体,生出与供体遗传基础相同的犊牛,2,、体细胞核移植过程,克隆牛,归纳,:,1.,共分成两大阶段：,核移植,和,胚胎移植,2.,取,卵细胞作受体,细胞的,原因,是,:,它是最大的细胞,易操作,它发育可直接表达性状,3.,严格来说,新个体,有卵巢母细胞的细胞质所以有,两个亲本的性状,胚胎细胞核移植 ：,由同一枚胚胎作核供体通过核移植获得的后代，基因型几乎一致，称之为克隆动物。通过核移植得到的胚胎可作供体，再进行细胞核移植，称再克隆。在理论上，一枚胚胎通过克隆和再克隆，可获得无限多的克隆动物。,又称胚胎,克隆,，它是通过显微操作将早期胚胎细胞核移植到去核卵母细胞中构建新合子的,生物技术,。,2.,体细胞核移植技术的应用前景,(1),加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育,(2),保护濒危物种，增加存活数量,(3),克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白,(4),可以作为异种移植的供体，可以用于组织器官的移植,3,、体细胞核移植技术存在的问题,（,1,）许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，免疫失调等。,（,2,）成功率非常低及克隆动物食品的安全性问题。,（三）动物细胞融合（细胞杂交）,1,、概念：,指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。,2,、结果：,形成,杂交细胞,3,、原理：,细胞膜的流动性,4,、诱导方式,物理法：离心、振动、电激,化学法：聚乙二醇（,PEG),生物法：灭活的病毒,显微镜下细胞融合过程,5,、过程：,动物细胞,A,动物细胞,B,诱导，融合,完整的,杂交细胞,AB,有丝分裂,（膜融合、质融合）,（核融合）,注意：,动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起，让它们随机融合后，再从中,筛选杂交细胞。,动物细胞杂交与植物细胞杂交的不同：,不需去除细胞壁,不能发育成新的动物个体,6,、意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。,7,、应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段,特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体,（四）单克隆抗体,每个,B,细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。,要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的,B,淋巴细胞，形成细胞群。,1975,，米尔斯坦和柯勒 杂交瘤技术,1,、原理：,杂交瘤细胞具有两个亲本的特性，即能迅速大量增殖，又能足够数量的单一抗体。,2,、过程,B,淋巴细胞,骨髓瘤细胞,诱导融合,B-B,细胞,B-,瘤细胞,瘤,-,瘤细胞,选择培养,杂交瘤细胞（,B-,瘤细胞）,克隆化培养,抗体检测,杂交瘤细胞（,产生特定抗体,）,体外培养,小鼠腹腔内增殖,单克隆抗体,3.,单克隆抗体的应用：,单克隆抗体的优点：,特异性强、灵敏度高、产量大,作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合,优点：准确、高效、简易、快速,用于,运载药物：,制成“生物导弹”,治疗疾病：,主要用于癌症治疗,
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