氨基酸的分离鉴定-滤纸层析法

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,氨基酸的分离鉴定,滤,纸层析法,1,通过氨基酸的分离：,1.学习纸层析法的基本原理；,2.掌握滤纸层析的操作方法。,目 的,2,一.滤,纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。以水（被滤纸纤维结合）作为,固定相,，以有机溶剂为,流动相,，样品点在滤纸上进行展层，氨基酸在两相中不断分配，因为,分配系数,不同，故样品随流动相移动的速率不同，从而被分开，形成距原点距离不等的层析点。,原 理,3,原理,二.,氨基酸被分离后在纸层析图谱上的位置是,用Rf值(比移),来表示的,Rf = 原点到层析中心的距离 / 原点到溶剂前沿的距离,(在一定的条件下某种物质的,Rf,值是常数。,Rf,值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸。),4,显色原理,无色物质的纸层析图谱可用光谱法（紫外光照射）或显色法鉴定。氨基酸纸层析图谱常用的显色剂为茚三酮或吲哚醌，本实验采用茚三酮为显色剂。,5,器 材,1、,玻璃钟罩,2、毛细管,3、喷雾器,4、培养皿,5、层析滤纸(新华一号),6、烘箱,7、铅笔（直尺）,8、裁纸刀,9、,一次性手套,10、分液漏斗,11、吹风机,12、移液管等常规仪器,6,1,、物质的量为0.008摩尔/升,的赖氨酸、亮氨酸、,天门冬,氨酸、,丙,氨酸溶液及它们的混合液(各组份,物质的量均为0.008摩尔/升,)。,2、扩展剂,正丁醇：甲酸：水=70:17:8（体积比）,3、显色剂,2.5,茚三酮,丙酮,溶液。,试 剂,7,1、,准备滤纸,取层析滤纸(,15*17cm，,距下端2 cm处用铅笔划一条与底边平行的直线，在此直线上每间隔,相等距离,作一记号,，一共做五个记号（点样用）,。,2、,点样,用毛细管将各氨基酸样品分别点在中间5个记号上，,自然风干（或冷风）,后再点一次,样，,每点在纸上扩散的直径，最大不超过5 mm。,操 作,（单向上行层析法）,8,操作,3、展层,用,订书机,将滤纸,订,成筒状，纸的两边不能接触,。,将,滤纸竖直立于,培养皿,中（有铅笔线的一端朝下）,，,用玻璃钟罩盖住，用层析柱与漏斗从钟罩上口处加展开剂至培养皿高度2/3处，盖上上口盖子，,待溶剂前沿上升,至距顶端约1cm,时取出滤纸，,用,铅笔描出溶剂前沿界线，自然干燥或用吹风机,冷,风吹干。,4、,显色,用喷雾器均匀喷上,2.5,茚三酮,丙酮,溶液，然后置烘箱中烘烤5分钟(,65,)即可显出各层析斑点。,5、,计算各种氨基酸的Rf值。,9,1、整个实验为什么要戴手套进行，且滤纸要妥善保存？,2、为避免实验结果出现“拖尾”现象，实验操作中应注意哪些环节？,3、为什么几种氨基酸在滤纸上会出现上下分布？结合实验原理说说选择其他氨基酸可能会有什么现象。,思 考 题,10,祝实验成功！,The end,谢谢！,11,