胚胎和配子生物工程课件

,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,JXLAB,胚胎和配子生物工程(1),(Embryonic and gametal bioengineering),9.1 概述,一、,胚胎移植的含义,胚胎移植技术 ET（embryo transfer）,胚胎移植：,将一头良种母畜（供体）配种后的早期胚胎取出，移植到另一头,同种,（受体）的,生理状态相同,的母畜体内，使胚胎继续发育成为新个体，俗称借腹怀胎。,.,提供胚胎的个体为“供体”，接受胚胎的个体为“受体”，不管供体还是受体动物,都应为雌性个体。,2、胚胎移植的意义,、大大提高优良母畜的使用效率；,、缩短世代间隔，大大提高品种改良的速度；,、通过冷冻胚胎进口，可实现更有利的种畜遗传物质的跨国界交换；,、有利于防疫工作；,、可以克服不孕；,、利用胚胎冷冻保存品种资源。,、是发展家畜生物技术重要的研究手段。,胚胎移植的实质,胚胎移植实质上是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转换，而,胚胎本身的遗传物质并不发生改变，,因此各种性状均能,保持其原来的优良特性,。,为什么胚胎移植能成功?,移动到任何一头动物子宫内都能发育吗?,同种动物发情排卵后,在一段时间内供体受体具有相同的生理环境,为什么能收集到胚胎?,早期胚胎一定时间内处于游离状态,供体和受体会不会发生排斥/,同种动物之间基本上不排斥,为什么移植的胚胎能保留供体双亲的特性?,胚胎虽然与受体有生理和组织上的联系,但遗传特性不受受体的影响,.,生理学基础,3、家畜胚胎移植的发展历史,、1890首次实现了兔的胚胎移植；,、1934年成功地进行羊的胚胎移植；,、50年代初羊、猪、牛的胚胎移植取得成功；,、1964年在日本完成了世界上首次非手术牛胚胎移植并得到犊牛；,、国外，1976年牛的非手术胚胎移植技术推广，1977年开始商业化应用；,、在国内，牛胚胎移植在1978年实验成功，80年代后期到90年代初，奶牛胚胎移植开始在国内生产中应用。,流程图,.激素 经受体产生更多后代,示意图.,对供体,受体的选择和处理,配种或人工授精,对胚胎的收集,检查,培养,保存,移植胚胎,移植后检查,(1),对供、受体的选择，用,促性腺激素,进行同期发情处理,(2)用激素对供体母牛做超数排卵处理(对供体注射,促性腺激素，,促进排卵),(3)选择同种优秀的公牛进行,配种,或,人工授精,(多个卵子与多个精了结合形成多个受精卵，受精的部位在输卵管)；受精卵卵裂早期胚胎,(,4)胚胎收集(特制的,冲卵,装置从母体子宫中,冲出胚胎,),步骤,(5)对胚胎,质量检查,(此时的胚胎处于桑椹期或囊胚期),(6),胚胎移植,或,保存,(保存条件：-196的液氮),(7)胚胎移植操作方法(,手术法和非手术法,),(8)对受体母牛进行是否妊娠的检查,(9)体内孕育，产下胚胎移植的犊牛,四、牛胚胎移植的技术路线,、供体牛和受体牛的选择,供体应具有相当高的育种价值(供体牛选择,遗传性能和生产性能优良,个体，而受体选择则重在,健康的体质和正常的繁殖能力,，供体牛一般为引进的,优良个体,，受体为,本地牛,；）,供体生殖机能应处于较高的状态：产后60天以上，无生殖系统疾病，体质强健,受体应容易购买，繁殖性能好，对地方适应性强，体型中上等，非优良品种,受体健康状况良好，已进入发情季节,供受体发情时间应接近或一致。,、超数排卵和人工授精,PMSG+ PGF2法：,在母牛发情期第812天，肌注PMSG 2000单位，48小时后，肌注15-甲基前列腺素 4mg。,发情后12小时进行第一次输精；,第一次输精后8小时进行第二次输精。,现在使用的超数排卵的方法一般为法；,具体操作方法为：在供体牛发情后的天，经检查黄体较好的牛，采用四天减量注射的方法；,羊：发情周期的第12-15天，促性腺激素处理的第二天或第三天，注射PG,为什么在天开始？,为什么要使用？,牛超数排卵时间表,时间,第一天,第二天,第三天,第四天,第五天,第六天,剂量,早上,.,.,.,.,发情,人工授精,下午,.,.,.,.,发情,人工授精,剂量,四支,供体超排处理,供体母畜的配种,必须用优秀的种公畜进行多次配种，一般隔8-12小时进行一次配种，直到发情结束。,配种前应对种公畜的精液进行质量检查。,可优秀种公畜不足时，可考虑首次采用本交，以后采用人工授精，也可以全部采用人工授精。,供体配种,4.胚胎的收集,胚胎冲洗液的配制：杜氏磷酸缓冲液PBS，布林斯特液SOF合成输卵管液,手术法收集胚胎,输卵管冲胚：顺向冲胚、逆向冲胚,子宫角冲胚,非手术法收集胚胎,二路法,三路法,3、胚胎回收（冲胚）,牛胚胎回收（冲胚）：在牛发情后（发情之日计为第0天）的第七天采用非手术法回收胚胎。,一般供体牛每两个月超排一次，平均每次超排能获得可用胚胎6-7枚。在新疆的最高记录是一头牛一次超排获得48枚可用胚胎。,冲胚所用的液体为PBS液，其主要成分有：,Nacl、Kcl、KH,2,PO,4,、Mgcl,2,.6H,2,O、Na,2,HPO,4,、丙酮酸钠、葡萄糖、牛血清白蛋白、青霉素、链霉素,无菌操作的重要性,移胚,配种后3天的供卵巢,供体羊胚胎收集,收集到的冲洗液静置，冲洗液分离。,拣胚：将胚胎移至培养液或保存液中。,胚胎鉴定：根据透明带、胚胎细胞、发育阶段及细胞在透明带中的比例确定胚胎级别。,4.胚胎的检查,收集到的冲冼液，需静置10min，使胚胎下沉到容器底部，然后移去上清液，再放于解剖镜下检查胚胎的数量和发育情况，再将发育正常的胚胎收集到注射器或移植管内供移植用。,胚胎的检查项目：,1,.,受精卵整体的形态和体积大小；,2,.,透明带形状，厚度及损伤程度；,3,.,发育正常胚胎的卵裂球应该具有整齐的外形，大小一致，分布均匀而紧密，发育速度与胚龄一致；,4,.,卵细胞表面颗粒的状态和多少等。,4.,胚胎的检查,4、胚胎质量鉴定,牛胚胎大小直径约为0.15-0.16mm（第七天）,一般分为A、B、C三个等级,A级：胚胎形态完整，轮廓清晰，分裂球大小均匀，结构紧凑，无附着的细胞和液泡或很少；,B级：轮廓清晰，色调及细胞密度好，可见到一些附着的细胞和液泡；,C级：轮廓不清晰，色调发暗，结构较松散，游离的细胞和液泡较多。,目前，胚胎的发育阶段采用以下系统来划分,牛的异常胚胎示意图,12级牛胚胎,6天收集的胚胎（未拣）,二细胞至四细胞胚胎,胚胎的降温：使胚胎停止发育，延长其体外生存时间,体外培养：将胚胎置于体温条件下，在培养液中，使其继续发育,胚胎冷冻：通过一定的处理程序，将胚胎降温冷冻后，保存于液氮中,5.胚胎的保存,6、胚胎冷冻,胚胎冷冻的难点：,冷冻液的毒副损伤,降温过程的冷冻损伤,三步平衡冷冻法,胚胎分别用含3%、6%、10%甘油且含10%牛血清的PBS液的保存液浸渍5分钟后，用含10%甘油的PBS 装管冷冻。,一步法冷冻,胚胎用含10%血清的乙二醇溶液平衡后直接冷冻,牛胚胎冷冻程序示意图,7、受体的同期发情处理,自然发情（妊娠率更高）,一次同期法（PG）（妊娠率较低）,两次同期法（PG）（妊娠率更高）,11天内注射两次PG,发情观察极为重要,手术法移植,非手术法移植,7.胚胎移植,受体移胚,7、胚胎移植,受体牛发情后的第七天经检查黄体合格后移植,对黄体的要求？,移植步骤主要有：直肠检查、解冻胚胎检查、胚胎装管、麻醉、移植,胚胎装管,牛胚胎的移植采用非手术法，用移植枪将胚胎移入子宫角的前端,。,7、胚胎移植,供体和受体的抗炎处理,健康状况检查,返情状况检查,妊娠检查及妊娠确定,8.胚胎移植后观察及处理,9、妊娠诊断,1、乳汁孕酮测定法,2、B超诊断法,3、直肠检查法,孕角及子宫体明显增大，孕角较空角粗约一倍；角间沟已不清楚；子宫角的一部分进入腹腔；孕角壁软、薄，内有液体波动；子宫体触诊一般不收缩。,胚胎移植产出的犊牛,一次移入三枚胚全部成活,受体母羊与所生羔羊,The end,！,