胃癌标本的正确固定PPT培训课程课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,胃癌标本的正确固定,胃癌标本的正确固定,1,（优选）胃癌标本的正确固定,（优选）胃癌标本的正确固定,主要内容,标本及时固定对生物标志物检测的重要性,胃癌手术标本固定的实践问题,主要内容标本及时固定对生物标志物检测的重要性,固定的意义,固定是组织制片的基础及关键步骤，固定是否及时、彻底，影响着整个制片过程。是标本处理过程的一个主要环节。,固定的意义固定是组织制片的基础及关键步骤，固定是否及时、彻底,4,固定目的,1,、保持组织形态学特征清晰和稳定,2,、阻止组织、细胞自溶与腐败,3,、凝固或沉淀组织细胞内物质,4,、保存组织细胞抗原性,5,、使组织保持一定的硬度和弹性,固定目的1、保持组织形态学特征清晰和稳定,5,Khoury T, et al. Mod Pathol 2009;22:1457-1467.,延迟固定导致激素受体染色减弱,固定延迟时间,0,1,2,3,4,5,6,7,平均,Q,值,0min,10min,30min,1h,2h,4h,8h,ER,PR,ER,、,PR,的平均,Q,值随固定延迟时间的增加而下降,Khoury T, et al. Mod Pathol 2,ER,染色减弱的标本比例,(n=58),(n=39),离体至固定时间,P=0.03,Li XX, et al. Mod Pathol 2013; 26, 71-78.,延迟固定导致激素受体染色减弱,延迟,2h,以上时间固定，出现染色减弱的比例升高,ER染色减弱的标本比例(n=58)(n=39)离体至固定时间,+,，无减弱；任一字母代表减弱，,A,：因细胞轮廓模糊，,B,：因非一致性信号；,C,：因核分辨不清,病例编号,0min,10min,30min,1h,2 h,4 h,8 h,过夜,总的荧光减弱例数,1,+,+,+,+,A,C,C,A,C,A,C,4,2,+,+,+,+,A,B,C,A,B,C,A,B,C,A,B,C,4,3,+,+,+,+,+,C,C,C,3,4,+,+,+,C,C,C,C,C,5,5,+,+,+,C,B,C,B,C,B,C,B,C,5,6,+,+,+,+,+,C,C,C,3,7,+,+,+,+,A,B,A,B,A,B,A,B,4,8,+,+,+,A,B,A,B,A,B,A,B,A,B,5,9,+,+,+,+,+,+,+,+,0,10,+,+,+,+,+,+,A,B,A,B,2,总的荧光减弱例数,+,+,+,3,6,8,9,9,35,HER2,荧光原位杂交检测结果与固定延迟时间的关系,Khoury T, et al. Mod Pathol 2009;22:1457-1467.,延迟固定导致,HER2,染色改变,延迟,1h,之后，,FISH,染色开始减弱；,2h,之后，统计学上有显著性差异,(P0.05),+，无减弱；任一字母代表减弱，A：因细胞轮廓模糊，B：因非一,编号,0 min,10 min,30 min,1 h,2 h,4 h,8 h,过夜,1,否,否,否,否,否,否,是,是,2,否,否,否,否,否,否,否,是,3,否,否,否,否,否,否,否,是,4,否,否,否,否,否,是,是,是,5,否,否,否,否,否,是,是,是,6,否,否,否,否,是,是,是,是,7,否,否,否,否,是,是,是,是,8,否,否,否,否,否,否,是,是,9,否,否,否,否,否,是,是,是,10,否,否,否,否,否,否,否,是,总的受累例数,0,0,0,0,2,5,7,8,Khoury T, et al. Appl Immunohistochem Mol Morphol 2012;20:531-542.,总体组织形态学改变情况,延迟固定导致组织形态学改变,延迟固定,2h,标本开始出现明显的组织形态学改变，延迟固定,8h,和过夜的标本发生组织形态学改变的几率最高,编号0 min 10 min 30 min1 h2 h4 h,0 min,10 min,30 min,1 h,2 h,4 h,8 h,ON,E-cadherin,230,230,230,230,208,204,204,204,EGFR,20,20,20,20,3,3,1,1,与延迟固定时间相关的膜标志物的表达,(,中位值,),ON,：过夜,延迟固定导致EGFR和Ecadherin表达改变,Khoury T, et al. Appl Immunohistochem Mol Morphol 2012;20:531-542.,EGFR,和,E-cadherin,表达水平自延迟固定,2h,起开始下降,延迟固定时间,190,195,200,205,210,215,220,225,230,235,ON,8h,4h,2h,1H,30min,10min,0,score,E-cadherin,染色评分随延迟固定时间的变化,0 min 10 min 30 min1 h2 h4 h8,胃癌HER2检测指南对固定的要求,供图：绍兴市人民医院病理科,手术标本应在切除后30min内固定,一项国际多中心随机对照期临床研究(TOGA试验)的结果显示，化疗联合针对HER2的曲妥珠单抗治疗可显著延长进展期胃癌患者的生存期，基于这一结果，2010年欧洲药品管理局及美国食品和药品管理局(FDA)先后批准化疗联合使用曲妥珠单抗治疗HER2阳性胃及胃和食管交界处癌(以下统称胃癌)患者。,SEOM/SEAP：西班牙内科肿瘤学会和西班牙病理学家学会,与延迟固定时间相关的膜标志物的表达(中位值),Ki-67表达水平在延迟固定4h和8h出现下降,3、凝固或沉淀组织细胞内物质,胃癌HER2检测指南对固定的要求,4IHC 2+的病例为不确定病例，需进一步行原位杂检测，如原位杂交阳性，判断为HER2阳性；,Khoury T, et al.,4、保存组织细胞抗原性,供图：绍兴市人民医院病理科,各有特点，其中DSISH是一种亮视野下检测HER2基因扩增的方法，易于观察，被认为更具有实际应用价值。,EGFR和E-cadherin表达水平自延迟固定2h起开始下降,采用MIB-1免疫组化检测评估乳腺癌的增殖指数,延迟固定导致,Ki-67,表达改变,弥漫性染色病例,所有病例,延迟固定时间,延迟固定对,Ki-67,的影响,0,50,100,150,200,250,ON,8h,4h,2h,1h,30min,10min,0min,Ki-67,表达水平在延迟固定,4h,和,8h,出现下降,Khoury T, et al. Appl Immunohistochem Mol Morphol 2012;20:531-542.,胃癌HER2检测指南对固定的要求延迟固定导致Ki-67表,手术切除标本的有丝分裂象较活检标本平均高出,3,倍多,(206 vs 62,有丝分裂,/,10,个高倍视野, P=0.008),；而两者间,MIB-1,免疫染色的肿瘤细胞比例则相当,有丝分裂象计数,采用,MIB-1,免疫组化检测评估乳腺癌的增殖指数,活检标本,手术切除标本,有丝分裂,/10 HPF,活检标本,手术切除标本,MIB-1(,占肿瘤细胞的比例,),Lehr HA, et al. Modern Pathology 2012:1-7.,延迟固定导致肿瘤生物学特点改变,手术切除标本有丝分裂象增加源自固定延迟：活检标本自离体至固定的时间为,1530 min,，而手术切除标本则需数个小时,手术切除标本的有丝分裂象较活检标本平均高出3倍多(206,主要内容,标本及时固定对生物标志物检测的重要性,胃癌手术标本固定的实践问题,主要内容标本及时固定对生物标志物检测的重要性,手术标本及时固定的时间,SEOM/SEAP,胃癌,HER2,检测共识,1,手术标本应在切除后,30min,内,固定,中国胃癌,HER2,检测指南,2,规范的标本固定是,HER2,检测质量的保障，能使组织形态保存良好，防止细胞内蛋白和核酸的降解,所有标本应在离体后,2030min,内,进行标记、切开、固定等初步处理,Werner M, et al,3,标本应在手术切除后,30min,内,尽快地固定，器官和实体瘤应予以切开以确保固定液快速渗透,1. Gmez-Martn C, et al. Clin Transl Oncol 2011; 13:636-651.,2. 胃癌HER2检测指南编写组. Chin J Pathol 2011; 40:553-557.,3. Werner M, et al. Am J Surg Pathol 2000; 24(7): 1016-1019,.,SEOM/SEAP：西班牙内科肿瘤学会和西班牙病理学家学会,手术标本及时固定的时间SEOM/SEAP胃癌HER2检测共识,据报道约,20,的进展期胃癌有,HER2,过表达或扩增。一项国际多中心随机对照期临床研究,(TOGA,试验,),的结果显示，化疗联合针对,HER2,的曲妥珠单抗治疗可显著延长进展期胃癌患者的生存期，基于这一结果，,2010,年欧洲药品管理局及美国食品和药品管理局,(FDA),先后批准化疗联合使用曲妥珠单抗治疗,HER2,阳性胃及胃和食管交界处癌,(,以下统称胃癌,),患者。,胃癌,HER2,检测指南,据报道约20的进展期胃癌有HER2过表达或扩增。一项国际多,15,准确的胃癌,HER2,表达和基因扩增检测结果是进展期胃癌,HER2,靶向治疗患者筛选和疗效预测的前提,胃癌,HER2,检测指南,准确的胃癌HER2表达和基因扩增检测结果是进展期胃癌HER2,16,延迟固定导致激素受体染色减弱,所有标本应在离体后2030min内进行标记、切开、固定等初步处理,标本及时固定对生物标志物检测的重要性,Mod Pathol 2009;22:1457-1467.,采用MIB-1免疫组化检测评估乳腺癌的增殖指数,延迟1h之后，FISH染色开始减弱；,胃癌HER2检测指南,3、凝固或沉淀组织细胞内物质,胃癌HER2检测指南,延迟固定导致激素受体染色减弱,胃癌HER2检测指南对固定的要求,细胞质染色可能由于使用了不适当的固定方式,2IHc 3+的病例判断为HER2阳性，无需进一步做原位杂交检测。,规范的标本固定是HER2检测质量的保障，能使组织形态保存良好，防止细胞内蛋白和核酸的降解,免疫组化检测固定较差示例胃癌,一项国际多中心随机对照期临床研究(TOGA试验)的结果显示，化疗联合针对HER2的曲妥珠单抗治疗可显著延长进展期胃癌患者的生存期，基于这一结果，2010年欧洲药品管理局及美国食品和药品管理局(FDA)先后批准化疗联合使用曲妥珠单抗治疗HER2阳性胃及胃和食管交界处癌(以下统称胃癌)患者。,2、阻止组织、细胞自溶与腐败,标本及时固定对生物标志物检测的重要性,4、保存组织细胞抗原性,一、,HER2,检测方法,包括免疫组织化学染色,(IHC),和原位杂交,(inhibridization),技术，后者包括荧光原位杂交,(FlSH),和双色银染原位杂交,(DSISH),。,FSH,和,DSISH,两种检测方法符合率高。各有特点，其中,DSISH,是一种亮视野下检测,HER2,基因扩增的方法，易于观察，被认为更具有实际应用价值。本指南推荐,IHC,与,FSH,和,DSISH,相结合的检测策略。,胃癌,HER2,检测指南,延迟固定导致激素受体染色减弱一、HER2检测方法胃癌HER,17,二、,HER2,检测适宜范围,有可能进行曲妥珠单抗治疗的进展期胃癌有必要行准确的,HER2,检测。,胃癌,HER2,检测指南,二、HER2检测适宜范围胃癌HER2检测指南,18,三、检测流程和结果判断,1,HER2,状态检测首先选用,IHC,法。,2,IHc 3+,的病例判断为,HER2,阳性，无需进一步做原位杂交检测。,3,IHC 1+,和,O,的病例，判断为,HER2,阴性，无需进一步做原位杂交检测。,4,IHC 2+,的病例为不确定病例，需进一步行原位杂检测，如原位杂交阳性，判断为,HER2,阳性；如原位杂交阴性，判断为,HER2,阴性。,胃癌,HER2,检测指南,三、检测流程和结果判断胃癌HER2检测指南,19,胃癌,HER2,检测指南,对固定的要求,胃癌HER2检测指南对固定的要求,20,免疫组化检测固定较差示例胃癌,固定不完全会导致假阳性检查结果,细胞质染色可能由于使用了不适当的固定方式,图片由,Targos Molecular Pathology.,提供,免疫组化检测固定较差示例胃癌固定不完全会导致假阳性检查结果图,21,30,分钟内：,应当完成什么？,应当由谁完成？,需要的哪些材料？,30分钟内：,22,30,分钟内：,应当完成什么？,应当由谁完成？,需要的哪些材料？,30分钟内：,23,组织处理不良示例,未剪开固定,固定液比例不足,组织处理不良示例未剪开固定固定液比例不足,24,3IHC 1+和O的病例，判断为HER2阴性，无需进一步做原位杂交检测。,MIB-1(占肿瘤细胞的比例),一项国际多中心随机对照期临床研究(TOGA试验)的结果显示，化疗联合针对HER2的曲妥珠单抗治疗可显著延长进展期胃癌患者的生存期，基于这一结果，2010年欧洲药品管理局及美国食品和药品管理局(FDA)先后批准化疗联合使用曲妥珠单抗治疗HER2阳性胃及胃和食管交界处癌(以下统称胃癌)患者。,如原位杂交阴性，判断为HER2阴性。,胃癌HER2检测指南编写组.,免疫组化检测固定较差示例胃癌,1、保持组织形态学特征清晰和稳定,Appl Immunohistochem Mol Morphol 2012;20:531-542.,延迟固定导致激素受体染色减弱,手术标本应在切除后30min内固定,供图：绍兴市人民医院病理科,Khoury T, et al.,图片由Targos Molecular Pathology.,FSH和DSISH两种检测方法符合率高。,Mod Pathol 2009;22:1457-1467.,是标本处理过程的一个主要环节。,中国胃癌HER2检测指南2,10个高倍视野, P=0.,延迟固定对Ki-67的影响,Khoury T, et al.,4、保存组织细胞抗原性,组织处理规范示例,剪开手术标本,供图：绍兴市人民医院病理科,3IHC 1+和O的病例，判断为HER2阴性，无需进一步做,25,组织处理规范示例,钉于标本板上,供图：绍兴市人民医院病理科,组织处理规范示例钉于标本板上供图：绍兴市人民医院病理科,26,组织处理规范示例,供图：绍兴市人民医院病理科,组织处理规范示例供图：绍兴市人民医院病理科,27,组织处理规范示例,浸泡于足量的固定液中,供图：绍兴市人民医院病理科,组织处理规范示例浸泡于足量的固定液中供图：绍兴市人民医院病理,28,组织处理规范示例,准确记录离体时间和固定,(,开始,),时间,供图：绍兴市人民医院病理科,组织处理规范示例准确记录离体时间和固定(开始)时间供图：绍兴,29,30,分钟内：,应当完成什么？,应当由谁完成？,需要的哪些材料？,30分钟内：,30,应当根据医院的实际情况，由手术室和病理科协商决定,如标本能于离体后,30min,内送至病理科并完成处理，可以建议由病理科完成,如标本不能于离体后,30min,内送至病理科并完成处理，可以建议在手术室完成,应当根据医院的实际情况，由手术室和病理科协商决定,31,延迟固定对Ki-67的影响,Am J Surg Pathol 2000; 24(7): 1016-1019.,胃癌手术标本固定的实践问题,Mod Pathol 2013; 26, 71-78.,Chin J Pathol 2011; 40:553-557.,Khoury T, et al.,延迟固定对Ki-67的影响,供图：绍兴市人民医院病理科,Khoury T, et al.,10个高倍视野, P=0.,4IHC 2+的病例为不确定病例，需进一步行原位杂检测，如原位杂交阳性，判断为HER2阳性；,如原位杂交阴性，判断为HER2阴性。,胃癌HER2检测指南,Appl Immunohistochem Mol Morphol 2012;20:531-542.,胃癌HER2检测指南编写组.,采用MIB-1免疫组化检测评估乳腺癌的增殖指数,2h之后，统计学上有显著性差异(P0.,Mod Pathol 2009;22:1457-1467.,2、阻止组织、细胞自溶与腐败,如标本不能于离体后30min内送至病理科并完成处理，可以建议在手术室完成,胃癌HER2检测指南对固定的要求,2、阻止组织、细胞自溶与腐败,供图：绍兴市人民医院病理科,Khoury T, et al.,标本及时固定对生物标志物检测的重要性,是标本处理过程的一个主要环节。,Lehr HA, et al.,胃癌手术标本固定的实践问题,采用MIB-1免疫组化检测评估乳腺癌的增殖指数,延迟固定对Ki-67的影响,2IHc 3+的病例判断为HER2阳性，无需进一步做原位杂交检测。,胃癌手术标本固定的实践问题,E-cadherin 染色评分随延迟固定时间的变化,4IHC 2+的病例为不确定病例，需进一步行原位杂检测，如原位杂交阳性，判断为HER2阳性；,4、保存组织细胞抗原性,10个高倍视野, P=0.,Khoury T, et al.,胃癌HER2检测指南,SEOM/SEAP：西班牙内科肿瘤学会和西班牙病理学家学会,2h之后，统计学上有显著性差异(P0.,3IHC 1+和O的病例，判断为HER2阴性，无需进一步做原位杂交检测。,1、保持组织形态学特征清晰和稳定,FSH和DSISH两种检测方法符合率高。,延迟固定对Ki-67的影响,一项国际多中心随机对照期临床研究(TOGA试验)的结果显示，化疗联合针对HER2的曲妥珠单抗治疗可显著延长进展期胃癌患者的生存期，基于这一结果，2010年欧洲药品管理局及美国食品和药品管理局(FDA)先后批准化疗联合使用曲妥珠单抗治疗HER2阳性胃及胃和食管交界处癌(以下统称胃癌)患者。,2IHc 3+的病例判断为HER2阳性，无需进一步做原位杂交检测。,延迟固定导致EGFR和Ecadherin表达改变,而两者间MIB-1免疫染色的肿瘤细胞比例则相当,Werner M, et al3,胃癌手术标本固定的实践问题,标本及时固定对生物标志物检测的重要性,SEOM/SEAP：西班牙内科肿瘤学会和西班牙病理学家学会,Mod Pathol 2009;22:1457-1467.,规范的标本固定是HER2检测质量的保障，能使组织形态保存良好，防止细胞内蛋白和核酸的降解,有可能进行曲妥珠单抗治疗的进展期胃癌有必要行准确的HER2检测。,Khoury T, et al.,2IHc 3+的病例判断为HER2阳性，无需进一步做原位杂交检测。,中国胃癌HER2检测指南2,Khoury T, et al.,4IHC 2+的病例为不确定病例，需进一步行原位杂检测，如原位杂交阳性，判断为HER2阳性；,30,分钟内：,应当完成什么？,应当由谁完成？,需要的哪些材料？,延迟固定对Ki-67的影响胃癌HER2检测指南对固定的要,32,