蜡样芽胞杆菌的检验课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,整理课件,*,蜡样芽胞杆菌,(,Bacillus cereus,),的检验,1,整理课件,蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)的检验 1整理,（一）蜡样芽胞杆菌生物学性状,1,、形态和染色特性,该菌为革兰氏阳性的大杆菌，菌体两端较平整，芽胞呈椭圆形，位于菌体中央稍偏一端,多呈链状排列,无荚膜，有周鞭毛,。,2,整理课件,（一）蜡样芽胞杆菌生物学性状 1、形态和染色特性 该菌为,2,、培养特性,（,1,）需氧菌，生长温度范围在,10-45,之间。最适,生长温度为,28-35,。,（,2,）在普通培养基上生长良好。本菌在普通琼脂平板上，生长的菌落呈乳白色，不透明，直径,4-6mm,边缘不整齐，表面粗糙，呈毛玻璃状或白蜡状。,3,整理课件,2、培养特性 （1）需氧菌，生长温度范围在10-45之间。,（,3,）在血液琼脂平板上形成浅灰色、不透明、似毛玻璃状的菌落。,菌落周围初呈草绿色溶血,时间稍长即完全透明,。,（,4,）蜡状芽胞杆菌在甘露醇卵黄多粘菌素琼脂,(MYP),上的菌落为,粉红色,(,表示不发酵甘露醇,),，周围有粉红色的晕（表示产生卵磷脂酶）。,4,整理课件,（3）在血液琼脂平板上形成浅灰色、不透明、似毛玻璃状的菌落。,（5）在普通肉汤内生长迅速，肉汤混浊，常常有,菌膜或壁环,，振摇易乳化。,5,整理课件,（5）在普通肉汤内生长迅速，肉汤混浊，常常有菌膜或壁环，振摇,3,、生化性状：,（,1,）葡萄糖发酵试验：接种于酚红葡萄糖肉汤中，,厌氧条件下,35,培养,24h,。培养基应由红色变,为黄色。,（,2,）硝酸盐还原试验：阳性（红色）。,（表明本菌在厌氧条件下分解葡萄糖产酸）,（,3,）,V-P,试验：接种于改良,V-P,培养基中，,35,培养,48 h,。加,V-P,试剂及肌酸数粒，静止,1h,，应为阳性反应（,伊红色,）。,6,整理课件,3、生化性状：（1）葡萄糖发酵试验：接种于酚红葡萄糖肉汤中，,（,4,）,L-,酪氨酸分解试验：接种于,L-,酪氨酸琼脂培,养基上，,35,培养,48 h,阳性反应菌落周围培,养基应出现澄清透明区（表示产生酪蛋白,酶）。阴性时应继续培养,72 h,再观察。,（,5,）溶菌酶试验：用直径,2mm,接种环取纯菌悬液,一环,接种于溶菌酶肉汤中，,35,培养,24h,。,该菌在本培养基（含,0.001,的溶菌酶）中能,生长。如出现阴性反应,应继续培养,24 h,。,7,整理课件,（4）L-酪氨酸分解试验：接种于L-酪氨酸琼脂培（5）溶菌酶,4,、致病性,蜡样芽胞杆菌引起食物中毒，除必须具有大量的细菌外，肠毒素也是重要的致病因素。,耐热性肠毒素：,10030,分钟不能被破坏，为引起,呕吐,型,中毒的致病因素,常在米饭中形成。,不耐热肠毒素：是引起,腹泻型,胃肠炎的病因，能在各种,食物中形成。,8,整理课件,4、致病性 蜡样芽胞杆菌引起食物中毒，除必须具有大量,5,、抵抗力,蜡样芽胞杆菌,100 20,分钟即可被杀死；对酸碱不敏感，,pH6-11,对本菌基本上不受影响，,pH5,以下，生长可受到抑制。,9,整理课件,5、抵抗力 蜡样芽胞杆菌100 20分钟即可被杀死；,（二）流行病学特点,1,、季节性特点：,以夏、秋季，尤其是,6,10,月为多见。,2,、食品种类,剩饭，特别是大米饭。,乳及乳制品、畜禽肉类制品、蔬菜、莱汤、马铃薯、豆芽、甜点心、调味汁、色拉。,国内：与淀粉质食品相关多。,10,整理课件,（二）流行病学特点 1、季节性特点： 2、食品种类10整理课,3,、临床症状,呕吐型中毒,：多见于过剩米饭和油炒饭，由耐热性肠毒素为致病因素；潜伏期短，一般为,2,3,小时，最短为,30,分钟，最长,5,6,小时；症状以呕吐，腹痉挛为主，腹泻则少见，一般经过,8,10,小时而治愈。,腹泻型中毒,：由各种食品中不耐热肠毒素引起，潜伏期在,6,小时以上，一般为,6,14,小时；症状以腹泻，腹痉挛，而呕吐却不常见；病程,24,36,小时。,11,整理课件,3、临床症状 呕吐型中毒：多见于过剩米饭和油炒饭，由,1.,蜡样芽孢杆菌检验程序：,检样,25g(ml)+225ml,生理盐水,中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验蜡样芽孢杆菌检验,GB/T 4789.28-2003,做成,10,-1,-10,-5,的稀释液,选择性培养基（菌数测定）,MYP,选择性培养基（分离培养）,MYP,37,，,18h-24h,菌数计算,营养琼脂培养基,36,1,12h20h,36,1,12h20h,生长及菌落观察,染色镜,检,生化试验,菌株保存,报 告,（三）检测方法,12,整理课件,1.蜡样芽孢杆菌检验程序：检样中华人民共和国国家标准食品卫生,10,-1,10,-5,的,稀释液的制备,每个稀释度,0.1mL,接种于,2,个,MYP,培养基,361,1220h,菌落计数,361,1220h,挑取菌落接种肉汤和营养琼脂培养基（分离培养）,证实试验,报 告,形态观察,染色镜检,培养特性,生化特性,生化分型,13,整理课件,10-110-5的每个稀释度361 1220h 菌落,2菌数测定,以无菌操作将检样25g或25 ml按菌落总数测定方式，用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液做成10,-1,10,-5,的稀释液。取各稀释液0.1ml，接种在选择培养基（甘露醇卵黄多黏菌素琼脂）平板上，用L形棒涂布于整个表面，置37培养1220h后，选取菌落数在30个左右者进行计数。蜡样芽孢杆菌在此培养基上生成的菌落为红色（表示不发酵甘露醇）,环绕有白色至淡粉红色的晕（表示产生卵磷脂酶）。,14,整理课件,2菌数测定14整理课件,计数后，从中挑取5个这样的菌落作证实试验。根据试验证实为蜡样芽孢杆菌的菌落数，计算出该培养皿内的蜡样芽孢杆菌数，然后乘其稀释倍数即得每克或每毫升样品所含的蜡样芽孢杆菌数。,15,整理课件,计数后，从中挑取5个这样的菌落作证实试验。根据试验证实为蜡样,计数后，从中挑取,5,个此种菌落做证实试验，根据证实的蜡样芽孢杆菌的菌落数，计算出该平板上的菌落数，然后乘其稀释倍数，即得每克（毫升）样品中所含蜡样芽胞杆菌数。,例如将,0.1mL 10,-4,样品稀释液涂布于,MYP,平板上，其可疑菌落为,25,个，取,5,个鉴定，证实四个菌落为蜡样芽孢杆菌，则,1g,（,mL,）检样中所含蜡样芽孢杆菌数为：,选取具有,15-150,个典型或可疑蜡样芽孢杆菌菌落的平板,进行计数。计算同一稀释度两个平板的平均菌落数。,254/510,4,10,210,6,16,整理课件,计数后，从中挑取5个此种菌落做证实试验，根据证实的蜡样芽,3分离培养,将检样或其稀释液划线于上述选择性培养基平板上，置37培养1220h，挑取可疑蜡样芽孢杆菌的菌落接种于,肉汤和营养琼脂培养基上,做纯培养，然后做证实试验。,17,整理课件,3分离培养 17整理课件,4证实试验,（1）形态观察,本菌应为G杆菌，宽度在1m或1m以上，芽孢呈卵圆形，不突出菌体，多位于菌体中央或稍偏于一端。,（2）培养特性,本菌在肉汤中生长混浊，常有菌膜或壁环，振摇易乳化。琼脂平板上形成的菌落不透明，表面粗糙，似毛玻璃状或融蜡状且边缘不齐。,18,整理课件,4证实试验18整理课件,（,3）生化特性,本菌有动力；产生卵磷脂酶和酪蛋白酶；过氧化氢酶试验阳性；溶血；不发酵甘露醇和木糖；能液化明胶和还原硝酸盐；在厌氧条件下能发酵葡萄糖。,19,整理课件,（3）生化特性19整理课件,(4)生化分型,根据蜡样芽孢杆菌对,柠檬酸盐利用、硝酸盐还原、淀粉水解、V-P反应、明胶液化的试验，分成不同型别，,见表1。,20,整理课件,(4)生化分型 20整理课件,表,1,蜡样芽孢杆菌生化分型,21,整理课件,表1 蜡样芽孢杆菌生化分型21整理课件,（4）与类似菌鉴别,本菌与其他类似菌的鉴别见表2。,22,整理课件,（4）与类似菌鉴别22整理课件,5.结果报告,报告1g（mL）检样中所含蜡样芽孢杆菌数量个/g(mL)。,23,整理课件,5.结果报告 报告1g（mL）检样中所含蜡样芽孢杆菌数,实验三、食品中蜡样芽孢杆菌的检验,一、实验目的,1,学习蜡样芽孢杆菌检验的原理和方法。,2,了解蜡样芽孢杆菌形态特征、培养特性和生化特性。,24,整理课件,实验三、食品中蜡样芽孢杆菌的检验一、实验目的24整理课件,蜡样芽孢杆菌为需氧、能产生芽孢的革兰氏阳性杆菌，在自然界分布较广，食品在正常情况下就可能有此菌存在，因而易从各种食品中检出。蜡样芽孢杆菌能发酵麦芽糖、蔗糖和水杨苷，不发酵乳糖、甘露醇、木糖、阿拉伯糖、山梨醇和侧金盏花醇,卵磷脂酶和酪蛋白酶，过氧化氢酶试验阳性，溶血，能在,24h,内液化明胶和还原硝酸盐，在厌氧条件下能发酵葡萄糖。,二、实验原理,25,整理课件,蜡样芽孢杆菌为需氧、能产生芽孢的革兰氏阳性杆菌，在自然界分布,三、实验方法与步骤,1,蜡样芽孢杆菌检验程序,26,整理课件,三、实验方法与步骤1蜡样芽孢杆菌检验程序 26整理课件,2,菌数测定,以无菌操作将检样,25g,或,25 ml,按菌落总数测定方式，用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液做成,10-1,10-5,的稀释液。取各稀释液,0.1ml,，接种在选择培养基（甘露醇卵黄多黏菌素琼脂）平板上，用,L,形棒涂布于整个表面，置,37,培养,12,20h,后，选取菌落数在,30,个左右者进行计数。蜡样芽孢杆菌在此培养基上生成的菌落为红色（表示不发酵甘露醇）,环绕有白色至淡粉红色的晕（表示产生卵磷脂酶）。计数后，从中挑取,5,个这样的菌落作证实试验。根据试验证实为蜡样芽孢杆菌的菌落数，计算出该培养皿内的蜡样芽孢杆菌数，然后乘其稀释倍数即得每克或每毫升样品所含的蜡样芽孢杆菌数。,27,整理课件,2菌数测定以无菌操作将检样25g或25 ml按菌落总数测定,将检样或其稀释液划线于上述选择性培养基平板上，置,37,培养,12,20h,，挑取可疑蜡样芽孢杆菌的菌落接种于肉汤和营养琼脂培养基上做纯培养，然后做证实试验。,3,分离培养,28,整理课件,3分离培养28整理课件,（,1,）形态观察,本菌应为,G,杆菌，宽度在,1m,或,1m,以上，芽孢呈卵圆形，不突出菌体，多位于菌体中央或稍偏于一端。,（,2,）培养特性,本菌在肉汤中生长混浊，常有菌膜或壁环，振摇易乳化。琼脂平板上形成的菌落不透明，表面粗糙，似毛玻璃状或融蜡状且边缘不齐。,4,证实试验,29,整理课件,（1）形态观察4证实试验29整理课件,（,3,）生化特性,本菌有动力；产生卵磷脂酶和酪蛋白酶；过氧化氢酶试验阳性；溶血；不发酵甘露醇和木糖；能液化明胶和还原硝酸盐；在厌氧条件下能发酵葡萄糖。,30,整理课件,（3）生化特性30整理课件,四、实验结果,根据以上实验作出检验报告。,31,整理课件,四、实验结果31整理课件,五、思考题,1,如何区分蜡样芽孢杆菌和苏云金芽孢,杆菌？,2,设计蜡样芽孢杆菌计数程序？,32,整理课件,五、思考题1如何区分蜡样芽孢杆菌和苏云金芽孢32整理课件,