现代实验室诊断在血液病学中的应用及地位课件

,2021/2/5,0,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,现 状,临床,血液学和血液检验,是多缝交叉、实践性强、发展,迅速的学科,。,随着国内外研究的不断深入，使得血液病学有了突飞猛进的发展，如白血病亚型的研究，已深入到基因染色体甚至更微观的领域。,临床医师无法通过肉眼判断分型，治疗方案，预后等重要问题。因此，检验科室的实验室结果就显得尤为重要。,现 状 临床血液学和血液检验是,1,现代实验室诊断在血液病学中的应用及地位课件,2,诊断进展过程,普通血细胞,骨髓细胞涂片,骨髓活检,细胞化学染色,免疫学,分子生物学,流式细胞技术,细胞遗传学,诊断进展过程普通血细胞骨髓细胞涂片骨髓活检细胞化学染色免疫,3,骨髓活检,能弥补骨髓穿刺的不足,了解骨髓细胞的成分及原始细胞分布状况,能观察细胞形态，便于做出病理诊断,对再生障碍性贫血、骨髓异常增生症的诊断具有重要意义,另外对骨髓坏死、骨髓脂肪变也具诊断意义。,骨髓活检能弥补骨髓穿刺的不足,4,实验室检查的意义,现代实验室检查,阐明本质及基础,分类治疗,推动靶向性治疗和个体化方案,判断预后,实验室检查的意义现代实验室检查阐明本质及基础分类治疗推动靶向,5,白血病分子检测的临床应用,补充,MIC,检查的不足,发现新的亚型,监测白血病的微小残留病灶（,MRD）,为研究白血病的发病机制打下基础,白血病分子检测的临床应用补充MIC检查的,6,免疫学检查：,确定细胞系来源和分化,免疫学检查：,确定细胞系来源和分化,免疫表型,儿童,成人,FAB,B-,系,早前-,B-ALL,普通-,B-ALL,前-,B-ALL,成熟-,B-ALL,T-,系,前,T-ALL,T-ALL,CD19,+,HLA-DR,+,CD10,-,CD10,+,CD10,+,CyIg,+,CD10,SIg,+,CyCD3,+,，CD7,+,CD2,-,CD1a,-,sCD3,CD2,+,CD5,CD8,CD4,88,5,65,15,3,12,1,11,76,11,51,10,4,24,7,17,L1L2,L1L2,L1,L3,L1L2,L1L2,免疫学检查：确定细胞系来源和分化免疫学检查：确定细胞系来源,7,PCR,方法检测,MRD,常用的分子标志,PCR方法检测MRD常用的分子标志,8,现代实验室诊断在血液病学中的应用及地位课件,9,现代实验室诊断在血液病学中的应用及地位课件,10,现代实验室诊断在血液病学中的应用及地位课件,11,AML1-ETO,t(8;21)(q22;q22),68%,原发性,AML,，在,M2,中的阳性率为,2040%,，在,M2b,中阳性率为,90%,少见于,M4,和,M1,，极少见于,MDS,和骨髓增生综合症,AML1-ETO+,白血病细胞有一定程度的分化能力，能分化至较成熟的嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞，且对,化疗反应较敏感,AML1-ETO+,患者对大剂量阿糖胞苷治疗效果好,，具有较高的缓解率，无病生存期长，预后较其他,AML,亚型（,M3,除外）好,AML1-ETOt(8;21)(q22;q22),12,AML1-ETO,对初发患者进行,t(8;21),和,AML1-ETO,融合基因的检测对其预后判断及治疗方案的制定相当重要,AML1-ETO,定性结果不能用于评价患者,MRD,情况,RQ-PCR,能实时反映体内,AML1-ETO,水平,。连续定量,AML1-ETO,转录本水平可判定有高复发风险的患者，以便及早治疗干预以防血液学复发,AML1-ETO对初发患者进行t(8;21)和AML1-ET,13,现代实验室诊断在血液病学中的应用及地位课件,14,此类患者进行分子监测有助于判断患者预后，调整治疗方案,淋巴瘤同一类型不同亚型鉴别诊断,感谢一直以来各位同仁们的大力支持与配合，使得我们的日常工作得以顺利、安全的进行！,此类患者进行分子监测有助于判断患者预后，调整治疗方案,二、荧光原位杂交- FISH,检测癌基因MYC 8q24 的易位是诊断Burkitts 淋巴瘤的分子标准。,临床血液学和血液检验是多缝交叉、实践性强、发展迅速的学科。,t(8;14)(q24;q43),2%AML，22%ALL和混合性白血病及某些淋巴瘤，还可见于治疗相关白血病，尤接受topoisomerase II抑制剂治疗的患者,具有CBF-MYH11的患者对化疗敏感，预后较好，故提高检测率尤具临床意义,inv(16)(p13;q22),许多临床研究发现，FLT3突变还与临床预后密切相关，尤对60岁以下的AML患者，FLT3突变患者预后较差，且可独立于核型之外,临床医师无法通过肉眼判断分型，治疗方案，预后等重要问题。,实现了PCR从定性到定量的飞跃，它以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点成为了分子生物学研究中的重要工具,淋巴组织良、恶性疾病鉴别诊断,PML-RAR,t(15;17)(q22;q21),，,98%M3,患者阳性,继,t(15;17),之后，又先后发现,4,种,M3,特异的累及,RAR,的变异性染色体易位：,t(5;17)(q35;q21),，,t(11;17)(q13;q21),，,dup(17)(q21.3;q23),，,t(11;17)(q23;q21),分别产生,NPM-RAR,，,NuMA-RAR,和,PLZF-RAR,，,STAT5b-RAR,融合基因,临床上，具有,PLZF-RAR,或,STAT5b-RAR,融合基因患者对,ATRA,治疗不敏感，其余三种染色体易位患者经,ATRA,治疗可获完全缓解,此类患者进行分子监测有助于判断患者预后，调整治疗方案PML-,15,现代实验室诊断在血液病学中的应用及地位课件,16,PML-RAR,RT-PCR,检测,PML-RAR,是敏感且特异的,APL,诊断方法，还能用于,治疗后,MRD,监测,。,PML-RAR,阳性提示的分子复发常早于临床复发,3-6,个月，为临床采取进一步治疗措施提供了保障,RQ-PCR,能有效反映患者在发病、治疗、缓解、复发整个过程的白血病细胞负荷，在,MRD,监测中比,RT-PCR,具有更高价值,PML-RARRT-PCR检测PML-RAR是敏感且特异,17,现代实验室诊断在血液病学中的应用及地位课件,18,FLT3,基因突变,Fms-related tyrosine kinase 3,FLT3,为,III,型受体酪氨酸激酶家族（还包括,c-FMS,，,PDGFR,和,c-KIT,）成员之一，该类受体因在造血过程中造血细胞的增殖和存活中发挥重要调控作用,据报道，,FLT3-ITD,和,D835,突变在,AML,中阳性率分别为,24%(385/1585),和,7%(30/429),，总阳性率超过,30%,，使其成为,AML,中最普遍发生突变的靶,基因,许多,临床研究发现，,FLT3,突变还与临床预后密切相关，尤对,60,岁以下的,AML,患者，,FLT3,突变患者预后较差，,且可独立于核型之外,FLT3基因突变Fms-related tyrosine k,19,CBF,-MYH11,inv(16)(p13;q22),及,t(16;16)(p13;q22),主要见于,M4Eo,，,10%,不伴异常嗜酸细胞,M4,，,少见于,M2,CBF,-MYH11,融合蛋白通过干扰核心结合因子（,core binding factor,CBF,）的转录激活作用而致病,具有,CBF,-MYH11,的患者对化疗敏感，预后较好，,故提高检测率尤具临床意义,CBF-MYH11inv(16)(p13;q22)及t(1,20,现代实验室诊断在血液病学中的应用及地位课件,21,DEK-CAN,t(6;9)(p23;q34),主要见于,M2,或,M4,，也见于,M1,，,MDS,-,RAEB,伴,DEK-CAN,的患者年龄一般较轻，且,预后较差,此类患者进行分子监测有助于判断患者预后，调整治疗方案,DEK-CANt(6;9)(p23;q34),22,WT-1,基因高表达,Wilms tumor 1,是无特异分子异常的急性白血病患者理想的,MRD,检测指标,伴此基因,高表达者预后差,，且表达程度与预后相关,WT-1基因高表达Wilms tumor 1,23,BCR-ABL,t(9;22)(q34;q11),1530%,成人,ALL,及,35%,儿童,ALL,9,号染色体的断裂点与,CML,相同，但,22,号染色体断裂点具有异质性,此融合蛋白,p190,刺激细胞增殖的能力比,p210,要强。在转基因试验中观察到,p190,诱发的白血病具有起病早、发展快和恶性程度高的特点,BCR-ABL+,ALL,患者预后差,，,5,年存活率,20%,，因此这些患者在缓解后需进行骨髓移植治疗,BCR-ABLt(9;22)(q34;q11),24,具有CBF-MYH11的患者对化疗敏感，预后较好，故提高检测率尤具临床意义,Fms-related tyrosine kinase 3,感谢一直以来各位同仁们的大力支持与配合，使得我们的日常工作得以顺利、安全的进行！,科学严谨的务实精神,继t(15;17)之后，又先后发现4种M3特异的累及RAR的变异性染色体易位：,RQ-PCR能有效反映患者在发病、治疗、缓解、复发整个过程的白血病细胞负荷，在MRD监测中比RT-PCR具有更高价值,t（11;14）（FISH、PCR）,QRT-PCR-荧光实时定量PCR,Interphase and metaphase FISH demonstrating a variant of the Philadelphia chromosome.,t(16;16)(p13;q22),维持治疗期间和以后的MRD监测,血液科与实验室都有着良好的发展前景，若创造机会、积极配合，未来一定会有更好、更完善的发展！,许多临床研究发现，FLT3突变还与临床预后密切相关，尤对60岁以下的AML患者，FLT3突变患者预后较差，且可独立于核型之外,实验医学发展已进入分子阶段，但仍不足以揭示所有疾病的发病机制,t(15;17)(q22;q21) ，98%M3患者阳性,BCR-ABL,具有CBF-MYH11的患者对化疗敏感，预后较好，故提高检,25,BCR-ABL,巢式,RT-PCR,检测,BCR-ABL,融合基因用于,CML,移植患者,移植后,MRD,监测,。可在患者血液学复发前的,624,个月骨髓检测就呈阳性。,RQ-PCR,还能动态观察患者治疗后,BCR-ABL,转录本水平变化情况，反映疗效。,BCR-ABL巢式RT-PCR检测BCR-ABL融合基因用于,26,现代实验室诊断在血液病学中的应用及地位课件,27,MLL,相关融合基因,累及,MLL,基因的分子异常见于,5.2%AML,，,22%ALL,和混合性白血病及某些淋巴瘤，还可见于治疗相关白血病，尤接受,topoisomerase II,抑制剂治疗的患者,MLL,基因涉及五十余种染色体易位,，产生不同的融合蛋白，且每种融合蛋白都与特定的白血病表型相关。最常见的有：,t(4;11)(q21;q23),MLL-AF4,融合基因,ALL,t(9;11)(p22;q23),MLL-AF9,融合基因,AML,t(11;19)(p13;q23),MLL-ENL,融合基因,AML,及,ALL,MLL相关融合基因 累及MLL基因的分子异常见于5.2%AM,28,血液病临床分子标志物检测,(NHL ALL,),淋巴系统白血病,Acute lymphoblastic leukemia,(,急性淋巴细胞白血病,),Lymphoproliferative disorders,（,淋巴性增生性疾病）,Malignant lymphomas,(,恶性淋巴瘤,),血液病临床分子标志物检测(NHL ALL)淋巴系统白血病,29,检测意义,帮助,诊断 & 鉴别诊断,&,早期治疗,预后提供有价值的基因组信息，指导临床管理和治疗方案的选择,检测意义帮助诊断 & 鉴别诊断 & 早期治疗,30,1.,帮助,诊断,& 鉴别诊断以及早期治疗,检测,癌基因,MYC 8q24,的,易位是诊断,Burkitts,淋巴瘤的分子标准。,Burkitts,淋巴瘤是非常恶性的淋巴瘤需要尽早治疗，但是通过常规病理学手段很难与其它淋巴瘤进行鉴别诊断。,1. 帮助诊断& 鉴别诊断以及早期治疗 检测癌,31,促进诊断,&,鉴别诊断以及早期治疗,淋巴组织良、恶性疾病鉴别诊断,淋巴瘤与淋巴组织增生性疾病相鉴别,：,分子标记, IgH,（,FISH,、,PCR),I,级滤泡性淋巴瘤（,follicular lymphoma, FL,）与滤泡增生为主要病理改变的淋巴结反应性增生相鉴别：,分子,标记, t,（,14;18,）（,FISH,、,PCR,）,免疫组化、流式细胞术,促进诊断& 鉴别诊断以及早期治疗淋巴组织良、恶性疾病鉴别诊断,32,鉴别诊断,淋巴瘤不同类型鉴别诊断,套细胞淋巴瘤（,mantle cell lymphoma, MCL,）的母细胞亚型与其它大细胞性,B,细胞淋巴瘤，尤其是,CD5,阳性的弥漫性大,B,细胞淋巴瘤（,diffuse large B-cell lymphoma, DLBCL,）相鉴别,:,分子标记, t,（,11;14,）（,FISH,、,PCR,）,小细胞性,B,细胞淋巴瘤不同类型相鉴别,如,FL,，黏膜相关淋巴组织（,mucosa associated lymphoid tissue, MALT,）淋巴瘤与,MCL:,分子标记, t,（,14;18,），,t,（,11;18,），,t,（,11;14,）（,FISH,、,PCR,）,鉴别诊断,33,淋巴瘤同一类型不同亚型鉴别诊断,DLBCL,基因表达图谱分为,3,个亚型：,生发中心,B,细胞样型,（,germinal center B-cell-like, GCB-DLBCL,）：,5,年生存率,59%,，,12q12,拷贝数增加（,FISH,）,活化,B,细胞样型（,activated B-cell-like, ABC-DLBCL,）：,5,年生存率,30%,，,3,号染色体三体,/3q,、,18q21-22,拷贝数增加,/6q21-22,缺失（,FISH,）,原发纵隔型（,primary mediastinal, PMBCL,）,：,5,年生存率,64%,，,9p21-pter,和,2p14-16,拷贝数增加（,FISH,）,皮肤,FL,鉴别诊断：,原发性皮肤,FL,：预后较好,罕见,t,（,14;18,）,(FISH, PCR),全身系统性,FL,皮肤表现,：预后较差,多见,t,（,14;18,）,(FISH, PCR),MALT 2,个分子细胞遗传学亚型：,t,（,11;18,）阴性,：不易向高级别转化、临床分期较早、对幽门螺旋杆菌（,Hp,）根除治疗效果较好,(FISH, PCR),t,（,11;18,）阳性,：临床分期较晚、侵袭性增强、对,Hp,根除治疗效果不佳,(FISH, PCR),淋巴瘤同一类型不同亚型鉴别诊断,34,套细胞淋巴瘤（mantle cell lymphoma, MCL）的母细胞亚型与其它大细胞性B细胞淋巴瘤，尤其是CD5阳性的弥漫性大B细胞淋巴瘤（diffuse large B-cell lymphoma, DLBCL）相鉴别:,RT-PCR检测PML-RAR是敏感且特异的APL诊断方法，还能用于治疗后MRD监测。,形态学缓解 - 1010以下,继t(15;17)之后，又先后发现4种M3特异的累及RAR的变异性染色体易位：,具有CBF-MYH11的患者对化疗敏感，预后较好，故提高检测率尤具临床意义,MRD监测适合于高危组患者，低危组患者似乎不需要监测,inv(16)(p13;q22),淋巴瘤同一类型不同亚型鉴别诊断,仍需寻求简便、高效、快捷的试验方法，为血液病诊断更好服务,据报道， FLT3-ITD和D835突变在AML中阳性率分别为24%(385/1585)和7%(30/429)，总阳性率超过30%，使其成为AML中最普遍发生突变的靶基因,预后提供有价值的基因组信息，指导临床管理和治疗方案的选择,Acute lymphoblastic leukemia (急性淋巴细胞白血病),初次诊断 - 1012,原发性皮肤FL：预后较好, 罕见t（14;18）(FISH, PCR),优点：FISH具有安全、快速、灵敏度高、探针能长期保存、能同时显示多种颜色等优点,不但能显示中期分裂相,还能显示于间期核.,套细胞淋巴瘤（mantle cell lymphoma, M,35,现代实验室诊断在血液病学中的应用及地位课件,36,现代实验室诊断在血液病学中的应用及地位课件,37,现代实验室诊断在血液病学中的应用及地位课件,38,现代实验室诊断在血液病学中的应用及地位课件,39,现代实验室诊断在血液病学中的应用及地位课件,40,染色体和基因改变,染色体异常,受累基因,常见白血病类型,t(8;21)(q22;q22),t(15;17)(q22;q21),t(11;17)(23;21),inv(16)(p13;q22),t(16;16)(p13;q22),t(variable;11q23),t(8;14)(q24;q43),t(9;22)(q34;q11),AML1-ETO,PML-RAR,PLZF-RAR,CBF,-,MYH11,CBF,-,MYH11,MLL,M2,M3,M3,M4EO,M4EO,M4/M5or,其他,L3,CML,ALL,AML,染色体和基因改变 染色体异常 受累基因常见白血病类型,41,微小残留病,Minimal residual disease(MRD)-,微小残留病,指,白血病诱导化疗完全缓解后或者骨髓移植后残留在体内少,量白血病细胞的状态,可能是导致白血病复发的根源,白血病,细胞负荷,初次诊断,- 10,12,形态学缓解,- 10,10,以下,分子学缓解,-,约,10,6,-10,7,微小残留病,42,检测,MRD,的意义,根据细胞负荷调整缓解后化疗方案,更早发现药物耐药性,更早预测白血病复发,评价骨髓移植净化效果,为实验研究提供依据,检测MRD的意义根据细胞负荷调整缓解后化疗方案,43,MRD,主要检测方法,一、染色体核型分析,二、荧光原位杂交,- FISH,三、流式细胞仪,-FCM,四、聚合酶链反应技术,-PCR,五、其他：细胞培养技术，免疫荧光等,MRD主要检测方法,44,染色体核型分析,常用染色体显带技术检测出染色体畸变,但其成功率依赖于标本中分裂象细胞的数量多少，从而使得检测结果各不相同，且敏感度较低，约,1,：,20,染色体核型分析常用染色体显带技术检测出染色体畸变,但其成功率,45,2%AML，22%ALL和混合性白血病及某些淋巴瘤，还可见于治疗相关白血病，尤接受topoisomerase II抑制剂治疗的患者,另外对骨髓坏死、骨髓脂肪变也具诊断意义。,inv(16)(p13;q22),M2,可在患者血液学复发前的624个月骨髓检测就呈阳性。,M4/M5or其他,inv(16)(p13;q22),t(5;17)(q35;q21)，t(11;17)(q13;q21)，dup(17)(q21.,了解骨髓细胞的成分及原始细胞分布状况,9号染色体的断裂点与CML相同，但22号染色体断裂点具有异质性,此类患者进行分子监测有助于判断患者预后，调整治疗方案,是无特异分子异常的急性白血病患者理想的MRD检测指标,血液科与实验室都有着良好的发展前景，若创造机会、积极配合，未来一定会有更好、更完善的发展！,L3,t（11;14）（FISH、PCR）,FISH,fluorescence in situ hybridization,用荧光素标记染色体特异性探针和特异性基因的,DNA,探针，通过与间期细胞核,DNA,或中期染色体,DNA,原位杂交识别染色体数目和结构的异常，可以进行定性、定位和相对定量分析 。,优点：,FISH,具有安全、快速、灵敏度高、探针能长期保存、能同时显示多种颜色等优点,不但能显示中期分裂相,还能显示于间期核,.,2%AML，22%ALL和混合性白血病及某些淋巴瘤，还可见于,46,Interphase and metaphase FISH demonstrating a variant of the Philadelphia chromosome. The genes that are rearranged are:,BCR,(green on chromosome 22)/,ABL,(orange on chromosome 9)The Ph translocation appears as dual fusion (yellow) signals.,现代实验室诊断在血液病学中的应用及地位课件,47,RT-PCR,逆转录聚合酶链反应技术,利用染色体易位形成的肿瘤特异融合基因或基因重排作为分子靶，在引物作用下，通过聚合酶链反应，短时间内将特异性序列扩增百万倍，然后用凝胶电泳显示出来,优点：特异性、灵敏度大大提高（可达,10,-5,10,-6,）,RT-PCR 逆转录聚合酶链反应技术利用染色体易位形成的肿瘤,48,QRT-PCR-,荧光实时定量,PCR,在,PCR,反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个,PCR,进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。,实现了,PCR,从定性到定量的飞跃，它以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点成为了分子生物学研究中的重要工具,目前,real-time Q-PCR,实验成本比较高，且各实验室标准不一，从而也限制了其广泛的应用。,QRT-PCR-荧光实时定量PCR在PCR反应体系中加入,49,现代实验室诊断在血液病学中的应用及地位课件,50,MRD,检测在,AML,中的应用,评价,AML,治疗预后因素,诱导治疗后白血病细胞负荷减少程度及达到,CR,时间被认为是提示预后的独立因素,MRD,检测目的：,预示分子学复发，尽早解救治疗,MRD 检测在AML中的应用评价AML治疗预后因素,51,巩固治疗结束后,MRD,检测及其意义,方法的标准化：在有经验的实验室，用低敏感（,10,-4,）,RT-PCR,方法,PML/RAR,（,+,）定义：指在完成巩固治疗后，间隔,4,周的二次骨髓标本，在两个有经验的实验室证实,标准方案巩固治疗：,MCR,可达,90%-99%,MDR,检测结果决定后续治疗选择,巩固治疗结束后MRD检测及其意义方法的标准化：在有经验的实验,52,维持治疗期间和以后的,MRD,监测,MRD,监测,适合于高危组患者，低危组患者似乎不需要监测,目前推荐：高危组患者巩固治疗后,1,年内每,1-2,个月检测,1,次，第,2,、,3,年每,3,个月,1,次,目前常用非定量,RT-PCR,，,Q-RT-PCR,的临床应用价值有待确定，但认为动态监测融合基因定量变化可为评估预后提供有益信息，便于调整治疗方案,巩固治疗后,RT-PCR,持续阴性与长期生存密切相关,一旦转为阳性提示即将血液学复发，需及时治疗,维持治疗期间和以后的MRD监测MRD监测适合于高危组患者，低,53,I级滤泡性淋巴瘤（follicular lymphoma, FL）与滤泡增生为主要病理改变的淋巴结反应性增生相鉴别：,套细胞淋巴瘤（mantle cell lymphoma, MCL）的母细胞亚型与其它大细胞性B细胞淋巴瘤，尤其是CD5阳性的弥漫性大B细胞淋巴瘤（diffuse large B-cell lymphoma, DLBCL）相鉴别:,帮助诊断 & 鉴别诊断 & 早期治疗,Fms-related tyrosine kinase 3,实验医学发展已进入分子阶段，但仍不足以揭示所有疾病的发病机制,Minimal residual disease(MRD)-微小残留病,1530%成人ALL及35%儿童ALL,inv(16)(p13;q22),RT-PCR检测PML-RAR是敏感且特异的APL诊断方法，还能用于治疗后MRD监测。,常用染色体显带技术检测出染色体畸变,但其成功率依赖于标本中分裂象细胞的数量多少，从而使得检测结果各不相同，且敏感度较低，约1：20,血液病临床分子标志物检测(NHL ALL),为研究白血病的发病机制打下基础,许多临床研究发现，FLT3突变还与临床预后密切相关，尤对60岁以下的AML患者，FLT3突变患者预后较差，且可独立于核型之外,RQ-PCR能有效反映患者在发病、治疗、缓解、复发整个过程的白血病细胞负荷，在MRD监测中比RT-PCR具有更高价值,维持治疗期间和以后的MRD监测,22,号染色体,9,号染色体,BCR,ABL,1,13,或,14,2,11,210 KD,蛋白,BCR-ABL,基因,BCR-ABL,mRNA,Q-PCR,I级滤泡性淋巴瘤（follicular lymphoma,54,CD34 PE,CD15 FITC,MRD (1),MRD (2),2m after auto-SCT,3m after auto-SCT,0.24%,0.11%,0.07%,0%,15+/34+/33+,CD34 PECD15 FITCMRD (1)MRD (2),55,干细胞学与实验室检测,干细胞检测,流式细胞技术,HLA,配型,干细胞成活检测,细胞分离,干细胞学与实验室检测干细胞检测流式细胞技术HLA配型干细胞成,56,展望,监测,MRD,对临床治疗策略的指导具体化,检测技术的改进，标准化,拓宽,MRD,检测应用范围,如淋巴瘤,多发性骨髓瘤等,进一步深入,MRD,的实验室研究，如对,MRD,细胞定位，内环境对其生长的影响，增殖动力学，与正常造血间的关系等,展望监测MRD对临床治疗策略的指导具体化,57,实验医学发展已进入分子阶段，但仍不足以揭示所有疾病的发病机制,由于基因的多态性，导致了个体差异，故未来的方向更应趋向于个体化,仍需寻求简便、高效、快捷的试验方法，为血液病诊断更好服务,实验医学发展已进入分子阶段，但仍不足以揭示所有疾病的发病机制,58,感谢一直以来各位同仁们的大力支持与配合，使得我们的日常工作得以顺利、安全的进行！,血液科与实验室都有着良好的发展前景，若创造机会、积极配合，未来一定会有更好、更完善的发展！,感谢实验室给我们这样一个沟通和交流的机会，让我们彼此能更进一步的了解，更好的合作！,谢 谢,感谢一直以来各位同仁们的大力支持与配合，使得,59,血液科科训,百折不挠的拼搏精神,科学严谨的务实精神,敢为人先的创新精神,激情和谐的团队精神,血液科科训 百折不挠的拼搏精神,60,谢谢大家,谢谢大家,61,PML-RAR,t(15;17)(q22;q21),，,98%M3,患者阳性,继,t(15;17),之后，又先后发现,4,种,M3,特异的累及,RAR,的变异性染色体易位：,t(5;17)(q35;q21),，,t(11;17)(q13;q21),，,dup(17)(q21.3;q23),，,t(11;17)(q23;q21),分别产生,NPM-RAR,，,NuMA-RAR,和,PLZF-RAR,，,STAT5b-RAR,融合基因,临床上，具有,PLZF-RAR,或,STAT5b-RAR,融合基因患者对,ATRA,治疗不敏感，其余三种染色体易位患者经,ATRA,治疗可获完全缓解,PML-RARt(15;17)(q22;q21) ，98,62,FLT3,基因突变,Fms-related tyrosine kinase 3,FLT3,为,III,型受体酪氨酸激酶家族（还包括,c-FMS,，,PDGFR,和,c-KIT,）成员之一，该类受体因在造血过程中造血细胞的增殖和存活中发挥重要调控作用,据报道，,FLT3-ITD,和,D835,突变在,AML,中阳性率分别为,24%(385/1585),和,7%(30/429),，总阳性率超过,30%,，使其成为,AML,中最普遍发生突变的靶,基因,许多,临床研究发现，,FLT3,突变还与临床预后密切相关，尤对,60,岁以下的,AML,患者，,FLT3,突变患者预后较差，,且可独立于核型之外,FLT3基因突变Fms-related tyrosine k,63,CBF,-MYH11,inv(16)(p13;q22),及,t(16;16)(p13;q22),主要见于,M4Eo,，,10%,不伴异常嗜酸细胞,M4,，,少见于,M2,CBF,-MYH11,融合蛋白通过干扰核心结合因子（,core binding factor,CBF,）的转录激活作用而致病,具有,CBF,-MYH11,的患者对化疗敏感，预后较好，,故提高检测率尤具临床意义,CBF-MYH11inv(16)(p13;q22)及t(1,64,DEK-CAN,t(6;9)(p23;q34),主要见于,M2,或,M4,，也见于,M1,，,MDS,-,RAEB,伴,DEK-CAN,的患者年龄一般较轻，且,预后较差,此类患者进行分子监测有助于判断患者预后，调整治疗方案,DEK-CANt(6;9)(p23;q34),65,现代实验室诊断在血液病学中的应用及地位课件,66,DLBCL基因表达图谱分为3个亚型：,t(8;21)(q22;q22),具有CBF-MYH11的患者对化疗敏感，预后较好，故提高检测率尤具临床意义,Wilms tumor 1,inv(16)(p13;q22),许多临床研究发现，FLT3突变还与临床预后密切相关，尤对60岁以下的AML患者，FLT3突变患者预后较差，且可独立于核型之外,促进诊断& 鉴别诊断以及早期治疗,仍需寻求简便、高效、快捷的试验方法，为血液病诊断更好服务,标准方案巩固治疗：MCR可达90%-99%,根据细胞负荷调整缓解后化疗方案,检测癌基因MYC 8q24 的易位是诊断Burkitts 淋巴瘤的分子标准。,具有CBF-MYH11的患者对化疗敏感，预后较好，故提高检测率尤具临床意义,M4EO,据报道， FLT3-ITD和D835突变在AML中阳性率分别为24%(385/1585)和7%(30/429)，总阳性率超过30%，使其成为AML中最普遍发生突变的靶基因,QRT-PCR-荧光实时定量PCR,鉴别诊断,淋巴瘤不同类型鉴别诊断,套细胞淋巴瘤（,mantle cell lymphoma, MCL,）的母细胞亚型与其它大细胞性,B,细胞淋巴瘤，尤其是,CD5,阳性的弥漫性大,B,细胞淋巴瘤（,diffuse large B-cell lymphoma, DLBCL,）相鉴别,:,分子标记, t,（,11;14,）（,FISH,、,PCR,）,小细胞性,B,细胞淋巴瘤不同类型相鉴别,如,FL,，黏膜相关淋巴组织（,mucosa associated lymphoid tissue, MALT,）淋巴瘤与,MCL:,分子标记, t,（,14;18,），,t,（,11;18,），,t,（,11;14,）（,FISH,、,PCR,）,DLBCL基因表达图谱分为3个亚型：鉴别诊断,67,染色体和基因改变,染色体异常,受累基因,常见白血病类型,t(8;21)(q22;q22),t(15;17)(q22;q21),t(11;17)(23;21),inv(16)(p13;q22),t(16;16)(p13;q22),t(variable;11q23),t(8;14)(q24;q43),t(9;22)(q34;q11),AML1-ETO,PML-RAR,PLZF-RAR,CBF,-,MYH11,CBF,-,MYH11,MLL,M2,M3,M3,M4EO,M4EO,M4/M5or,其他,L3,CML,ALL,AML,染色体和基因改变 染色体异常 受累基因常见白血病类型,68,QRT-PCR-,荧光实时定量,PCR,在,PCR,反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个,PCR,进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。,实现了,PCR,从定性到定量的飞跃，它以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点成为了分子生物学研究中的重要工具,目前,real-time Q-PCR,实验成本比较高，且各实验室标准不一，从而也限制了其广泛的应用。,QRT-PCR-荧光实时定量PCR在PCR反应体系中加入,69,