结核分枝杆菌课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,结核分枝杆菌,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,结核分枝杆菌,26、我们像鹰一样，生来就是自由的，但是为了生存，我们不得不为自己编织一个笼子，然后把自己关在里面。博莱索,27、法律如果不讲道理，即使延续时间再长，也还是没有制约力的。爱科克,28、好法律是由坏风俗创造出来的。马克罗维乌斯,29、在一切能够接受法律支配的人类的状态中，哪里没有法律，那里就没有自由。洛克,30、风俗可以造就法律，也可以废除法律。塞约翰逊,结核分枝杆菌结核分枝杆菌26、我们像鹰一样，生来就是自由的，但是为了生存，我们不得不为自己编织一个笼子，然后把自己关在里面。博莱索,27、法律如果不讲道理，即使延续时间再长，也还是没有制约力的。爱科克,28、好法律是由坏风俗创造出来的。马克罗维乌斯,29、在一切能够接受法律支配的人类的状态中，哪里没有法律，那里就没有自由。洛克,30、风俗可以造就法律，也可以废除法律。塞约翰逊结核分枝杆菌2021/4/102结核分枝杆菌选题？2021/4/103结核分枝杆菌,结核分枝杆菌26、我们像鹰一样，生来就是自由的，但是为了生存,1,结核分枝杆菌课件,2,结核分枝杆菌课件,3,结核分枝杆菌课件,4,结核分枝杆菌课件,5,3.,医生的需求,有医生咨询结核病的检查,2024/8/19,6,结核分枝杆菌,3.医生的需求有医生咨询结核病的检查2023/8/296结核,4.,各类考试常见的考点,中级职称,高级职称,研究生考试,2024/8/19,7,结核分枝杆菌,4.各类考试常见的考点中级职称2023/8/297结核分枝杆,分枝杆菌属,Mycobacterium,一类直或微弯曲的杆菌，有分枝生长趋势，可呈丝,状或菌丝样生长。细胞壁脂质含量高（分枝菌酸），,耐酸，抗酸染色阳性。对氧和营养要求高，生长慢。,又称,抗酸杆菌,(,acid-fast bacillus,)-,不易着色，可抵抗盐酸酒精的脱色作用,分类属放线菌科，本属有,80,多种，可分三类：,结核分枝杆菌、非结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌。,细菌的,DNA,G+Cmol,%,为,62,70,2024/8/19,8,结核分枝杆菌,分枝杆菌属Mycobacterium2023/8/298结核,结核分枝杆菌,一、分类,结核分枝杆菌,（,Mycobacterium,Tuberculosis,，,TB,）复合群：,人结核分枝杆菌,(,M.t,uberculosis),牛分枝杆菌,(M.bovis),非洲分枝杆菌,田鼠分枝杆菌,2024/8/19,9,结核分枝杆菌,结核分枝杆菌一、分类2023/8/299结核分枝杆菌,二、细菌特性,形态染色,TB,菌细长略弯曲，有时可见,分枝,，呈单、成堆或,成束,排列，无鞭毛、无芽胞，,有荚膜,。可出现多形性，在陈旧的病灶和培养物中，形态常不典型，可呈颗粒状，串球状，短棒状，长丝形等。,TB,菌,革兰染色阳性,。,荧光染料金胺,O,染色，在荧光下菌体呈,橘黄色,。,萋尼氏抗酸性染色法染色，菌体染成,红色,。,2024/8/19,10,结核分枝杆菌,二、细菌特性2023/8/2910结核分枝杆菌,培养特性,专性需氧菌,，,3%,5%,的,CO2,能促进生长。最适,ph 6.5,6.8,，最适温度为,37,，低于,30,难生长，,营养要求高,，在,含有蛋黄、马钤薯、甘油和天门冬素等的固体培养基上才能,生长，且,生长缓慢,。,固体培养基,-,典型菌落为干燥、坚硬、表面呈颗粒状、,乳酪色或淡黄色，,形似菜花样,。,液体培养基,-,生长较快呈粗糙皱纹状菌膜生长，,有毒株可,呈索状生长,（吐温干扰）,。,2024/8/19,11,结核分枝杆菌,培养特性2023/8/2911结核分枝杆菌,生化反应,生化不活泼。不发酵糖类，,多数菌株触酶阳性，热触酶,阴性，非结核分枝杆菌正好相反。,结核分枝杆菌烟酸和硝酸盐试验阳性，耐噻吩,2,羧酸,肼,(T,2,H),，牛型则相反。有毒株中性红试验阳性。,变异性,TB,菌易发生形态、菌落、最适生长温度、毒力和耐药性的变异。如卡介苗、,Much,颗粒和多重耐药菌株出现等。,2024/8/19,12,结核分枝杆菌,生化反应 2023/8/2912结核分枝杆菌,抵抗力,TB,菌细胞壁含大量脂类，抵抗力较强,干痰中存活,6-8,个月，粘附尘埃上保持传染性,8-10,天，阴湿处能生存,5,个月以上。,3%HCL,或,4%NaOH,、,6%H,2,SO,4,溶液中能耐受,30,分钟,紫外线、酒精的抵抗力弱。,(,如在水中煮沸,1,分钟，阳光曝晒,2,3,小时，,75%,酒精内数分钟即死亡。,),最简单的方法是,直接焚烧带有病菌的痰纸,。,2024/8/19,13,结核分枝杆菌,2023/8/2913结核分枝杆菌,致病物质,（未发现产生内毒素、外毒素、侵袭性酶）,1.,脂质,脂质占菌体干重的,20,40%,，占胞壁干重的,60%,。,磷脂,：能刺激单核细胞增生，并可抑制蛋白酶的分解作用，使病灶形成干酷样坏死。,索状因子,：是分枝菌酸与海藻糖的复合物，具有破坏细胞线粒体膜，毒害微粒体酶类，抑制中性粒细胞游走和吞噬作用，引起慢性肉牙肿。,具有该物质的,TB,菌毒株，在液体培养基中能紧密粘成索状,。,蜡质,D,：是一种肽糖脂与分枝菌酸复合物，能,引起迟发型变态反应,，并具有佐剂作用。,硫酸脑苷脂,：,TB,菌毒株胞壁中含有，能抑制吞噬细胞中的吞噬体与溶酶体融合，使结核杆菌在细胞内存活。,2024/8/19,14,结核分枝杆菌,致病物质（未发现产生内毒素、外毒素、侵袭性酶）2023/8/,致病物质,2.,荚膜,主要为多糖，少量脂质和蛋白质。,粘附和入侵分解物质提供营养防止有害物质入侵,3.,蛋白质,TB,菌菌体内都含有数种蛋白质，其中重要的蛋白质是,结核菌素,。结核茵素与蜡质,D,结合，能引起较强的迟发型变态反应。其他蛋白质可引起机体产生相应的抗体，但无保护作用。,2024/8/19,15,结核分枝杆菌,致病物质2023/8/2915结核分枝杆菌,三、临床意义,TB,菌引起结核病。对人类致病的有人结核分枝杆菌、牛型结核杆菌和非洲分枝杆菌，,人型结核杆菌感染引起的发病率最高。,成为全球性重大公共卫生问题。,所致疾病,TB,菌的致病作用可能是细菌在细胞内增殖引起,炎症反应，,以,及诱导机体产生,免疫反应性损伤，属于,IV,型（迟发型）变态反应,。通过呼吸道、消化道和破损的皮肤粘膜进入机体，侵犯多种组织器官，引起相应,器官，,其中以肺结核最常见,。可分原发感染和继发感染。,免疫性,TB,菌的感染率很高，发病率却较低，这表明人体感染结核杆,菌可获得一定的抗结核免疫力，这种免疫称为,有菌免疫,或传,染性免疫。,TB,菌的免疫原,r,RNA,和变应原结核菌素诱发机体,产生,由,T,淋巴细胞介导细胞免疫反应,。,2024/8/19,16,结核分枝杆菌,三、临床意义2023/8/2916结核分枝杆菌,导致的疾病,1.,肺结核，飞沫传播为最常见方式,原发性肺结核,血行播散型肺结核,浸润型肺结核,慢性纤维空洞型肺结核,结核性胸膜炎,2024/8/19,17,结核分枝杆菌,导致的疾病1.肺结核，飞沫传播为最常见方式2023/8/29,肺结核实验室诊断,结核菌检查：,痰中找到结核菌是确诊肺结核的主要依据。,直接厚涂片阳性率优于薄涂片,无痰或儿童不会咳嗽，可采用清晨的胃洗液找结核菌，成人亦可通过纤支镜刷片或涮洗液查找结核菌,PCR,法，,40,个结核菌即可出现阳性结果,2024/8/19,18,结核分枝杆菌,肺结核实验室诊断2023/8/2918结核分枝杆菌,2.,肠结核,患者多有开放性肺结核或喉结核，经常吞咽含结核杆菌的痰液而患病。，主要位于回盲部。,辅助诊断：,结核菌素试验,X,线胃肠钡餐造影或钡剂灌肠,结肠镜，活检找到干酪样坏死性肉芽肿或结核杆菌具有确诊意义。,大便找抗酸杆菌？,大便结核杆菌,PCR,？,2024/8/19,19,结核分枝杆菌,2.肠结核2023/8/2919结核分枝杆菌,3.,泌尿生殖系统结核,-,尿液,4.,结核性脑膜炎,-,脑脊液,5.,结核性腹膜炎,-,腹水,6.,关节结核,-,关节液,2024/8/19,20,结核分枝杆菌,3.泌尿生殖系统结核-尿液2023/8/2920结核分枝,四、微生物学检验,临床标本,涂片检查分离培养核酸检测抗体检测,直接涂片集菌涂片处理标本或无污染标本,染色液体培养基固体培养基动物试验,（罗氏或米氏）,抗酸,.,金胺,O.,37,， 涂片镜检,仪器培养,7,天生长,7,天生长,快速生长菌慢生长菌菌种鉴定,抗酸染色菌落特点,鉴定试验药敏试验,2024/8/19,21,结核分枝杆菌,四、微生物学检验2023/8/2921结核分枝杆菌,标本采集,感染部位不同，取不同的标本,常见标本：,痰、纤支镜刷片、尿,、,胸腹水、脑脊液、关节液等,检查方法,1.,显微镜检查,1,）直接涂片：用萋尼氏法染色，若镜检找到抗酸性杆菌，通常应报告：,“,找到抗酸性杆菌,”,，需进一步分离培养鉴定。,2,）浓缩集菌涂片：如标本中菌量少，杂菌和杂质多时，用离心沉淀法将菌浓缩聚集，再取沉淀物涂片作抗酸染色检查,荧光染料金胺,O,染色，在荧光下菌体呈,橘黄色,。,萋尼氏抗酸性染色法染色，菌体染成,红色,。,2024/8/19,22,结核分枝杆菌,标本采集2023/8/2922结核分枝杆菌,2024/8/19,23,结核分枝杆菌,2023/8/2923结核分枝杆菌,2024/8/19,24,结核分枝杆菌,2023/8/2924结核分枝杆菌,2024/8/19,25,结核分枝杆菌,2023/8/2925结核分枝杆菌,2024/8/19,26,结核分枝杆菌,2023/8/2926结核分枝杆菌,2024/8/19,27,结核分枝杆菌,2023/8/2927结核分枝杆菌,菜花样菌落,2024/8/19,28,结核分枝杆菌,菜花样菌落2023/8/2928结核分枝杆菌,2,、分离培养,TB,菌接种,前处理,液化和处理杂菌,4%NaOH,、,6%H,2,SO4,、胰酶,15-20min,培养基选择,罗氏培养基,鉴别培养基,(PNB,、,T,2,H,、,NAP),仪器培养,Bacte460,、,BacT/ALERT3D,液体培养基,培养时间,长 一般,6-8,周,鉴定,1.,染色性,2.,菌落特征,3.,生长速度,4.,色素产生,5.,生化试验,2024/8/19,29,结核分枝杆菌,2、分离培养2023/8/2929结核分枝杆菌,鉴别试验,：,NAP(p-nitro-acetylamino-hydroxy-propiophenome),抑制试验,结核分枝杆菌,NAP-,非结核分枝杆菌,NAP+,2024/8/19,30,结核分枝杆菌,鉴别试验：2023/8/2930结核分枝杆菌,药物敏感试验,动物接种,菌株分离和检测毒力,2024/8/19,31,结核分枝杆菌,药物敏感试验2023/8/2931结核分枝杆菌,3,、,结核菌素试验,：,OT,或,PPD,迟发型超敏反应,结核菌素的纯蛋白衍化物（,PPD,）皮内注射,0.1ml,（,5IU,）硬结,5mm,为阳性反应，如无反应，可在一周后再用,5IU,，如仍为阴性，大致可除外结核感染，但也要考虑感染的窗口期，还未建立充分的变态反应，应用糖皮质激素等免疫抑制药物、免疫力低下或营养不良也成阴性反应。,结核菌素试验对婴幼儿的诊断价值较成人大，,3,岁以下强阳性反应者，应视为有新近感染的活动性肺结核。,2024/8/19,32,结核分枝杆菌,3、结核菌素试验：OT或PPD 迟发型超敏反应2023/,4,、,抗体检测,检测,PPDIgG,辅助诊断。目前,血清抗阿拉伯糖甘露糖脂,IgG,抗体是一种新的较好的诊断结核病的指标。,5,、抗原检测,6,、,核酸检测,快速诊断：,PCR-,特异性核酸探针,7,、高效液相色谱分析技术,测分枝菌酸可鉴定菌种,8,、全血干扰素测定,2024/8/19,33,结核分枝杆菌,4、抗体检测2023/8/2933结核分枝杆菌,2024/8/19,34,结核分枝杆菌,2023/8/2934结核分枝杆菌,基于,T,淋巴细胞检测结核感染的原理,结核感染的免疫应答反应以,细胞免疫,为主，结核感染后体内长期存在,抗原特异性的记忆性,T,细胞,当再次遇到抗原刺激时，能迅速活化增殖，释放,r,干扰素,r,干扰素,是结核分枝杆菌感染后机体免疫应答中最重要的细胞因子,2024/8/19,35,结核分枝杆菌,基于T淋巴细胞检测结核感染的原理2023/8/2935结核分,由来,-,干扰素释放试验,（,IGRAs,）,IFN-,在调节对结核分支杆菌的细胞介导的免疫反应中起重要作用，从而使得（,interferon gamma release assays,）,IGRAs,用于检测结核感染。,IGRAs,通过检测代表结核分支杆菌的抗原刺激,T,淋巴细胞反应后释放,IFN-,的量来判断是否存在结核杆菌感染。,2024/8/19,36,结核分枝杆菌,由来-干扰素释放试验（IGRAs）IFN-在调节对,T-SPOT-TB,定义,以,结核特异的混合抗原,A,和混合抗原,B,（分别为,ESAT-6,和,CFP-10,的部分多肽片断）,刺激,结核杆菌感染者外周血单核细胞中存在结核特异的活化,T,淋巴细胞分泌干扰素,，从而应用,ELISPOT,方法检测,对结核杆菌反应的效应,T,细胞,数量，,对结核杆菌感染进行辅助诊断。,特异抗原,ELISPOT,活化的,T,细胞,否存在感染,2024/8/19,37,结核分枝杆菌,T-SPOT-TB定义以结核特异的混合抗原A和混合抗原B（,T-SPOT-TB,几个概念,ELISPOT,（,enzyme-linked immunospot assay,）是一种新型的免疫酶技术，它是从单细胞水平检测分泌抗体细胞或分泌细胞因子细胞,。（简单说：可以数出分泌特异因子的细胞的个数）,ESAT-6,和,CFP-10,蛋白：,存在结核分枝杆菌,及少数致病非结核分枝杆菌,中名为“,RD1”,的基因序列,，编码产生两种蛋白,。,在卡介苗菌株和大部分环境中的分枝杆菌基因中则缺乏,次序列。,2024/8/19,38,结核分枝杆菌,T-SPOT-TB几个概念ELISPOT（enzyme-l,基于,T,淋巴细胞检测结核感染的原理,T-SPOT.TB,技术：,利用结核杆菌感染者,外周血单个核细胞（,PBMC,）,中存在,结核特异性,T,细胞,，,这些淋巴细胞在受到,结核特异抗原刺激,后,分泌,r,干扰素,而设计的,T,细胞免疫斑点试验。,检测外周血中受,结核特异抗原刺激,释放,r,干扰素,的,T,淋巴细胞,，经酶联免疫显色后，通过,ELISPOT,分析系统,对斑点进行计数，,1,个斑点代表一个细胞，计算,计算对结核杆菌反应的效应,T,细胞数量,2024/8/19,39,结核分枝杆菌,基于T淋巴细胞检测结核感染的原理T-SPOT.TB技术：20,基于,T,淋巴细胞检测结核感染的原理,包,2024/8/19,40,结核分枝杆菌,基于T淋巴细胞检测结核感染的原理包2023/8/2940结核,基于,T,淋巴细胞检测结核感染的原理,2024/8/19,41,结核分枝杆菌,基于T淋巴细胞检测结核感染的原理2023/8/2941结核分,基于,T,淋巴细胞检测结核感染的原理,2024/8/19,42,结核分枝杆菌,基于T淋巴细胞检测结核感染的原理2023/8/2942结核分,基于,T,淋巴细胞检测结核感染的原理,空白对照孔内斑点数小于,10,且阳性对照孔内斑点数大于,20,时视为试验有效,T-SPOT.TB,试验结果用每,10,6,PBMCs,中斑点形成细胞（,SFCs,）的数目来描述，即,SFCs/10,6,PBMCs,2024/8/19,43,结核分枝杆菌,基于T淋巴细胞检测结核感染的原理2023/8/2943结核分,T-SPOT.TB,的临床意义,T-SPOT.TB,高灵敏度,2024/8/19,44,结核分枝杆菌,T-SPOT.TB的临床意义2023/8/2944结核分枝杆,T-SPOT-TB,解释,非黄金标准,敏感性,95.3%-98.8%,特异性,94.1%-100%,萨斯分枝杆菌( My cobacter ium kans asii ) 、海分枝杆菌(My cobacter ium mar inum ) 、斯氏分枝杆菌( My cobact,e,r ium sz ul gai ) 等少数分枝杆菌中也存在完整RD1,区，编码,ESAT􀀁6 和CFP􀀁10, 可造成检测结果成假阳性,。,2024/8/19,45,结核分枝杆菌,T-SPOT-TB解释非黄金标准2023/8/2945结核,T-SPOT-TB,应用,在活动性结核病中的诊断意义,1.,敏感性,86-94%,，特异性,89-99%,2.,在肝移植术后、艾滋病、血液肿瘤等免疫抑制患者中，,T-SPOT-TB,阳性率略低于免疫正常组，但仍具有较高的敏感性，且优于结核菌素试验。,3.,在肺外结核患者诊断中的，敏感性优于结核菌素试验。,4.,对小于,4,岁儿童，与结核菌素实验比较敏感性无优势，美国,CDC,更推荐结核菌素实验。,2024/8/19,46,结核分枝杆菌,T-SPOT-TB应用在活动性结核病中的诊断意义2023/,T-SPOT-TB,应用,在结核性脑膜炎、结核性胸膜炎中的诊断意义,1.,敏感性优于,ADA,、,TB-DNA,，约在,62-75%,，特异性无统计学差异。,在结核病治疗中的评价意义,1.,其数值高低与严重程度无关。,2.,效应,T,细胞随结核杆菌的清除而消失，其阴性及阳性结果可作为评估治疗效果的手段之一 。,2024/8/19,47,结核分枝杆菌,T-SPOT-TB应用在结核性脑膜炎、结核性胸膜炎中的诊断,T-SPOT-TB,应用,在潜伏性结核杆菌感染者的筛选中,1.,敏感性优于结核菌素试验，且不受卡介苗接种影响。,2.,较少受到其他分支杆菌感染影响。,3.,其阴性预测值高于阳性预测值，排除诊断意义更高。,2024/8/19,48,结核分枝杆菌,T-SPOT-TB应用在潜伏性结核杆菌感染者的筛选中202,结核分枝杆菌的耐药性检测,结核分枝杆菌的耐药机制：由于结核杆菌的特定基因的某些碱基出现突变（插入、缺失、替换）而造成,（,1,）耐利福平分子机制：作用靶标编码基因突变,编码,531,位氨基酸的碱基,TCG TTG,编码,526,位氨基酸的碱基,CAC TAC,2024/8/19,49,结核分枝杆菌,结核分枝杆菌的耐药性检测结核分枝杆菌的耐药机制：由于结核杆菌,（,2,）耐异烟肼分子机制,过氧化氢酶,-,过氧化物酶编码基因,katG,基因的点突变、缺失、插入,（,3,）耐氨基糖苷类药物分子机制,编码核糖体,16SrRNA,的,rrs,基因与编码核糖体蛋白,S12,的,rpsL,基因发生突变，从而降低了链霉素结合到核糖体的能力，形成耐药。,2024/8/19,50,结核分枝杆菌,（2）耐异烟肼分子机制2023/8/2950结核分枝杆菌,（,4,）耐吡嗪酰胺分子机制,编码吡嗪酰胺酶的基因,pncA,突变,（,5,）耐乙胺丁醇分子机制,操纵子,embB,基因突变,（,6,）耐氟喹诺酮类药物分子机制,编码,DNA,旋转酶的基因,gyrA,突变,2024/8/19,51,结核分枝杆菌,（4）耐吡嗪酰胺分子机制2023/8/2951结核分枝杆菌,结核分枝杆菌耐药检测的分子生物技术,（,1,）,DNA,测序,（,2,）,PCR-SSCP,（,3,）,PCR-RFLP,（,4,）,PCR-RDB,（,5,）基因芯片技术,2024/8/19,52,结核分枝杆菌,结核分枝杆菌耐药检测的分子生物技术（1）DNA测序2023/,Thank You !,再见！,2024/8/19,53,结核分枝杆菌,Thank You !再见！2023/8/2953结核分枝杆,END,16,、业余生活要有意义，不要越轨。,华盛顿,17,、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。,罗素,贝克,18,、最大的挑战和突破在于用人，而用人最大的突破在于信任人。,马云,19,、自己活着，就是为了使别人过得更美好。,雷锋,20,、要掌握书，莫被书掌握；要为生而读，莫为读而生。,布尔沃,END16、业余生活要有意义，不要越轨。华盛顿,54,