实验11染色体分带技术课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,实验,11,染色体分带技术,一、实验目的,了解染色体分带技术的原理及应用,了解染色体,G,带和,C,带显示的原理,掌握染色体,G,带和,C,带显色技术流程,2024/8/19,1,实验11 染色体分带技术一、实,二、实验原理,人们用物理、化学因素处理后，再用染料对染色体进行分化染色，使每条染色体上出现明暗相间，或深浅不同带纹的技术称为显带技术（,banding technique,）。染色带的数目、部位、宽窄和着色深浅均具有相对稳定性，所以每一条染色体都有固定的分带模式，即称带型。染色体带型是鉴别染色体的重要依据。,2024/8/19,2,二、实验原理人们用物理、化学因素处理后，再用染料对染色体进行,二、实验原理,G,带,是将处于分裂中期的细胞经胰酶或碱、热、尿素等处理后，再经吉姆萨染料染色后所呈现的区带，是目前被广泛应用的一种带型。其特性是显带方法简单恒定，带型稳定，保存时间长。一般认为，易着色的阳性带为含有,AT,多的染色体节段，在间期核呈固缩状态，而且是,DNA,晚复制区之一，有相当一部分中度重复序列,DNA,可能在,G,带区；相反，含,GC,多的染色体段则不易着色。也有人认为，,Giemsa,染料在,G,带区是与,DNA,结合，而且与结合,DNA,的染色质非组蛋白有关。总的来说，,G,显带的机制还未搞清。,C,带,是染色体标本经强碱（,NaOH,或,Ba(OH),2,）,热处理后，在着丝粒周围区域和异染色质区经,Giemsa,染成深色，而染色体两臂的常染色质部分仅有浅淡轮廓。这是一种染色体上不显示带纹的特殊显带法，主要显示着丝粒区和异染色质区的变化。,2024/8/19,3,二、实验原理G带是将处于分裂中期的细胞经胰酶或碱、热、尿素等,二、实验原理,双翅目昆虫,(,果蝇、摇蚊等,),幼虫期的唾腺细胞很大，其核内的染色体称为唾腺染色体,。,由于它们比普通染色体大,100-150,倍，宽约,5,m,，,长约,400,m,，,因而也称为巨大染色体,。,另外唾腺染色体经多次复制而不分开，所以又称作多线染色体。唾腺染色体经染色后出现深浅不同，疏密有别的横纹，且其数目和位置常常是恒定的，标志着物种的特征。,2024/8/19,4,二、实验原理 双翅目昆虫(果蝇、摇蚊等)幼虫,三、实验仪器材料,洋葱、蚕豆、大蒜根尖,果蝇唾腺,1 N HCl,溶液,Ba(OH),2,溶液,Giemsa,染液,显微镜,2024/8/19,5,三、实验仪器材料洋葱、蚕豆、大蒜根尖2023/8/285,四、实验步骤,2024/8/19,6,四、实验步骤2023/8/286,四、实验步骤,2024/8/19,7,四、实验步骤2023/8/287,唾腺呈半透明，球棒状，前端较细，后端粗钝，有时成对粘在一起成“,V”,字型，其外侧有时附有乳白或淡黄色的脂肪， 此时应保留唾腺形态的完整，因为食道和肠管也是半透明的，如果唾腺不完整，就很难判断唾腺和肠道的取弃。,四、实验步骤,2024/8/19,8,唾腺呈半透明，球棒状，前端较细，后端粗钝，,果蝇唾腺染色体制片,把唾腺剔出移到玻片的干净处，并清除其余器官和组织。如果唾腺上附有脂肪，应把乳白色或淡黄色的脂肪清除干净，保留半透明的唾腺。,把多余的生理盐水用吸水纸吸干，加一滴,1 N,盐酸；室温下水解,2,分钟，然后吸干。,空气干燥一周,四、实验步骤,2024/8/19,9,果蝇唾腺染色体制片把唾腺剔出移到玻片的干净处，并清除其余器官,植物根尖染色体制片,前处理：根尖用,0.1%,秋水仙素溶液处理,4,12,小时。,固定： 用水洗净处理过的根尖，经,Carnoy,固定液固定,2-24,小时，换入,70%,酒精保存。,解离,：,取出根尖，用蒸馏水洗净，放入1N HCl中60解离 810min，再用蒸馏水洗净。,低渗：,倒去酶液，用蒸馏水慢慢冲洗2次，然后,在蒸馏水中浸泡,30 min,。,后固定,:,取出材料于载片，滴加新鲜,Carnoy,固定液，固定,10-30 min,涂片：用镊子将材料捣碎，边捣边加固定液，去掉大块残渣。,空气干燥一周,四、实验步骤,2024/8/19,10,植物根尖染色体制片前处理：根尖用0.1%秋水仙素溶液处理4,G,带,显色,（,1,）将制好的染色体标本，置,72,75,烤箱中烤片,3h,。,（,2,）放入预温至,37,的,0.025%,胰酶溶液中（,pH=7.2,7.4,）消化,1min,左右，每次的作用时间并不完全相同，可先试一张片子，再根据显带效果调整胰酶作用时间。,（,3,）在,Giemsa,染液中染色,10min,，自来水冲洗干净，晾干后，即可阅片。,（,4,）镜检：在显微镜高倍目镜下检查显带标本，在染色体上若出现清晰的深浅相间的带型，即为可取标本，可供摄像分析,四、实验步骤,2024/8/19,11,G带显色（1）将制好的染色体标本，置7275烤箱中烤片,四、实验步骤,1.,制片、烤片同,G,显带技术（,65,，,2,小时）。,2.,染色体标本在室温下用,0.1 N HCl,水解,15,分钟后蒸馏水冲洗。,3. 2% Ba(OH)2,，,65,处理,10,分钟后蒸馏水冲洗。,4. 2SSC,，,65,处理,1,小时。,5.,冲洗冷却后用,1,：,10 Giemsa,稀释液染色,7,分钟。,6.,冲洗后晾干，镜检。,C,带,显色,2024/8/19,12,四、实验步骤1. 制片、烤片同G显带技术（65，2小时）。,五、实验结果,G,带,显色,2024/8/19,13,五、实验结果G带显色2023/8/2813,五、实验结果,C,带,显色,2024/8/19,14,五、实验结果C带显色2023/8/2814,唾腺染色体显色,五、实验结果,2024/8/19,15,唾腺染色体显色五、实验结果2023/8/2815,六、思考题,染色体显带有哪些技术？,染色体显,G,带的关键步骤是什么？,染色体显,C,带的关键步骤是什么？,2024/8/19,16,六、思考题染色体显带有哪些技术？2023/8/2816,