瓜类细菌性果斑病菌抗铜差异性检测课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,答 辩 人：单亚楠,指导老师：高洁 教授,赵廷昌 研究员,瓜类细菌性果斑病菌抗铜差异性检测,答 辩 人：单亚楠 瓜类细菌性果斑病菌抗铜差异性检,1,研究内容,2.,材料与方法,1.,前言,3.,5.,致 谢,结果与分析,4.,结论与讨论,研究内容 2.材,2,1 前 言,瓜类细菌性果斑病（BFB）是发生在葫芦科植物上的一种严重的世界性病害，该病害为种传病害。病原菌为西瓜嗜酸菌(,Acid,o,vorax citrulli,，简称Ac)，是近年来传入国内的检疫性有害生,物，,1985,年首次被鉴定为,类产碱假单胞菌西瓜亚种,，1992,年被更名为,西瓜细菌性果斑病菌(,Acidovorax,avenae,subsp.citrulli,)。,菌株间存在比较丰富的遗传多样性，可以分为两个亚群，亚群,主要分离自甜瓜、南瓜等，亚群主要分离自西瓜等。,瓜类细菌性果斑病是国内外西,瓜甜瓜上危害最为严重的病害之一。目前除了严格检疫尚无有效防治措施。,1 前 言 瓜类细菌性果斑病（BF,3,1.1 危害症状,图,1,：,瓜类细菌性果斑病发病症状：西瓜子叶(A),西瓜真叶(B),西瓜果实(C),甜瓜真叶(D),甜瓜果实(E),甜瓜果肉(F),1.1 危害症状图1：瓜类细菌性果斑病发病症状：西瓜子叶(A,4,1.2 瓜类细菌性果斑病的发生情况,该病害自1998年在我国首次报道，1,5,年的时间已经遍布了我国许多农业大省。该病最早于1969年由Crall和sehenckt在美国佛罗里达州发现，并对果斑病的症状进行了描述。1985年wall和santos在关岛报道了西瓜细菌性果斑病的发生，并首次将其病原菌鉴定为类产碱假单胞菌西瓜亚种。1992年Willems等人根据西瓜果斑病病原菌的rRNA-DNA和DNA-DNA分子杂交研究结果，将其更名为西瓜细菌性果斑病菌(,Acidovorax,avenae,subsp.citrulli,)。,1.2 瓜类细菌性果斑病的发生情况 该病害自1998年在我国,5,1.3 瓜类细菌性果斑病的防治,关于该病,害的防治方法有,加强检疫、,药剂防治、种子处理、从无病区引种、生物防治、采用抗病品种等。目前应用最广泛的是药剂防治，有效的药剂是铜制剂和抗生素。,5%百菌清1公斤/亩、14%络氨铜水剂300倍液或50%甲霜铜可湿性粉剂600倍液,77%氢氧化铜可湿性微粒粉剂400倍液,用量6075升/亩,连续34次。硫酸链霉素或72%农用链霉素可溶性粉剂4000倍液;40万单位的青霉素甲盐5000倍液。药剂防治方面主要,是,铜制剂,。,1.3 瓜类细菌性果斑病的防治关于该病害的防治方法有加强检疫,6,1.4,本论文,研究,目的及意义,我国的西瓜、甜瓜种植面积和产量都位居世界前列。瓜类细菌性果斑病给我国西甜瓜生产造成了严重危害。用于田间防治果斑病的主要是含铜杀菌剂。随着铜制剂的不断应用病原菌对铜制剂抗性不断增加，而目前国内对果斑病菌菌株之间抗铜性的差异还没有报道，因此本试验对113株菌株的抗铜性进行了研究，阐明菌株间的抗铜性差异，,从而为田间合理使用含铜杀,菌剂提供有力的证据,。,1.4 本论文研究目的及意义我国的西瓜、甜瓜种植面积和产,7,菌株号,采集地点,寄主,分离部位,亚群,分离时间,No.of strain,Location,Host,Organ isolated,group,Time isolated,Aacw1,内蒙古临河市,西瓜,叶片,2002-9-3,Aacw2,内蒙古临河市,西瓜,叶片,2002-9-3,Fc247,United states,西瓜,叶片,2002-9-3,Fc520,United States,西瓜,叶片,2002-9-3,pslb1,内蒙古临河市,甜瓜,叶片,2000-7-14,pslb2,内蒙古临河市,甜瓜,叶片,2000-7-14,pslb3,内蒙古临河市,甜瓜,叶片,2000-7-14,pslb4,内蒙古临河市,甜瓜,叶片,2000-7-14,pslb8,内蒙古临河市,甜瓜,叶片,2000-7-14,pslb9,内蒙古临河市,甜瓜,叶片,2000-7-14,pslb10,内蒙古临河市,甜瓜,叶片,2000-7-14,pslb15,内蒙古临河市,甜瓜,叶片,2000-7-18,pslb19,内蒙古临河市八一乡,甜瓜,叶片,2000-7-18,pslb22,内蒙古临河市八一乡,甜瓜,果实,2000-7-18,pslb23,内蒙古临河市八一乡,甜瓜,果实,2000-7-18,2,材料与方法,2.1,供试菌株,表,1 113,株供试瓜类细菌性果斑病菌菌株,菌株号采集地点寄主分离部位亚群分离时间No.of stra,8,pslb24,内蒙古临河市八一乡,甜瓜,果实,2000-7-18,pslb25,内蒙古临河市八一乡,甜瓜,果实,2000-7-18,pslb28,内蒙古临河市八一乡,甜瓜,果实,2000-7-18,pslb29,内蒙古临河市八一乡,甜瓜,果实,2000-7-18,pslb30,内蒙古临河市八一乡,甜瓜,果实,2000-7-18,pslb31,内蒙古临河市八一乡,甜瓜,叶片,2000-7-25,pslb35,内蒙古巴盟农业多种经营站,甜瓜,子叶,2000-8-20,pslb36,内蒙古巴盟农业多种经营站,甜瓜,子叶,2000-8-20,pslb37,新疆,甜瓜,果实,2000-9-9,pslb38,新疆,甜瓜,果实,2000-9-9,pslb39,新疆呼图壁,甜瓜,果实,2000-9-14,pslb40,新疆呼图壁,甜瓜,果实,2000-9-14,pslb41,新疆呼图壁,甜瓜,果实,2000-9-14,pslb42,新疆呼图壁,甜瓜,果实,2000-9-14,pslb44,新疆,甜瓜,果实,2000-9-14,pslb45,新疆,甜瓜,果实,2000-9-14,pslb46,新疆,甜瓜,果实,2000-9-14,pslb47,新疆,甜瓜,果实,2000-9-14,pslb48,新疆,甜瓜,子叶,2000-9-14,pslb49,新疆,甜瓜,叶片,2000-9-14,pslb52,新疆,甜瓜,叶片,2000-9-14,pslb53,新疆,甜瓜,叶片,2000-9-14,pslb54,新疆,甜瓜,叶片,2000-9-14,pslb60,新疆,甜瓜,叶片,2000-9-14,pslb61,新疆,甜瓜,叶片,2000-9-14,pslb24内蒙古临河市八一乡甜瓜果实2000-7-18p,9,pslb62,新疆,甜瓜,叶片,2000-9-14,pslb63,新疆,甜瓜,叶片,2000-9-14,pslb64,新疆,甜瓜,叶片,2000-9-14,pslb65,新疆,甜瓜,叶片,2000-9-14,pslb68,新疆阿尔泰,甜瓜,叶片,2001-8-26,pslb69,新疆阿尔泰,甜瓜,叶片,2001-8-26,pslb70,新疆阿尔泰,甜瓜,叶片,2001-8-26,pslb71,新疆阿尔泰,甜瓜,叶片,2001-8-26,pslb73,新疆阿尔泰,甜瓜,叶片,2001-8-26,pslb74,新疆阿尔泰,甜瓜,叶片,2001-8-26,pslb75,新疆阿尔泰,甜瓜,叶片,2001-8-26,pslb76,新疆阿尔泰,甜瓜,叶片,2001-8-26,pslb88,内蒙古临河市,甜瓜,果实,2004-8-13,pslb89,内蒙古临河市,甜瓜,果实,2004-8-13,pslb90,内蒙古临河市,甜瓜,果实,2004-8-13,pslb91,内蒙古临河市,甜瓜,果实,2004-8-13,pslb92,内蒙古临河市,甜瓜,果实,2004-8-13,pslb93,新疆五家渠,甜瓜,叶片,2005-7-21,pslb94,新疆五家渠,甜瓜,茎,2005-7-21,pslb95,新疆五家渠,甜瓜,茎,2005-7-21,pslb96,海南,甜瓜,茎,2005-7-21,pslb97,山东,甜瓜,果实,2009-5-4,pslb98,河北乐亭,甜瓜,果实,2009-5-14,pslb99,浙江宁波,甜瓜,果实,2009-5-25,pslb101,海南,甜瓜,果实,2009-11-12,pslb62新疆甜瓜叶片2000-9-14pslb63新疆,10,pslb102,新疆,(222,团,),甜瓜,叶片,2010-7-15,pslb103,新疆,(222,团,),甜瓜,叶片,2010-7-15,pslbtw19,海南文昌,西瓜,嫁接苗,2009-12-10,pslbtw20,海南三亚,西瓜,叶片,2010-4-6,Aac5,台湾,西瓜,叶片,2002-9-3,Aac13,台湾,西瓜,叶片,2002-9-3,Aac14,台湾,西瓜,叶片,2002-9-3,Fc491,Japan,西瓜,叶片,2002-9-3,pslb86,新疆,甜瓜,叶片,2004-7-7,pslbtw2,北京,西瓜,果实,2005-6-13,pslbtw3,北京,西瓜,果实,2005-6-13,pslbtw5,北京,西瓜,果实,2005-6-30,pslbtw6,北京,西瓜,果实,2005-6-30,pslbtw7,北京,西瓜,果实,2005-6-30,pslbtw8,北京,西瓜,果实,2005-6-30,pslbtw9,北京,西瓜,果实,2005-6-30,pslbtw10,北京,西瓜,果实,2005-6-30,pslbtw11,北京,西瓜,果实,2005-6-30,pslbtw14,广东,西瓜,果实,2008-10-24,pslbtw15,山东,西瓜,叶片,2009-5-4,pslbtw16,黑龙江哈尔滨,西瓜,叶片,2009-11-2,pslbtw22,北京大兴,西瓜,果实,2010-6-26,pslbtw23,北京大兴,西瓜,果实,2010-6-26,pslbtw24,北京大兴,西瓜,果实,2010-6-26,pslbtw25,北京大兴,西瓜,果实,2010-6-26,pslb102新疆(222 团)甜瓜叶片2010-7-15,11,pslbtw26,北京大兴,西瓜,果实,2010-6-26,pslbtw27,新疆,打瓜,果实,2010-8-1,pslbtw28,新疆,打瓜,果实,2010-8-1,pslbtw29,新疆,打瓜,果实,2010-8-1,pslbtw30,新疆,打瓜,果实,2010-8-1,pslbtw31,新疆,打瓜,果实,2010-8-1,pslbtw32,黑龙江哈尔滨,西瓜,叶片,2010-8-11,pslbtw33,黑龙江哈尔滨,西瓜,叶片,2010-8-11,pslbtw34,黑龙江哈尔滨,西瓜,果实,2010-9-1,pslbtw35,黑龙江哈尔滨,西瓜,果实,2010-9-1,pslbtw36,黑龙江哈尔滨,西瓜,果实,2010-9-1,pslbtw37,黑龙江哈尔滨,西瓜,果实,2010-9-1,pslbtw38,黑龙江哈尔滨,西瓜,果实,2010-9-1,pslbtw39,海南文昌,西瓜,子叶,2010-11-6,pslbtw40,海南,西瓜,子叶,2010-11-6,pslbtw41,北京大兴,西瓜,子叶,2010-12-24,pslbtw42,北京大兴,西瓜,子叶,2010-12-24,pslbtw43,北京大兴,西瓜,子叶,2010-12-24,pslbtw26北京大兴西瓜果实2010-6-26pslb,12,2.2 供试试剂和仪器,电磁炉，微波炉，高压灭菌锅，超净工作台（北京东联哈尔仪器制造有限公司，DL-CJ-2ND医用型），恒温培养箱（DHP120，上海实验仪器厂有限公司），蛋白胨、琼脂粉、,磷酸氢二钾,、七水合硫酸镁购自北京化学试剂公司,，五水硫酸铜购自天津大学科威公司。,2.2 供试试剂和仪器 电磁炉，微波炉，高,13,2.3 试验方法,2.3.1,不同浓度硫酸铜,KB,培养基配制,用移液枪吸取硫酸铜母液加入溶化的,KB,培养基中，使硫酸铜 的终浓度分别为：,50 g/ml,、,100 g/ml,、,150 g/ml,、,200 g/ml,、,250 g/ml,、,300 g/ml,、,350 g/ml,、,400 g/ml,，,450 g/ml,，,500 g/ml,，,550 g/ml,，,600 g/ml,、,650 g/ml,、,700 g/ml,、,750 g/ml,，混匀后倒平板备用。,2.3.2,接种,活化实验室保存的,113,株果斑病菌株，,28,培养,48h,后，挑取单菌落划线接种于不同浓度的硫酸铜平板上，每个浓度设置,3,个重复，并划线接种于不含硫酸铜的,KB,平板作为对照，,28,培养，,1d,后开始观察，观察,10d,。,2.3 试验方法2.3.1 不同浓度硫酸铜KB培养基配制,14,3 结果与分析,3.1 供试菌株对硫酸铜抗性差异比较,所有菌株对小于300g/ml浓度均不敏感,，,300g/ml浓度时只有pslbtw43菌株表现敏感，在浓度达700g/ml时所有菌株在划线培养10d,后均不能生,长,，,据此推断果斑病菌株对硫酸铜的最大抗性浓度约为,700g/ml。本试验结果与,R.R.Walcott,研究不一致。,3 结果与分析3.1 供试菌株对硫酸铜抗性差异比较,15,表,2,果斑病菌对不同浓度硫酸铜敏感度,Table2 bacteria sensitivity to different concentrations of copper sulfate,菌株号,硫酸铜浓度（,g/ml,）,50,100,150,200,250,300,350,400,450,500,550,600,650,Aacw1,Aacw2,Aac5,Aac13,Aac14,Fc247,Fc356,Fc376,Fc491,Fc520,pslb1,pslb2,pslb3,表2果斑病菌对不同浓度硫酸铜敏感度Table2 bact,16,pslb4,pslb8,pslb9,pslb10,pslb15,pslb18,pslb19,pslb22,pslb23,pslb24,pslb25,pslb27,pslb28,pslb29,pslb30,pslb31,pslb35,pslb36,pslb4pslb8,17,pslb37,pslb38,pslb39,pslb40,pslb41,pslb42,pslb44,pslb45,pslb46,pslb47,pslb48,pslb49,pslb52,pslb53,pslb54,pslb60,pslb61,pslb62,pslb37pslb38,18,pslb63,pslb64,pslb65,pslb68,pslb69,pslb70,pslb71,pslb73,pslb74,pslb75,pslb76,pslb86,pslb88,pslb89,pslb90,pslb91,pslb92,pslb93,pslb63pslb64,19,pslb94,pslb95,pslb96,pslb97,pslb98,pslb99,pslb101,pslb102,pslb103,pslbtw1,pslbtw2,pslbtw3,pslbtw5,pslbtw6,pslbtw7,pslbtw8,pslbtw9,pslbtw10,pslb94pslb95,20,pslbtw11,pslbtw14,pslbtw15,pslbtw16,pslbtw19,pslbtw20,pslbtw22,pslbtw23,pslbtw24,pslbtw25,pslbtw26,pslbtw27,pslbtw28,pslbtw29,pslbtw30,pslbtw31,pslbtw32,pslbtw33,pslbtw11pslbtw14,21,注：“”表示生长，“,”,表示不生长。,pslbtw34,pslbtw35,pslbtw36,pslbtw37,pslbtw38,pslbtw39,pslbtw40,pslbtw41,pslbtw42,pslbtw43,注：“”表示生长，“”表示不生长。pslbtw34,22,3.2亚群和亚群菌株抗铜性差异,在硫酸铜浓度为500g/ml时亚群73%的菌株不能够生长，而亚群菌株在浓度为650g/ml时仍有72%的菌株生长.即亚群菌株抗铜性明显强于亚群菌株，且在试验过程中，亚群菌株的生长速率明显高于亚群菌株。,硫酸铜浓度（,g/ml,）,图,2,亚群和,亚群菌株抗铜差异比较,Fig2 subgroup and copper resistance difference,3.2亚群和亚群菌株抗铜性差异 在硫酸铜浓度为,23,3.3,不同寄主菌株抗铜性差异,图,3,不同寄主菌株的抗铜差异分析,Fig3 Different strains of host resistance to copper variance analysis,3.3 不同寄主菌株抗铜性差异 图3 不同寄主菌株的抗铜差异,24,4 结论与讨论,4.1 结论,本试验通过对比果斑病菌株亚群菌株和亚群菌株、不同寄主菌株抗铜性差异，结果表明:,(1)亚群菌株抗铜性明显强于亚群菌株，且在实验过程中，亚群菌株的生长速率明显高于亚群菌株。,(2)寄主为甜瓜的菌株比其他寄主的菌株有更高的铜抗性。而亚群菌株主要分离自甜瓜、南瓜等，亚群菌株主要分离自西瓜，两组分析得出的结论相符。,本试验为大田中科学合理的防治果斑病提供了理论依据，在喷药过程中，西瓜大田中配制农药浓度低于甜瓜大田，从而可以有效的减缓菌株对农药的抗性提升。,4 结论与讨论4.1 结论,25,4.2 讨论,本试验得出的,瓜类果斑病菌对硫酸铜的敏感浓度明显高于,R.R.Walcott的研究结果。,两试验方法相同且,两研究中来自共同地方的菌株硫酸铜敏感度均与各实验相一致，这就排除了两试验结果不同的地理因素。,结果不一致的可能原因是R.R.Walcott所选的菌株均分离自2000年前，而本试验所选的菌株均分离自2000年后，由于农药的使用、空气污染等使菌株的抗性增加。,本试验所选的113株菌株，来自我国西甜瓜产区的10个省市，试验结果可以体现我国果斑病菌株整体的抗铜特征，具有代表性。,4.2 讨论 本试验得出的瓜类果斑病菌对硫酸铜的敏感,26,致 谢,本论文是在导师高洁的悉心指导下完成的。从论文的选题、实验方案的设计到论文的撰写修改，每个环节都凝聚着赵老师的心血。高老师忘我的工作精神、严谨的治学态度、高尚的人格和平易近人的作风令我终生受益，激励我在今后的工作岗位和人生道路上不断前进与发展。高老师为我的学习付出了大量的心血。衷心感谢高老师在学习和生活上对我的关怀和帮助，在此献上我最崇高的敬意和最诚挚的谢意！,论文完成期间，感谢王雪老师，感谢在实习期间赵廷昌老师、师姐王铁霖、林振亚、杨姗姗、师兄赵文龙、刘慧琴老师在日常的学习生活中给予我点点滴滴的关心和帮助。还有在我周围一直支持我的同学，为我们搜寻就业信息，给我们提供建议。还有团委老师，班委们，他们为我们的学习生活一直忙碌着。,在我的学习生涯中，我成长的每一步都离不开父母的辛勤培养和无私关爱，他们对我的鼓励和支持是我的坚实后盾，在此向他们献上最诚挚的敬意和感谢。,值此毕业之际，衷心感谢所有关心和帮助过我的老师、同学、亲人和朋友，祝福他们身体健康，工作顺利！,最后要感谢陪伴我四年的大学同学，不管我做什么决定都一直支持我，鼓励我，帮助我。,谢谢吉林农业大学，谢谢我周围所有的人，让我的大学生活丰富多彩。,致 谢,27,28,